• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제34권3호
• /
• pp.506-515
• /
• 2024

Primary human dermal papilla cells (HDPCs) are often preferred in studies on hair growth and regeneration. However, primary HDPCs are limited by their reduced proliferative capacity, decreased hair induction potential, and extended doubling times at higher passages. To overcome these limitations, pTARGET vectors containing human papillomavirus16 (HPV16) E6/E7 oncogenes were transfected into HDPCs and selected using G-148 to generate immortalized cells here. HPV16 E6/E7 oncogenes were efficiently transfected into primary HDPCs. Immortalized HDPC showed higher proliferative activity than primary HDPC, confirming an increased proliferation rate. Expression of p53 and pRb proteins was downregulated by E6 and E7, respectively. E6/E7 expressing HDPC cells revealed that cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitor p21 expression was decreased, while cell cycle-related genes and proteins (CDK2 and cyclin E) and E2F family genes were upregulated. Immortalized HDPCs maintained their responsiveness to Wnt/β-catenin pathway and hair follicle formation capability, as indicated by their aggregative properties and stemness. E6/E7 immortalized HDPCs may facilitate in vitro hair growth and regeneration studies.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제27권2호
• /
• pp.101-107
• /
• 2000

야콘의 절편체로부터 탈분화 조건을 규명하고, 잎의 절편체로부터 재분화 및 기내관아 형성조건을 조사하기 위하여 절편체를 배양하였다. 야콘의 잎으로부터 캘러스 형성에 MS배지가 $\frac{1}{2}$MS 및 B$_{5}$ 배지보다 효과적이었다. 잎, 엽병 및 측아 절편체로부터의 캘러스 형성률은 2,4-D 1.0, 2.0 mg/L에 kinetin 또는 BA를 0.2, 0.4 mg/L 혼용처리구가 NAA 1.0, 2.0 mg/L에 kinetin 또는 BA를 각각 0.2, 0.4 mg/L 혼용처리구보다 캘러스 형성률이 높았다. 잎으로부터 형성된 캘러스는 BA 1.0 mg/L처리에서 70%의 캘러스 증식율을 보였다. BA 1.0, 2.0 mg/L 처리 시 계대배양이 약 3~4개월 이상 지속되면서 캘러스 증식과 함께 재분율이 63% 이상 되었으나 kinetin 처리구에서는 관찰할 수 없었다. BA의 첨가에 의해 치상 후 약 3~4개월이 경과하면서 기내 소관아를 형성하기 시작하여 약 5~6개월 후에는 많은 양의 기내관아를 얻을 수 있었는데, BA를 5 mg/L 첨가한 배지에서 82.8%로써 기내소관아 형성률이 가장 높았으며, BA의 함량 증가에 따라 기내소관아 형성률도 증가하는 경향이었다. 그러나 BA의 함량이 5 mg/L이상 증가함에 따라 잎이 두꺼웠으며 줄기는 절간장이 짧고 분화 후에 생육을 지속하지 못하고 고사하였다. 한편, BA를 2 mg/L첨가하고 sucrose 첨가량을 다르게 하였을 경우, 5% sucrose를 첨가한 배지에서 소관아 형성률이 88.0% 로써 일반적으로 사용하는 3% 처리의 60.0%에 비하여 약28%증가하였다. 포장에서 수확한 관아의 액아와 기내관아의 액아의 조직학적 관찰 결과 크기에 차이가 있을 뿐 형태는 같은 것으로 관찰되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제36권2호
• /
• pp.193-196
• /
• 2009

Pinellia koreana K-H Tae & J-H Kim is a recently discovered Korea endemic medicinal plant species whose natural habitat is rapidly destroyed by industrial development. Described in this paper are culture conditions for high frequency plant regeneration via bulblet formation from leaf explant cultures of P. koreana. Leaf explants formed white nodular structures and off-white calluses at a frequency of 91.2% when cultured on MS medium supplemented with 2 mg/L BA and 0.5 mg/L NAA. However, the frequency of white nodular structures and off-white calluses formation was slightly decreased with an increasing concentration of NAA up to 4 mg/L, where the frequency reached 31.7%. Most petiole explants did not form white nodular structures and off-white calluses except the combination treatment of 2 mg/L BA and 2 mg/L NAA. Upon transfer onto MS basal medium, over 90% of nodular structures gave rise to numerous bulblets and developed into plantlets. Plantlets regenerated from bulblets were transplanted to potting soil and grown to maturity at a survival rate of over 95% in a growth chamber. Therefore, the in vitro plant regeneration system of P. koreana obtained in this study will be useful for mass propagation and long-term preservation of genetic resources of P. koreana.

• 한국자원식물학회지
• /
• 제18권3호
• /
• pp.410-416
• /
• 2005

백두산에 자생하는 홍경천의 종자를 기내에서 발아시켜 잎 절편으로부터 캘러스를 유도 할 수 있었으며, 식물생장조절제의 처리로 기관분화도 시킬 수 있었다. 토양순화는 약 8주후면 멸균되지 않은 토양에서도 홍경천의 뿌리활착이 활발함을 알 수 있었다. 캘러스의 유도율은 Kinetin 1 mg/L와 NAA 2 mg/L를 첨가한 배지에서 가장 높은 $98\%$의 캘러스 형성률을 보였다. 캘러스에서 부정아의 유도는 BA가 1 mg/L 첨가된 MS배지에서 $96.6\%$의 높은 부정아형성률을 보였으며 뿌리와 신초의 신장은 옥신은 첨가되지 않은 배지에서 다량으로 유도됨을 관찰할 수 있었다. 토양순화는 $100\%$ 성공적 이었다.

• Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
• /
• 제30권1호
• /
• pp.1-16
• /
• 2004

The use of artificial nerve conduit containing viable Schwann cells is one of the most promising strategies to repair the peripheral nerve injury. To fabricate an effective nerve conduit whose microstructure and internal environment are more favorable in the nerve regeneration than existing ones, a new three-dimensional Schwann cell culture technique using $Matrigel^{(R)}$. and dorsal root ganglion (DRG) was developed. Nerve conduit of three-dimensionally arranged Schwann cells was fabricated using direct seeding of freshly harvested DRG into a $Matrigel^{(R)}$ filled silicone tube (I.D. 1.98 mm, 14 mm length) and in vitro rafting culture for 2 weeks. The nerve regeneration efficacy of three-dimensionally cultured Schwann cell conduit (3D conduit group, n=6) was assessed using SD rat sciatic nerve defect of 10 mm, and compared with that of silicone conduit filled with $Matrigel^{(R)}$ and Schwann cells prepared from the conventional plain culture method (2D conduit group, n=6). After 12 weeks, sciatic function was evaluated with sciatic function index (SFI) and gait analysis, and histomorphology of nerve conduit and the innervated tissues of sciatic nerve were examined using image analyzer and electromicroscopic methods. The SFI and ankle stance angle (ASA) in the functional evaluation were $-60.1{\pm}13.9$, $37.9^{\circ}{\pm}5.4^{\circ}$ in 3D conduit group (n=5) and $-87.0{\pm}12.9$, $32.2^{\circ}{\pm}4.8^{\circ}$ in 2D conduit group (n=4), respectively. And the myelinated axon was $44.91%{\pm}0.13%$ in 3D conduit group and $13.05%{\pm}1.95%$ in 2D conduit group to the sham group. In the TEM study, 3D conduit group showed more abundant myelinated nerve fibers with well organized and thickened extracellular collagen than 2D conduit group, and gastrocnemius muscle and biceps femoris tendon in 3D conduit group were less atrophied and showed decreased fibrosis with less fatty infiltration than 2D conduit group. In conclusion, new three-dimensional Schwann cell culture technique was established, and nerve conduit fabricated using this technique showed much improved nerve regeneration capacity than the silicone tube filled with $Matrigel^{(R)}$ and Schwann cells prepared from the conventional plain culture method.

• 한국자원식물학회지
• /
• 제20권4호
• /
• pp.367-374
• /
• 2007

엽, 엽병과 화뢰 등의 치상 절편체 부위 모두에서 캘러스가 형성되었으며 특히 화뢰에서 캘러스 형성률이 71.6%로 가장 높았다. 화뢰배양시 2.0mg ${\cdot}$ $L^{-1}$ 2,4-D와 1.0mg ${\cdot}$ $L^{-1}$ TDZ의 혼용처리구에서 캘러스 형성이 77.8%로 양호했으며 신초 재분화율 역시 42.6%를 보였다. 캘러스 형성과 신초 재분화를 동시에 시킬 때 1/2 MS배지가 효과적이었는데 1/2 MS배지에서 캘러스 형성률은 46.3%, 신초 재분화율은 13.0%,그리고 발근율은 13.0%를 보였다. 캘러스를 통한 신초의 재분화를 위해 1/2 MS배지에 2.0mg ${\cdot}$ $L^{-1}$ 2,4-D와 1.0mg ${\cdot}$ $L^{-1}$ BA를 첨가했을 때 신초 재분화율은 74.1%를 보였고 절편체당 신초수는 2.4개로 좋았다. 발근율은 대조구에서 57.8%로 낮았으나 1.5mg ${\cdot}$ $L^{-1}$ NAA 첨가된 배지에서 97.8%로 높았다. 재분화된 기내 식물체를 원예용 상토에 순화했을 때 생존률이 86.1%로 높았으며 초장, 근장, 생체중 역시 양호하였다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제26권1호
• /
• pp.59-63
• /
• 1999

국화 '남전'의 기내배양된 엽절편으로부터 신초 기관형성을 통한 효율적인 식물체 재생 체계를 확립하였다. 엽절편으로부터의 부정지 형성은 생장조절제 조성, 잎의 연령, 광조건, 배양용기당 절편체 수 및 치상방향에 의해 많은 영향을 받는 것으로 나타났다. 효율적인 부정지 형성을 위해서는 MS배지에 생장조절제 BA 0.5 ㎎/L 와 NAA 2.0 ㎎/L를 첨가하는 것이 가장 좋았으며, 엽절편체는 완전히 전개된 신초 상부의 1∼2번째 잎을 채취하여 4면을 절단한 다음 잎의 향축면이 배지에 닿도록 하여 Petri-dish당 8개의 엽절편을 치상하여 배양초기 1주간 암조건에서 배양하다가 명조건으로 옮겨주는 것이 가장 효과적이었다. 이와 같은 조건에서 엽절편체로부터 신초 재생률 100%, 절편체당 신초수 13.7개의 양호한 재생 이 이루어졌다. 재생된 신초는 NAA 0.1 ㎎/L를 첨가한 MS배지에서 성공적으로 발근이 이루어져 소식물체가 얻어졌다. 엽절편체로부터 얻어진 소식물체를 인공토양 (Vermiculite: Perlite=1:1)에서 활착시켜 온실에서 재배하였는데, 외견상 정상적으로 개화하였다.

• Molecules and Cells
• /
• 제37권8호
• /
• pp.613-619
• /
• 2014

The optic nerve often suffers regenerative failure after injury, leading to serious visual impairment such as glaucoma. The main inhibitory factors, including Nogo-A, oligodendrocyte myelin glycoprotein, and myelin-associated glycoprotein, exert their inhibitory effects on axonal growth through the same receptor, the Nogo-66 receptor (NgR). Oncomodulin (OM), a calcium-binding protein with a molecular weight of an ~12 kDa, which is secreted from activated macrophages, has been demonstrated to have high and specific affinity for retinal ganglion cells (RGC) and promote greater axonal regeneration than other known polypeptide growth factors. Protamine has been reported to effectively deliver small interference RNA (siRNA) into cells. Accordingly, a fusion protein of OM and truncated protamine (tp) may be used as a vehicle for the delivery of NgR siRNA into RGC for gene therapy. To test this hypothesis, we constructed OM and tp fusion protein (OM/tp) expression vectors. Using the indirect immunofluorescence labeling method, OM/tp fusion proteins were found to have a high affinity for RGC. The gel shift assay showed that the OM/tp fusion proteins retained the capacity to bind to DNA. Using OM/tp fusion proteins as a delivery tool, the siRNA of NgR was effectively transfected into cells and significantly down-regulated NgR expression levels. More importantly, OM/tp-NgR siRNA dramatically promoted axonal growth of RGC compared with the application of OM/tp recombinant protein or NgR siRNA alone in vitro. In addition, OM/tp-NgR siRNA highly elevated intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP) levels and inhibited activation of the Ras homolog gene family, member A (RhoA). Taken together, our data demonstrated that the recombinant OM/tp fusion proteins retained the functions of both OM and tp, and that OM/tp-NgR siRNA might potentially be used for the treatment of optic nerve injury.

• 폴리머
• /
• 제39권3호
• /
• pp.493-498
• /
• 2015

피부재생을 위한 생체재료는 염증반응이 최소화되는 안정한 소재로 빠른 피부재생을 돕기 위해 우수한 생체활성과 생체친화성을 가져야 하며, 세포의 부착과 성장을 돕는 미세구조와 다공성이 있어야 한다. 본 연구에서는 새로운 콜라겐 원으로서의 축산부산물인 오리발을 사용하여 콜라겐을 추출하였고 이를 탈미네랄화된 골분demineralized bone powder, DBP), 돼지 소장점막하 조직(small intestinal submucosa, SIS)과 비교하기 위해 스펀지 형태로 제작하였다. 지지체의 물리, 화학적 특징은 SEM, FTIR을 통해 확인하였다. 세포를 파종하여 MTT를 통해 세포의 부착 및 증식률을 측정하였고, 전염증성 사이토카인의 발현도를 보기 위해 RT-PCR을 실시하였다. 또한 항산화 활성능력을 보기 위해 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)를 측정하였다. 그 결과 오리발 콜라겐 지지체가 물리적 특성이 우수하고 생체적합성이며, 상처 치유제로서의 가능성을 보여주었다.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제44권4호
• /
• pp.448-453
• /
• 2017

본 연구는 꿩고비 포자체의 기내증식을 위한 배양재료 및 배지 구성물질을 구명하기 위해 수행되었다. 포자체의 유묘를 부위별로 나누어 활성탄 0.1%를 첨가한 1/2MS 배지에 다져서 배양한 결과, 근경에서 포자체 재생이 가장 우수하였다. 곱게 다진 근경을 농도를 달리한 MS 배지에 배양한 결과, 1/8MS 배지에서 포자체 형성이 가장 왕성하였으며, 2MS 배지에서는 배양한 절편이 모두 괴사하였다. 상기의 연구를 토대로 1/8MS 배지에 sucrose와 $NaH_2PO_4$의 농도를 조절하여 배양한 결과 sucrose 2%, $NaH_2PO_4\;50mg{\cdot}L^{-1}$에서 포자체 재생이 가장 왕성하였다. 이상의 연구결과, 활성탄 0.1%를 포함한 변형 1/8MS 배지(sucrose 2%, $NaH_2PO_4\;50mg{\cdot}L^{-1}$, agar 0.8%, pH 5.8)에서 포자체 재생이 가장 왕성하였다.