2003.04a
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For the production of
$B^{30}-homoserine$ insulin analog as a novel anti-diabetic drug, the fermentative study was attempted for the maximal gene expression of HTS-fused$B^{30}-homoserine$ insulin precursor in the recombinant Escherichia coli cells. In a batch fermentation, the maximal production of insulin precursor as much as 38.95 mg/L-h, which occupied more than 12.8% of total cell protein. was achieved when the gene expression was induced by 0.5 mM IPTG at the middle logarithmic growth phase. The HTS-fused$B^{30}-homoserine$ insulin precursor was recovered from a batch culture through the processes of cell harvest, collection of insoluble fraction after sonication and purification by nickel affinity column chromatography. The isolated insulin precursor was 14 mg/L with a recovery yield of 35.9% of expressed gene product. The insulin A and B chain mixture was recovered after the insulin precursor was subjected to CNBr cleavage and purified by nickel affinity column chromatography. The isolated insulin chains were then sulfitolyzed with sodium thiosulfat and sodium tetrathionate, and reconstituted to insulin analog with${\beta}-mercaptoethanol$ , followed by purification with CM-Sepharose C-25 column chromatography. -
Soil-borne infectious disease including Pythium aphanidermatum and Rhizoctonia solani causes severe damage to plants, such as cucumber. This soil-borne infectious disease was not controlled effectively by chemical pesticide. Since these diseases spread through the soil, chemical agents are usually ineffective. Instead, biological control, including antagonistic microbe can be used as a preferred control method. An efficient method was developed to select an antagonistic strain to be used as a biological control agent strain. In this new method, surface tension reduction potential of an isolate was included in the ‘decision factor’ in addition to the other factors, such as growth rate, and pathogen inhibition rate. Considering these 3 decision factors by a statistical method, an isolate from soil was selected and was identified as Bacillus sp. GB16. In the pot test, this strain showed the best performance among the isolated strains. The lowest disease incidence rate and fastest seed growth was observed when Bacillus sp. GB16 was used. Therefore this strain was considered as plant growth promoting rhizobacteria (PGPR). The action of surface tension reducing component was deduced as the enhancement of wetting, spreading, and residing of antagonistic strain in the rhizosphere. This result showed that new selection method was significantly effective in selecting the best antagonistic strain for biological control of soil-borne infectious plant pathogen. The antifungal substances against P. aphanidermatum and R. solani were partially purified from the culture filtrates of Bacillus sp. GB16. In this study, lipopeptide possessing antifungal activity was isolated from Bacillus sp. GB16 cultures by various purification procedures and was identified as a surfactin-like lipopeptide based on the Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), nuclear magnetic resonance (NMR), high performance liquid chromatography mass spectroscopy (HPLC-MS), and quadrupole time-of-flight (Q-TOF) ESI-MS/MS data. The lipopeptide, named GB16-BS, completely inhibited the growth of Pythium aphanidermatum, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., and Botrytis cineria at concentrations of 10 and 50 mg/L, respectively. A novel method to prevent the foaming and to provide oxygen was developed. During the production of surface active agent, such as lipopeptide (surfactin), large amount of foam was produced by aeration. This resulted in the carryover of cells to the outside of the fermentor, which leads to the significant loss of cells. Instead of using cell-toxic antifoaming agents, low amount of hydrogen peroxide was added. Catalase produced by cells converted hydrogen peroxide into oxygen and water. Also addition of corn oil as an oxygen vector as well as antifoaming agent was attempted. In addition, Ca-stearate, a metal soap, was added to enhance the antifoam activity of com oil. These methods could prevent the foaming significantly and maintained high dissolved oxygen in spite of lower aeration and agitation. Using these methods, high cell density, could be achieved with increased lipopeptide productivity. In conclusion to produce an effective biological control agent for soil-borne infectious disease, following strategies were attempted i) effective screening of antagonist by including surface tension as an important decision factor ii) identification of antifungal compound produced from the isolated strain iii) novel oxygenation by
$H_2O_2-catalase$ with vegetable oil for antifungal lipopeptide production. -
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본 논문에서는 금속의 표면 플라즈몬 공명으로 인한 금속-유전체 경계면에서의 국소적 전자기장의 강화 효과를 이용하여 표면 플라즈몬을 유발하는 금 박막을 유리 기판위에 증착하고, 프리즘 커플러를 이용한 소산장의 공명 흡수현상을 이차원 영상 으로 얻었다. 특히 DNA/단백질 칩 등 향후 가능한 다채널 시스템에의 응용을 고려하여11-MUA, 11-MUOH 등 자기조립 단분자막(SAM)을 크롬 마스크와 리토그래피, 그리고 Shadow mask와 광 산화반응을 이용하여 금 표면 위에 패터닝 하였다. 텅스텐-할로겐 램프와 중심파장이
${\lambda}_0=633$ nm의 대역통과 필터를 사용하여 이 평행광을 프리즘 커플러에 입사시켜 반사되어 나오는 반사광의 이차원 영상을 얻었다. 이와는 별도로${\lambda}_0=633$ nm의 레이저를 이용하여 단분자막이 코팅되어 있을 때와 없을 때의 공명각의 변화를 관찰하였다. 얻어진 이차원 영상의 위치에 따른 화소 값의 변화를 단분자 막의 두께의 변화에 따라 보정하고, 알려진 매질의 SPR 특성을 Fresnel 방정식에 따라 이론적으로 계산하면 다채널 표면 영상으로부터 항원-항체 등 단백질의 결합 정도를 정량적으로 측정할 수 있다. -
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ALA is an essential intermediate in the tetrapyrrole biosynthesis pathway and has applications as a biodegradable herbicide and insecticide as well as medical applications including photodynamic therapy of cancers. For the development of mass production process of ALA it is necessary to on-line monitor some metabolites such as glycine, succinate, LA and ALA. In this work, medium compositions, pH conditions, induction and addition of LA were investigated to increase the production of ALA by recombinant E. coli. A 2-dimensional fluorescence sensor was used to monitor the processe and the fluorescence spectra were correlated with on- and off-line data like ALAS, ALAD, cell mass etc.
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Gwak, So-Jeong;Kim, Sang-Su;Jeon, Hyeon-Uk;Lee, Yeong-Mu;Park, Mun-Hyang;Song, Gang-Won;Choe, Cha-Yong;Kim, Byeong-Su 92
각질세포의 배양법이 개발 후 피부 결손 부위의 치료에 인체 각질세포를 배양하여 얻어진 표피를 이식하는 방법부터 세포부유물을 도포하는 방법들은 Trypsin 처리 과정을 거치면서배양된 세포의 부착능력을 가진 단백질이 손상되어 성공적인 피부 재생이 불가능하다. 본 실험에서는 이러한 효소처리의 단점을 보완하기 위해서 고분자 미립구에 세포를 효소처리 과정없이 동물실험을 한 결과 21일 후에는 대조군에 비해서 표피가 완벽하게 재생되었고 이식 후 세포의 부착면적을 늘리고 생착율을 높일 수 있었다. 이 연구에서 효소처리 없이 고분자 미립구에서 배양된 세포를 이용한 인공피부 재생이 효과적인 것을 보여주었다. 이러한 모델은 앞으로 화상이나 궤양으로 인한 피부 손실 부위 치료에 사용될 수 있을 것으로 생각된다. -
Ryu, Ju-Hui;Kim, Il-Gwon;Jo, Seung-U;Im, Sang-Hyeon;Yu, Gyeong-Jong;Hong, Yu-Seon;Choe, Cha-Yong;Kim, Byeong-Su 95
본 연구에서는 손상된 심근의 재생을 위하여 골수단핵세포를 SD 래트에 이식하였고 5주 후에 심근의 재생, 신생혈관의 형성과 더불어 심장의 기능이 향상되었음을 확인할 수 있었다. 골수단핵세포를 손상된 심근경색 부위에 넣어주는 것은 추가 보완 실험을 통하여 심근경색의 치료법으로서 이용될 수 있을 것이다. -
합성고분자(PET, ePTFE)로 제작된 기존의 혈관 패치는 혈전생성으로 인한 혈관 막힘 현상과 생체 비적합성으로 인한 석회화 현상 때문에 장기간 혈관 기능을 수행할 수 없다. 본 연구에서는 혈관조직을 형성하는 세포들로 분화가 가능한 중간엽줄기세포와 생체적합성 매트릭스를 이용하여 혈관용 패치를 개발하였다. 이식 후 3주에 관찰하였을 때 조직공학적으로 제조된 혈관 패치는 동물 임상시험에서 혈관막힘 현상 없이 혈관기능을 수행하였고 실제 혈관과 유사한 조직으로 재생되었다. 동물모델에서의 장기간 추가 보완 연구를 거친다면 본 연구에서 개발된 혈관 패치는 기존의 재료를 대체하여 많은 혈관질환 치료에 적용이 가능할 것으로 사료된다.
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To enhance the performance of a serum-free medium (SFM) for human thrombopoietin (hTPO) production in suspension cultures of recombinant Chinese hamster ovary (rCHO) cells, several low-cost hydrolysates such as yeast hydrolysate (YH), soy hydrolysate, wheat gluten hydrolysate and rice hydrolysate were tested as medium additives. Among various hydrolysates tested, the positive effect of YH on hTPO production was most significant. When 5 g/L YH was added to SFM, the maximum hTPO concentration in batch culture was 40.41
${\mu}g/mL$ , which is 11.5 times higher than that in SFM without YH supplementation. This enhanced hTPO production in YH-supplemented SFM was obtained by the combined effect of enhanced$q_{hTPO}$ and increased culture longevity. In addition YH supplementation did not affect in vivo biological activity of hTPO. Taken together, the results obtained demonstrate the potential of YH as a medium additive for hTPO production in serum-free suspension cultures of rCHO cells. -
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Type strain, Methylosinus trichosporium OB3b, was used to convert methane to methanol. To prevent further oxidation of methanol, NaCl and EDTA were used as inhibitors of methanol dehydrogenase. The reaction temperature was
$25^{\circ}C$ , and the concentrations of cell and sodium formate added to the reaction mixture were 0.6 mg dry cell wt/ml and 20 mM, respectively. During 12hr reaction, 8 mM methanol was accumulated in the reaction mixture. In this reaction$K_m$ and$V_{max}$ values were found to be 532.6 mM and 1.749 mmol/hr, respectively, and the conversion rate was approximately 37%. To increase the concentration of methanol in the medium, a repeated batch reaction was carried out. In this process, methane was injected every eight hours, and the produced methanol concentration was 18 mM. -
Enzymatic polymerization of cardol derived from cashew nut shell liquid have been examined. t-Butyl alcohol aqueous systems showed high yield of polycardol when SBP was as biocatalyst. Compared other solvents, peroxidase actiyity was maintained stable, which was seemed major cause. Solvent aqueous system and concentration of hydrogen peroxide were found to have an influence on the yield and molecular weight distribution of polycardol under the reaction of enzymatic polymerization using peroxidase. The polymer was subjected to the hardening by methyl ethyl ketone peroxide and cobalt naphthenate catalyst, giving a crosslinked tough film. Polycardol was cured rapidly and the hardness increased with time. Finally, the pencil scratch hardness reached to 7H, which is enough hard for industrial uses.
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The effect of microwave irradiation on waste activated sludge was investigated in order to improve solubilization. a different levels of microwave irradiation time were varied within a range from 1 min to 15 min. When WAS was pretreated at 1, 3, 5, 7, and 15 min, the SCOD concentration increased according to microwave irradiation time. A simple batch procedure was used to measure the VFA potential, i.e. the amount of VFA that can be formed through digestion of organic constituent in sludge. At equilibrium point, TVFA in the case of 1, 3, 5, 7 and 15 min microwaved sludges was 8%, 122%, 243%, 279% and 232% higher than that in the case of raw sludge, respectively.
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Acaricide effect against Tetranichus urticae, Myzus persica, Spodoptera litura and Plutella xylostella with the Ginkgo biloba leaves extracts was reviewed. This result was motality 74.3%, 88.7% respectively, after tretment 24hr, 72hr about
$80^{\circ}C$ water extract(GLW80, 1%) of Tetranichus urticae and the insecticide took effect showed its effect in some 50% against the other three. But, motality of Tetranichus urticae against 10% GLW80 showed its 90.6%, 98.3% after tretment 24hr and 48hr. -
$NaNO_3$ 와 urea 농도를 달리하며 S. Platensis 성장 실험을 진행한 결과 각각의 농도가 높아질수록 urea가 S. Platensis 성장에 저해작용이 큼을 알 수 있다. -
DHA의 산화를 방지하기 위하여 vitamin C/alginate 리포솜에 병합시켰다. TEM을 통하여 제조된 AVDLs를 확인할 수 있었고, TLC를 통하여 각각의 AVDLs는 초기 첨가량의 15
${\sim}$ 18 % DHA를 함유하고 있음을 확인하였다. TBARS assay에 의해$40^{\circ}C$ 에서 AVDLs에 포함된 DHA의 산화정도를 분석한 결과 vitamin C를 포함한 리포솜이 DHA의 산화를 억제하는 것으로 확인되었으며 0.2 % vitamin C를 포함한 AVDLs가 항산화 효과가 가장 큼을 알 수 있었다. AVDLs는 실험에서와 같은 산화조건에서 DHA의 산화를 초기 3일까지는 억제시킴을 알 수있었다. -
본 연구에서는 담자균류의 일종인 Tricholoma matsutake의 균사체 생육과 polysaccharide 생산을 최적화하기 위하여 5L jar fermentor에서 교반속도와 통기량의 영향을 검토하였다. 교반속도는 150 rpm에서 가장 좋은 결과를 보였으며, 균체량은 배양 10일째 21.87 g/L, polysaccharide는 교반속도는 300 rpm에서 배양 8일째 8.86 g/L 로 가장 높은 값을 나타내다. 통기량은 11일째 0.5 vvm에서 가장 좋은 균체량 20.85 g/L, polysaccharide는 1.5vvm에서 배양 11일째 8.83 g/L로 가장 높은 값을 나타내었다.
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The MRS medium is widely used as an optimized medium for the growth of Lactobacillus spp. and also used for the growth of Leuconostoc spp. Leuconostoc mesenteroides shows quite different physicochemical properties compared to Lactobacilli spp. and it is one of the major strain of kimchi fermenting microorganisms with its usefulness in our traditional foods and availability in biotechnology in the future, specifically tailor-made medium is necessary for the growth of Leuconostoc mesenteroides. Sequential experimental designs (Plackett-Burman, fractional factorial, steepest ascent, central composite design and response surface methodology) were introduced to optimize and improve the Leuconostoc medium. Fifteen medium ingredients were investigated and fructose, sodium acetate and ammonium citrate were determined to give a critical and positive effect for cell-growth. The yield of biomass using the optimal medium was improved more than that of the MRS medium and the result of fed-batch culture showed the capability of the improvement in cell mass similar to the E.coli system.
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ALA is an intermediate in the tetrapyrrole biosynthesis pathway and has extensive applications as a biodegradable herbicide and insecticide as well as medical applications including photodynamic therapy of cancers. For the development of mass production process of ALA it is necessary to on-line monitor some metabolites such as glycine, succinate, LA and ALA. In this study, medium compositions and fermentation conditions were investigated for enhancement of ALA production by recombinant E. coli. A 2-dimensional fluorescence sensor was employed to monitor the bioprocess of ALA production. The monitored data is analyzed using principal component analysis, a powerful tool for multivariate statistical analysis.
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Kim, Ji-Seong;Gong, Gyeong-Taek;Park, Dae-Won;Sim, Sang-Jun;Park, Tae-Hyeon;Jo, Gyeong-Suk;Jeong, Yun-Cheol 162
수소를 생산하는 암반응에서는 pH와 dry cell weight, 세포내의 starch 함유량이 시간에 따라 줄어들었다. 유기물은 시간에 따라 증가하였지만, 수소는 3일째에 생산이 최대치에 도달하였다. -
Jeong, Gwi-Taek;Yun, Dae-Hyeon;Gang, Chun-Hyeong;Choe, Byeong-Cheol;Lee, Un-Taek;Park, Don-Hui 164
유채유를 사용하여 바이오디젤 생산을 위한 1단 전이에스테르화 공정에 있어서 반응온도$60^{\circ}C$ , 유지에 대한 메탄올 몰비 1:10 이상, 1.0 % (w/w) 포타슘 하이드록시드의 조건에서 98.5% 이상의 전화율을 얻을 수 있었다. -
Kim, So-Yeong;Lee, Jae-Yong;Son, Seok-Min;Lee, Gi-Yeong;Lee, Geon-Sun;Kim, Hong;Chae, Hui-Jeong 171
Animal excreta is a useful fertilizer, because it has useful nourishments, microelements and three requistes of fertilizer(nitrogen, phosphorus, potassium). But, it has some problems such as generation of bad smell and excess of nitrogen. In this study, a biological tool using microorganisms was investingated. First, 61 species were isolated from soil sample. The enzyme activities of the strains such as protease, cellulase, amylase and lipase were analysed. And from a deodorization test using the isolated strains and finally three strains were selected(NA 2, NA 12, NA 15). The optimal media composition and incubation pH were statistically determined using surface-response method. -
농촌진흥청, 사천성, 산동성의 곰보버섯 균주의 최적 배양조건을 찾기 위해 배지, 탄소원, 질소원을 변화시켜 살펴본 결과는 다음과 같다. 배지에서 RDA와 SCP는 YSB 배지에서 각각 0.250 및 0.350 g을 보였으며, SDP는 Czpek 배지 0.294 g의 최대 생산량을 보였으며, 탄소원에서 RDA은 최대 균사체 성장이 maltose에 의해 0.272 g, SCP의 경우는 fluctose에 의해 0.420 g, SDP는 mannitol에 의해 0.385 g의 생산량을 보였다. 질소원에서 RDA은 최대 균사체 성장이 Yeast extract와
$NH_4Cl$ 에 의해 0.325 g, SCP의 경우에는 Yeast extract에 의해 0.412 g, SDP의 경우에는 Asparagine,$NH_4Cl$ 에 의해 0.435 g의 생산량을 보였다. 또한 최적 온도는$25^{\circ}C$ 였으며, PH는 5.5 - 6.5 사이로 나타났다. 버섯 및 질소원에 따라$NH_4Cl$ 을 추가했을 때 성장된 균사체의 양은 다르게 나타나 이에 대한 연구는 추가적으로 진행되어야 할 것으로 사료된다. -
Kim, So-Yeong;Jeong, Hae-Yeong;Jo, Cheol-Hui;Park, Geun-Hyeong;Son, Seok-Min;Lee, Gi-Yeong;Lee, Geon-Sun;Kim, Hong;Chae, Hui-Jeong 180
선별된 7종의 균주는 넓은 범위의 산과 담즙산에 대해 기존에 보고된 결과에 비하여 높은 내성을 나타냈고, 장내세균인 E. coli에 대해서도 우수한 항균력을 나타냈고, 항생제 tetracycline, nisin, kanamycin, ampicillin. streptomycin에 대해서도 높은 내성을 보였다. 또한 7종의 균주는 어느 정도의 산을 생성하고 있었고, 네 가지 효소 amylase, protease, lipase, cellulase에 대해서도 높은 활성을 나타냈다. 균주 특성실험 결과, 7종의 균주는 그람음성균으로 모두 구형, 비운동성이고 균체의 색은 노란색이거나 흰색을 띠고 있고, 다양한 유기물에 대하여 분해력을 지니고 있었다. -
The possible inhibitory effect of wood hydrolyzate in lactic acid fermentation was partially decreased by adaptation of Enterococcus faecalis RKY1 to wood hydrolyzate-based medium. The strain RKY1 grown on wood hydrolyzate-based medium was tolerant to wood hydrolyzate medium with fermentation efficiency being improved to approximately 20% higher than that obtained with the strain RKY1 grown on glucose-based medium.
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의학 및 해양 수산 분야에서 광범위하게 사용되어지고 있는 글루타치온을 생산하는데 보다 적절한 배양 배지를 찾기 위해 당 농도, cysteine 농도변화에 따른 글루타치온의 생산성을 살펴보았으며 특히 형광 센서를 이용하여 글루타치온의 생산 특성을 모니터링하였다.
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Lee, Se-Yeong;Kim, Jong-Deok;Kim, Min-Yong;Kim, Eun-Ok;Im, Jong-Gwon;Hwang, Seon-Yeong;Gong, Jae-Yeol 195
The growth of S. aureus was inhibited by combination of natural products bearing antioxidative capacity and combined two, three and four kinds of them. S. aureus was controlled by Paeonia Japonica, Galla Rhois, Geranii Herba, alone, and two mixed combinations of Paeonia japonica and Scutellaria Baicalensis George, Paeonia japonica and Theae Folium, Paeonia japonica and Chelidonium Majus L, Paeonia japonica and Geranii Herba, Paeonia japonica and Schizandrae Fructus, and three mixed combinations of Paeonia Japonica and Scutellaria Baicalensis George and Geranii Herba, Paeonia Japonica and Scutellaria Baicalensis George and Chelidonium Majus L., Paeonia Japonica and Scutellaria Baicalensis George and Theae Folium, and four mixed combinations of Scutellaria Baicalensis George and Chelidonium Majus L. and Theae Folium and Schizandrae Fructus, Paeonia Japonica and Scutellaria Baicalensis George and Chelidonium Majus L. and Schizandrae Fructus, Scutellaria Baicalensis George and Geranii Herba and Theae Folium and Schizandrae Fructus. As these combinations of natural products will activate some parts of body, they may be applied to pharmaceutical applications, functional foods, antiaging tea, also expected to control bacterial growth for fermentative beverage bearing multifunction. -
In this study, succinic acid production using fumaric acid fermentation broth was investigated. We tried to produce fumaric aicd from glucose by Rhizopus oryzae and then convert fumaric acid fermentation broth into succinic acid by Enterococcus faecalis RKY1. Conversion ratio of succinic acid was more than 0.90 g/g-fumaric acid. Furthermore, we optimized conditions of conversion from fermentation broth. As a result, when fumaric acid fermentation broth for succinic acid production was employed, we could decrease the amount used of glycerol and yeast extract.
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Kim, Tae-Jin;Lee, Dong-Wan;Park, Jong-Man;Gang, Su-Jeong;Lee, Jae-Yeong;Kim, Cheol-Gyeong;Go, Chang-Ung;Kim, Nam-Gi 204
Pullulan as useful biopolymer has been focused on its industrial production. The objectives of this thesis were to enhance the production of pullulan for the industrial production and to characterize pullulan physical properties. In order to find the economical optimum of the fermentation conditions and promote pullulan productivity, effect such as the carbon source, pH have been estimated and measured molecular weight of produced pullulan. -
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본 연구는 고수율의 아라비녹실란을 얻기위해 필수요소인 Lentinus edodes의 액체배양을 통해 생산되어지는 탄수화물 복합효소의 생산수율을 증대시키는데 그 목적이 있다. 그러기 위해 탄수화물 복합효소의 생산에 배지성분이 미치는 영향을 검토 하였다.
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The effects of glucose concentration on the production of PHB by fed-batch culture of Ralstonia eutropha were investigated. In the range of glucose concentration of
$2.5\;{\sim}\;40\;g/l$ , it was found that the high glucose concentration was not favorable for the PHB formation after the phosphate limitation. It was further confirmed by the specific PHB synthesis rates and yields. The PHB concentration decreased much with the increase of glucose concentration. But if the glucose concentration was very low, e.g. 2.5 g/l, the cell growth and PHB synthesis also could be limited because of inadequate glucose supply. Itwould be better to maintain the glucose concentration at about 9.0 g/l to obtain high DCW, PHB concentration and productivity. -
Lactic acid fermentation from sucrose as a carbon source was experimented. E. faecalis RKY1 metabolized sucrose efficiently into lactic acid through homolactic fermentation pathway. The optimal sucrose concentration for lactic acid production was found to be 150 g/l with the yield and productivity of 0.97 g/g and
$3.7\;g/l\;{\cdot}\;h$ , respectively. Lactic acid produced from sucrose was almost L(+)-lactic acid up to 98% based on total lactic acid produced. Therefore, sucrose was thought to be potential carbon source for L(+)-lactic acid production using E. faecalis RKY1. -
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Song, Seong-Gi;Kim, Gyeong-Hui;Kim, Myeong-Jin;Lee, Sang-Jong;Jang, Yong-Geun;Jeong, Yeon-Ho;Jeong, Yong-Seop;Jeon, Gye-Taek 223
Mevinolic acid (MA), a secondary metabolite produced by a filamentous fungus Aspergillus terreus, is acidic form of lovastatin which has been identified as a powerful cholesterol-lowering agent in humans. When immobilized cell culture was performed, MA production was about 5.3-fold higher than the parallel suspended cell culture. Although the immobilized cells proliferated slowly during exponential in comparison with the suspended cells, oxygen uptake rate and oxygen mass transfer coefficient of the immobilized cell culture were about 1.3- and 2.5- fold higher respectively than those of the parallel suspended cell culture. From these results, it was concluded that MA biosynthesis was closely dependent on the cell growth rate, morphology and oxygen availability. -
Kim, Je-Gyeong;Kim, Gyeong-Hui;Kim, Hyeon-Suk;Lee, Sang-Jong;Jang, Yong-Geun;Jeong, Yeon-Ho;Jeong, Yong-Seop;Jeon, Gye-Taek 228
Lovastatin produced by Aspergillus terreus via polyketide pathway is a secondary metabolite with high anti-hypercholesterolemic activity. In this paper we are going to present effective strain development strategies for lovastatin production by comparing the productivity of the mutants obtained through traditional rational screening process and protoplast fusion method. Mutants resistant against various antibiotics and/or antimetabolites showed significantly higher lovastatin productivity than the corresponding mother strains, demonstrating that rational screening method was very efficient in selecting high yielding producers. Recombinant fusants obtained using protoplast fusion between high producers were observed to have very different morphology and physiology as represented by the production and secretion of lovastatin, as well as cell growth pattern. In parallel with the strain development, optimization process for the production medium was carried out in order to find optimal concentrations of the medium components using such a powerful statistical method as response surface method (RSM). It was concluded that not only the optimum production medium but also good morphological characteristics of the high-yielding producers led to higher lovastatin production. -
본 연구에서는 산업적으로 중요성이 날로 증가하고 있는 PLC의 대량 생산을 위해서 B. cereus ATCC10987에서 분리된 PLC 유전자를
$pPICZ{\alpha}$ C에 삽입한 P. pastoris system을 개발하여 extracellular PLC를 생산하였다. 또한, 여러 조건에서 B. cereus와 P. pastoris에서 생산된 extracellular PLC의 활성도를 측정하여 특성을 살펴보았다. -
생물반응기를 이용한 회분배양에서 균체량 생산에 있어서 조건은 200 rpm, 1 vvm 으로 선정하였으며, 이때 균체량은 11 g/L이었고, polysaccharide는 0.6 g/L이었다. 또한 pH를 초기 pH인 5.5로 고정하여 배양한 결과 pigment들로 인한 균사체의 활성이 떨어지는 것으로 나타났다 균체량을 증가시키기 위한 최적의 회분배양 조건에서는 초기 200 rpm으로 배양을 시작하여 300 rpm으로 증가시키고 glucose 5 g/L를 간헐적으로 첨가함으로써 균체량은 24.2 g/L, polysaccharide는 2.2 g/L로 나타났다. 또한 erinacine A의 분석은 HPLC를 사용하였으며 배양 4.5일째 균사체로부터 추출하여 mobile phase를 Methanol/water (9:1)로 flow rate은 0.7 ml/min으로 실험한 결과 erinacine A는 0.4 mg/g cell 로 측정되었다.
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Lee, Baek-Seok;Lee, Jae-Woo;Shin, Haw-Shook;Choi, Sung-Won;Choi, Ki-Hyun;Lee, Jae-Ho;Kim, Eun-Ki 240
A novel integrated method for increasing dissolved oxygen concentration in culture media has been developed. It involves adding hydrogen peroxide to the medium, which is then decomposed to oxygen and water by catalase and adding vegetable oil to the medium as antifoam agent and oxygen vector. A new apparatus for automated addition of hydrogen peroxide to the bioreactor to keep the dissolved oxygen concentration constant over the range$10-100%\;{\pm}\;5%$ was tested. A significant increase (over threefold) of cultivation time was obtained while the dissolved oxygen concentration remained stable ($30%\;{\pm}\;5%$ ). Therefore, use of corn oil mixed with Ca-stearate as oxygen vector and antifoam and hydrogen peroxide as oxygen source to control excessive foam that was generated by microorganism biosurfactant, GB16-BS produced at Bacillus sp. GB16 cultivation was appropriate for stable cultivation. -
As a result of broth substitutions when each culture-mediums were difference, whole culture-medium was found to be best feeding solution for production of PS-7 by B. indica. Maximal production of PS-7 was 1
$10.0\;g/{\ell}$ and its conversion rate from 2% (w/v) glucose to PS-7 was 50%. After 48 hr, 50%(v/v) medium of working volume began to substitute in 7L jar fermenter. Production of PS-7 increased after 48hr, recovered productivity of PS-7. Following this preliminary culture, the resultant culture was subjected to continuous flow conditions controlled that the dilution rate were$0.01\;{\sim}\;0.04\;h^{-1}$ . Production of PS-7 increased at dilution rate$0.0100\;h^{-1}$ whereas productivity of PS-7 decreased gradually in dilution rate$0.0200\;{\sim}\;0.0400\;h^{-1}$ . Maximal production of PS-7 was$10.0\;g/{\ell}$ in continuous culture. -
Maximal production of heteropolysaccharide-7(PS-7) with a batch culture for 48 hr was
$10.0\;g/{\ell}$ and its conversion rate from 2% (w/v) glucose to PS-7 was 50%. After substitution of media, production of PS-7 continued and reached its maximal production. The highest productivity occurred when the fresh medium, which contained all ingredients, for the production of PS-7 was substituted. Higher production of PS-7 was maintained at a dilution rate of 0.0125, which was established as the optimal dilution rate for the production of PS-7 by B. indica HS-2001. -
In batch culture of A. pullulans HP-2001, maximal production of pullulan was 57.90 g/l at 96 hr. The maximal production of pullulan with 76.55 g/l occurred when substituted solution was 10% (w/v) sucrose, 0.25% (w/v) yeast extract and mineral salts. The maximal production of pullulan was 75.00 g/l with a dilution rate of
$0.015\;h^{-1}$ . Productivity of pullulan in the continuous culture fed with the fresh medium was higher than that fed with the fresh medium without nitrogen source. -
본 연구는 고수율의 아라비녹실란을 얻기 위해 필수요소인 hemicellulose B의 회수율을 검토하였다. 검토결과 10% acetic solution으로 pH 4.2로 적정 후 반응시키는 단계에서의 온도를
$65^{\circ}C$ , 에탄올 침전단계에서 3 volume일 때 가장 좋은 수율을 얻었다. -
감미제로 많이 사용되고 있는 약용식물 중 대추와 감초, 황기로부터 기능성 천연 감미료를 얻기 위해 에탄올과 물을 추출용매로 사용하여 당류가 포함된 시료를 얻었다. 이들 시료에 대한 감미효과를 구체적으로 알아보기 위해 당 분석 및 난충치성 실험을 실시한 결과 황기와 감초에서 산생성력과 dental plaque의 수치가 낮게 나타나 기능성 천연 감미료를 얻을 수 있는 약용식물로 판단된다.
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백화사설초에 함유되어 있는 oleanolic acid를 세포배양을 이용하여 생산하기 위한 연구를 수행하였다. Oleanolic acid를 생산하기 위해, 백화사설초의 캘러스와 현탁세포를 2,4-D 0.5 mg/L, kinetin 0.1 mg/L가 포함된 SH 배지에서 유도하였다. Oleanolic acid의 분석을 위해, Rexchrom S5-100-ODS column을 사용한 HPLC를 이용하였다. 분석 결과, oleanolic acid의 retention time은 12.6분 이었고, 그 양은 0.41 mg/g dry weight였다.
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통계실험계획법 중 하나인 Plackette-Burman법을 사용하여 실험을 설계하였으며, 수행된 실험을 통하여 6가지 인자 중 main effect의 절대값이 높은 당, nitrogen, 온도를 최종 선정할 수 있었으며, main effect 값이 양의 값을 가지는 당과 nitrogen은 첨가 농도가 높을수록, 음의 값을 가지는 온도는 낮을수록 실험에 유리하다는 것을 확인할 수 있었다.
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헛개나무의 추출물을 이용하여 alcohol과 acetaldehyde, fusel oil류 대한 분해효과를 검정한 결과 alcohol 분해 및 숙취해소에 효과가 높은 것으로 확인하였으며, 체내 독성물질 제거를 위한 GST activity를 측정한 결과 헛개나무 추출물이 GST 효소와 비교 시 약 2배 정도의 활성을 나타내었다. 또한 헛개나무 추출물의 간암세포의 성장에 미치는 효과를 알아본 결과
$1\;mg/m{\ell}$ 에서 간암세포의 성장을 억제하는 것을 확인하였다. -
본 연구에서는 hGM-CSF를 생산하는 형질전환된 담배세포배양에서 ultrasound가 세포생장과 hGM-CSF 생산에 미치는 영향을 조사하였다. 세포의 생장은 ultrasound에 노출된 직후 약간의 저해를 보이지만 2일후에 정상의 세포와 비슷한 수준으로 회복되었다. 세포 외부로 분비되는 hGM-CSF는 ultrasound에 노출된 직후 증가하고 그 이후 감소하다 배양후반에 증가를 보였다. 세포내부에서 생산되는 hGM-CSF는 ultrasound 처리 이후 전반적으로 대조구보다 많이 생산됨을 보였다. 총 생산된 hGM-CSF는ultrasound에 노출 시킨 배양 6일째
$34.9\;{\mu}g/L$ 로 최대였으며 대조구보다 31.5%의 증가를 보였다. -
형질전환된 담배세포배양을 이용한 hGM-CSF 생산에 있어 고정화가 미치는 영향을 연구하였다. Alginate bead를 이용한 고정화 세포의 경우 hGM-CSF 생산이 6일째
$3.35\;{\mu}g/L$ 로써 현탁세포$6.01\;{\mu}g/L$ 의 약 50%에 미쳤고 polyurethane foam 내 고정화 한 경우는 세포 생장은 낮았으나 hGM-CSF 생산량은 6일째$6.67\;{\mu}g/L$ 로 가장 높았다. 높은 비 생산량을 보이는 polyurethane foam내 고농도로 세포를 포집시킨 후 세포 재사용이 용이한 장점을 이용하여 연속공정에 적용할 경우 더 높은 hGM-CSF의 생산이 기대된다. -
본 연구에서는 형질전환된 N. tabacum 배양에 있어서 glutathione과 ascorbic acid가 세포 생장과 생존율에 미치는 영향을 비교하여 실험하였다. Glutathione과 ascorbic acid의 첨가는배양초기 세포 생존율의 감소를 완화시켰으며, 그로인한 재조합 단백질의 생산성 증대를 확인할 수 있었다. 또한 glutathione과 ascorbic acid를 첨가하여 배양한 세포는 cold stress로 인한 세포 생존율의 감소와 DNA 절편화를 억제 시키는데 효과가 있었다. 변형시킨 FDA법에 의한 세포 생존율은 배양 6일째 최대를 보였으며, 고 삼투압 배지와 저온의 환경은 세포 생존율을 저하시켰다. 반면 cold stress 전에 glutathione과 ascorbic acid를 첨가하여 배양한 세포의 생존율은 cold stress 후, 대조구 세포보다 높게 유지되었으며, DNA 절편화 현상도 cold stress 후, 대조구 세포보다 적게 일어남을 확인하였다. 따라서 glutathione과 ascorbic acid는 cold stress로 의한 세포 생존율 저하를 완화시키며, apoptosis 억제 효과가 있다고 판단된다.
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Sin, Yeon-Ho;Seo, Yeong-Gwon;Lee, Du-Hun;Yu, Bo-Yeong;Song, Gye-Yong;Seo, Seong-Jun;Hwang, Seong-Ju;Kim, Yeong-Jin;Yang, Eun-Gyeong;Park, Jang-Seo;Jang, Lee-Seop;Park, Jeong-Geuk 302
It is difficult to obtain sufficient healthy skin for coverage of a wide area of skin wound. In the skin, an additional population of living epithelial cells is located in the outer root sheath (ORS) of hair$follicles.^{1),2)}$ ORS cells should be a good source of epithelium because they are easily obtainable and patients do not have to suffer from scar formation at donor sites. We modified ordinary primary culture technique for the purpose of solving such problem that epithelial cells have a low propagation and easy aging during culture periods. First of all, we improved primary cultivation methods. In the ordinary primary culture, average yield of human ORS cells was$2\;{\times}\;10^3$ cells/follicle by direct incubation with trypsin (0.1%)/EDTA (0.02%) solution for 15 min at$37^{\circ}C$ but we could obtain about$6.5\;{\times}\;10^3$ cells/follicle by two step enzyme digestion method with dispase (1.2 U/ml) and trypsin (0.1%)/EDTA (0.02%) solution. So we could achieve three times higher primary cultured ORS cell yield. Secondly, we could obtain total$2\;{\times}\;10^7$ cells in serum free medium and even more total$6\;{\times}\;10^7$ cells in modified E-medium with mitomycin C-treated feeder cells during 17 days. Using the cultured ORS cells, and we could make bioartificial skin equivalent in vitro and concluded that ORS cells were progenitor cells for skin epithelial cell. -
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본 연구에서는 신장세포를 이용하여 신장을 재생하는 조직공학적인 신장 재생방법을 개발하기 위해 신장세포를 생분해성 고분자인 PGA 스캐폴드에 부착시켜 루이스 래트의 신장에 이식하였고, 4주 후에 사구체와 세뇨관 유사 구조의 형성을 확인하였다. 앞으로 형성된 신장조직이 이식된 세포로부터 재생된 것인지에 대한 추가적인 확인실험이 필요하다.
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Under hyperosmotic stress, rCHO cells display decreased specific growth rate
$({\mu})$ and increased specific antibody productivity$(q_{Ab})$ . The effects of hyperosmotic stress on batch culture cellular dynamics are not well understood. To this end, we conducted a proteome profile of rCHO cells, using 2D-gel, MALDI-TOF-MS and MS/MS. As a result, the proteome profile of rCHO cells could be established using 41 identified proteins. Based on this proteome profile of rCHO cells, we have found at least 8 differently expressed spots at hyperosmotic osmolality (450 mOsm/kg). Among these spots, two metabolic enzymes were found to be up-regulated (pyruvate kinase and GAPDH), while down-regulated protein was identified as tubulin. It shows that hyperosmotic stress can alter metabolic state, by up-regulated activities of two glycolysis enzymes, which could lead to activate the generation of metabolic energy. Tubulin expression was down-regulated, suggesting a reduction of cell division. Finally, the increased conversion energy could leads to improve overall productivity. -
A novel method is developed to yield virus titers in 10 h, is easy to .perform using 96-well plates, and applicable to both any Autographa californica nucleopolyhyderovirus (AcNPV) and Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV)-based recombinant baculovirus. This assay uses an antibody to a DNA-binding protein to detect the infected cells via immune-staining. The titer is determined by counting foci produced due to infection of virus under a fluorescent microscopy. The required incubation period was shortened considerably because infected cells expressed viral antigens at the post infection time of 4 h. Therefore, 10 hours were enough to estimate the virus titer including virus infection time, insect cell culture, and estimation of virus titer.
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Jung, Hee-Young;Kang, Seung-Mi;Kang, Young-Min;Kim, Won-Jung;Min, Ji-Yun;Yun, Dae-Jin;Bahk, Jung-Dong;Choi, Myung-Suk 321
Hyoscyamine and scopolamine are the pharmaceutically valuable anticholinergic drugs. The aim of our study is to increase the contents of both hyoscyamine and scopolamine by means of elicitation. Various biotic elicitors derived from 3 fungi and 1 yeast were inoculated to the hairy root cultures. When homogenate and supernatant of elicitors treated with hairy root cultures, that of yeast elicitor was only increased scopolamine production. However, all of the fungal elicitors did not influenced the productions of scopolamine and hyoscyamine. Our results will contribute to mass production of tropane alkaloids by hairy root cultures of Scopolia parviflora. -
본 연구에서는 수질정화능력이 뛰어난 것으로 알려진 D회사의 광합성세균 및 그 겔제품의 탈질특성을 알아 보았고, 실제적용을 위한 해수농도 (3.5% NaCl)에서의 이용 가능성 여부도 알아보았다. 각 염농도별(0, 1, 2, 3.5%) 평균 최대 비증식속도는 각각 0.22, 0.22, 0.20,
$0.11\;h^{-1}$ 로 계산되었다. 또한, 낮은 pH에서 배양할 경우 성장에 상당한 영향을 받음을 알 수 있었다. 고정화 비-드의 경우, 최대$N_2$ 생성율$(dN_2/dt)$ 는 각각 0.09-0.10 (직경 0.7cm), 0.09-0.11(직경 1.0cm) ml/h로 계산되었고, 비-드 당 평균$N_2$ 생성율$(dN_2/dt)$ 은 각각 5,$5.5\;{\mu}l$ /h/bead이었다. D 광합성세균과 탈질미생물간의 두 균 사이에는 어떠한 길항작용도 없었다. -
단백질 농도가 증가할수록 포말생성 높이가 높게 형성되었으며 공기 분산기의 기공크기가 작아질수록 포말생성 높이가 높아지는 것으로 나타났다. 또한 공탑공기유속이 증가할수록 포말생성 높이도 증가했으나 0.84 cm/sec 이상에서는 포말생성 높이가 거의 일정하였다. pH의 영향에서는 강산에서 가장 높은 포말생성 높이를 보여주었고 중성인 pH 7 부근에서 포말생성 높이가 회복되었다. NaCl과
$NaHCO_3$ 의 염 농도에 대한 영향에서는 수중의 염 성분 존재가 포말생성을 촉진시켰다. -
막분리 공정을 모형시설에 도입 후 약 2년간에 걸쳐 막의 구성을 달리하여 운영하였으며, 원수 및 처리수의 수질특성을 조사하였다. 원수의 수질특성은 친수성 물질이 53%, 소수성 물질 28% 나머지는 반친수성물질로 구성된 것으로 조사되었으며, UF 및 NF 처리수의 분자량 분포를 조사한 결과 원수와 달리 큰 분자량을 갖는 부분이 제거된 것을 볼 수 있었다. UF와 NF의 막분리 공정운전 결과를 종합해 본 결과, UF막인 GH(2500Da)와 GM(8000Da) 경우 GM이 생산량 및 운전특성에서 GH에 비해 우수한 결과를 보여 주었으며, NF막인 HL
$(150{\sim}300Da)$ 과 GM의 비교 운전한 결과 NF막인 HL의 유기물 제거 효과가 우수한 것을 보여 주고 있다. 그러나 UF막인 GM의 경우 MWCO가 8000Da로 NF막인 HL에 비해 큼에도 불구하고 유기물 제거 면에서 상당히 우수한 유기물 제거 효과를 보여 주었으며, 소독부산물의 생성능 평가에서도 50%이상의 양호한 제거 효과를 보여 주었다. -
본 논문은 혐기성 공정에서 혐기성 미생물을 이용한 수소 생산에 관한 연구이다. MLSS를 고농도로 유지하기 위해서 양이온성 고분자와 실리카졸을 투입하여 혐기성 슬러지를 그래뉼로 형성 시켰다. 수소가스 생산은 메탄생성 박테리아가 저해로 발생량이 많지 않았다. 낮은 pH(<5.5)에도 불구하고 메탄생성 미생물의 활성은 막지 못했는데 수소 가스의 발생은 메탄가스의 증가와 연관이 되어 있다고 판단된다. pH 제어를 제외한 다른 방법이 도입된다면 효과적인 수소 발생을 할 수 있으리라 기대된다.
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Cha, Wol-Seok;Gwon, Gyu-Hyeok;Choe, Hyeong-Il;Jeong, Gyeong-Hun;Lee, Dong-Byeong;Jeong, Gil-Rok 343
황토볼을 이용하여 폐수처리를 한 결과 다음과 같은 결과를 보였다. 흐름도 A에서는 T-P 0.5ppm이하, T-N 1.0 ppm이하, COD 10ppm 이하였으며, 흐름도 B에서는 T-P 0.3ppm이하, T-N 5.0 ppm이하, COD 15 ppm 이하의 결과를 보여 주었다. 흐름도 C에서는 T-P 0.6ppm이하, T-N 10 ppm이하, COD 15 ppm 이하였으며, 흐름도 D에서는 T-P 1 ppm, T-N 8 ppm이하, COD 20ppm 이하의 결과를 보여 주었다. BOD는 각 흐름도 A, B, C, D에서 COD보다 높은 경우에는 6 ppm, 낮은 경우에는 3 ppm 정도의 차이를 보였다. SS는 각 공정에 따라 그다지 큰 차이를 보이고 있지 않으며, 1.0 처리 용량 Ton/day으로 계산 할 경우에 5 - 20 g/day 정도를 보이고 있다. 이러한 결과치는 하수종말처리장(특별대책지역 및 잠실수중보권지역)의 2 ppm 및 폐수처리시설(농공단지, 오${\cdot}$ 폐수처리시설 포함)의 T-P 8 ppm, T-N 질소성분 60 ppm이내의 탄소원 COD 40 ppm 이내의 기준에 해당하는 수치의 좋은 결과로 황토볼을 이용한 폐수처리 시스템의 가능성을 보여주고 있다. -
무기질산염배지로 순화된 슬러지와 순화되지 않은 슬러지의 두 종류 슬러지를 이용한 Batch식 배양을 통해 질소제거의 특성을 살펴보면 순화된 슬러지의 경우는 질산화가 잘 진행되었으나 순화가 되지 않은 생슬러지의 경우에는 질산화가 거의 일어나지 않았다. 그러나 두 반응기 모두 아질산염의 제거가 암모니아의 산화보다 빠른 속도로 일어남을 확인할 수 있었다. 또한 순화되지 않은 슬러지의 경우 슬러지의 사멸로 인한 암모니아성 질소성분의 증가도 확인할 수 있었다.
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분리된 미생물 중 염색폐수의 색도 제거능이 우수한 3균주(RA1, RA2, YA1)을 선별하여 실험에 이용하였다. 동일한 조건에서 실험한 결과 YA1이라 명명한 균주가 약 53%의 색도제거율을 보여 가장 우수한 균주로 판명되었고, 최적의 배양조건을 탐구하는 연구를 수행하였다.
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본 실험은 생물비료인 인산가용화균 Penicillium sp. PS-113의 어독성과 주요작물에 대한 유해성을 조사하였다. 어독성 실험의 모든 시험구에서 무해한 것으로 판정되었고, 작물생육효과에서도 매우 뛰어난 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
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본 연구는 membrane bioreactor (MBR)을 질산화 위주로 운영하면서 질소폐수 처리 과정에서 나타나는 MBR의 운전특성 및 처리효율을 검토하고, 아울러 경제적인 질소처리 방법인 아질산화를 유도하기 위한 조건을 탐색하는 것이다. 반응기의 유효부피 8 L, 체류시간을 12시간으로 고정하고 유입폐수 중의 암모니아 농도를 증가시키는 방법으로 암모니아 부하를
$2\;kg/m^3{\cdot}day$ 까지 증가시켜 보았다. 운전 중반부에 이유를 명확히 알 수 없는 슬러지의 활성 저하 기간을 제외하고는 거의 98% 이상의 질산화 효율을 나타냈으며, 2 kg 이상의 암모니아 부하에서는 효율이 감소하였다. pH 조절, 유입수의 암모니아 농도 및 부하 조절에 의해 MBR 내의 free ammonia (FA) 농도를 변화시켜, FA 저해에 의한 유도한 아질산화는 매우 불안정하게 이루어졌다. 반면에, 공기 공급량을 변화시켜 반응기 내의 DO를 낮추는 방법으로 유도한 아질산 축적은 안정적인 경향을 보여 MBR에서 적절한 운전전략으로 판단된다. -
본 연구는 당화 후 잔류하는 폐지 슬러지를 이용하여 메탄으로 전환시킬 수 있는 가능성에 대하여 연구하였다. 회분식 반응에서 초기 건조중량 15g의 신문지와 종이박스 폐지를 주입하였을 때 24일후 tCOD 제거율은 각각 60.9와 62.4%를 나타내었고 생산된 바이오 가스양은 각각 6.95와 6.43L 이었다. 총 고형물(TS)의 변화는 신문지와 종이박스가 각각 34.8와 33.4% 정도 감소함을 알 수 있었고, 휘발성 고형물(VS)의 변화는 신문지와 종이박스가 각각 40와 39.2% 정도 감소함을 알 수 있었다. pH는 20일 이후부터 7.5로 일정하게 유지되어 메탄발효가 적절히 진행되는 것으로 확인되었다. 반 연속식 실험의 경우 산 발효조에서 2일, 메탄발효조에서 12일간 체류하면서 신문지와 종이박스의 tCOD 제거 효율은 각각 64.7과 65.0%를 나타냈다. 각각의 일일 바이오가스 생산량은 g당 0.31과 0.30L로 나타났으며 바이오가스 중 메탄함량은 57.3과 56.2%로 나타났다. 공정의 안정화가 이루어졌다고 판단되는 25일 이후의 pH는 혐기성 산발효조와 메탄 발효조에서 각각 5.0과 7.5로 일정하게 나타났다.
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해수 중 초기 단백질 농도가 증가할수록 준정상상태에 도달하는 시간이 길어졌으며 최대 포말생성 높이는 증가하였다. 공기분산기의 기공크기가 작을수록 포말생성 높이는 증가하였으나 G3, G4, 산기석에서는 포말생성 높이가 거의 비슷하게 나타났다. 공탑공기유속이 증가할수록 포말생성 높이는 증가하였으며 운전시 안정적인 기포생성을 위해서 공탑공기유속을 0.7-0.8 cm/sec 로 하는 것이 보다 좋을 것으로 생각된다. 최적 pH 조건은 5-8의 약산과 약염기 부근이었으며 해수에서
$NaHCO_3$ 농도에 따른 포말생성 높이의 변화는 거의 없는 것으로 나타났는데 이는 해수 중 NaCl의 영향 때문이라고 생각된다. -
본 연구는 각종 유기성 폐기물의 혐기소화시 혐기성 분해 특성에 대해 알아보고자 하였다. 실험에 적용된 유기성 폐기물의 종류는 음식폐기물, 축산폐기물, 농산부산물 이었으며 기질과 접종액을 1:1로 혼합하여 회분식으로 실험을 수행하였고, 이때 발효조내의 TS, VS, sCOD 변화 및 가스발생량을 측정하였다. 음식폐기물의 경우 실험초기에 혐기성 분해가 일어났으며, 농산부산물의 경우 실험 종반부에 혐기성 분해가 일어났다. 반면 축산폐기물의 경우 실험초기에 한차례 혐기성 분해가 이루어지고 종반부에서 다시 혐기성 분해가 이루어짐을 알 수 있었다.
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질소, 인 등의 영양소 제거를 위한 고정화 미생물을 이용한 새로운 BNR 시스템 개발을 위해 탈질능력이 뛰어난 균주를 순수분리하고 여러 담체를 사용하여 제조된 활성 bio-bead의 특성을 알아보았다. 4종류의 탈질 능력이 뛰어난 균주를 순수분리 하였고, 12% PVA 담체로 만든 bead가 가장 좋은 탈질능력을 보였다. Cell loading 농도는 200 mg/ml일 때 bead의 활성이 최적을 나타내었으며, bead의 size에 의한 탈질효율에는 유의적 차이가 없었다. 제조된 bead는 약 4 batch실험 후 최대 탈질율을 나타내었으며, 약 25번의 batch실험까지는 탈질능력을 그대로 유지하고 cell leaking 양도 약
$10^3$ CFU/ml 정도 였으나, 그 이후로는 bead 형태도 변하면서 cell leaking이 증가하고 탈질능력도 감소되었다. -
Kim, Jong-Su;Park, Hyeong-Cheol;Jo, Su-Dong;Lee, Seung-Han;Bae, Yun-Wi;Mun, Ja-Yeong;Jeong, Yeong-Gi;Ju, U-Hong 382
Organic solvent tolerant bacterium, designated as strain BCNU 106 is a gram negative, rod-shaped aerobe and grows on benzene, toluene, ethylbenzene, and xylenes (BTEX) as a sole carbon source. According to 16S rDNA analysis and fatty acid analysis, strain BCNU 106 showed highest similarity to Pseudomonas syringae var. savastanoi (Pseudomonas savastanoi). Strain BCNU 106 was able to utilize toluene, ethylbenzene, both o-, m-, p-xylene , m-cresol and o-cresol. The degradation of o-, m-, p-xylene by strain BCNU 106 is particularly important, since o-xylene is a compound of considerable environmental interest, owing to its recalcitrance; and very few microorganism have been reported to utilize both o-, m-, p-xylene as a sole carbon source. -
Kim, Jong-Su;Park, Hyeong-Cheol;Jo, Su-Dong;Kim, Gi-Uk;Bae, Yun-Wi;Mun, Ja-Yeong;Jeong, Yeong-Gi;Ju, U-Hong 386
Pseudomonas savastanoi BCNU 106은 o-xylene 뿐만 아니라 m-, p-xylene을 분해할 수 있는 능력을 나타내었고, 비교적 높은 농도인 10 mM toluene, 2 mM o-xylene, 10 mM m-xylene, 10 mM p-xylene에서 높은 분해율을 보여주었다. Pseudomonas savastanoi BCNU 106의 resting cell을 이용하여 o-xylene의 중간대사산물을 GC-MS를 통하여 조사하였다. 주로 2-methylbenzyl alcohol, 2-methylbenzoic acid 등이 발견되었다. -
Kim, Jong-Su;Park, Hyeong-Cheol;Jo, Su-Dong;Lee, Seung-Han;Kim, Gi-Uk;Mun, Ja-Yeong;Jeong, Yeong-Gi;Ju, U-Hong 390
Pseudomonas savastanoi BCNU 106은 mineral salt medium에서 30 mM trichloroacetic acid의 농도까지 유일한 탄소원으로 이용하여 생육할 수 있다는 것을 발견하였다. 또한 trichloroacetic acid 뿐만 아니라 monochloroacetic acid, trichloroethylene, p-dichlorobenzene을 유일한 탄소원으로 이용 가능하였다. 그러나 이들 화합물에 대한 내성시험결과 전혀 내성이 없는 것을 알게 되었다. -
O, Gyeong-Taek;Go, Myeong-Jin;Park, Hye-Yeong;An, Gil-Won;Kim, Hwan-Beom;Lee, Ji-Heon;Gang, Chang-Min;Jeong, Seon-Yong 393
P. aeruginosa F722는 탄화수소를 분해하는 과정에 biosurfactant (BS)를 생산한다. 탄화수소 분해에 사용되는 C-배지에서 BS 생산량은 0.78$g/{\ell}$ 이였나, 질소원과 탄소원을 각각 0.05% (w/v)$NH_4Cl\;+\;0.1%$ (w/v) yeast extract과 3.0% (w/v) glucose로 조정한 경우는 BS 생산량이 1.66$g/{\ell}$ 로 증가하였다. 최적의 BS 생산조건으로 배양하는 동안 air 1.0 LPM를 공급해 주었을 때는 공기를 공급하지 않을 때의 1.66$g/{\ell}$ 보다 약 20% 증가한 1.94$g/{\ell}$ 이였다. 뿐만 아니라, glucose 분해속도는 대수증식기와 정지기에서 air를 공급하지 않은 경우0.25, 0.18$h^{-1}$ 였으나, 1.0 LPM를 공급한 경우 0.33, 0.29$h^{-1}$ 로 조사되었다. 또한, air를 공급하면서 BS 생산 실험을 수행하였을 때, BS 활성이 더 안정적이었다. -
Park, Gyeong-Ju;Jo, Gyeong-Suk;Jeong, Eun-Ju;Yeom, Hye-Gyeong;Lee, Byeong-Heon;Lee, Min-Gyu;Kim, Jung-Gyun 398
Bacillus species predominantly outgrown in a night soil treatment system were isolated and characterized. Cell interactions took place among them and cell population changed under various culture conditions. Maximum removal of$NH_4\;^+-N$ and cell production occurred under the conditions of 30% DO and C/N ratio of 8. Additions of 0.8% peptone and 0.3% yeast extract to a basal medium influenced the growth of isolates and the removal of$NH_4\;^+-N$ in flask culture, and metal ions such as Ca, Fe and Mg also did. During the flask experiment of nitrogen removal under an aerobic condition, active nitrification by the isolates occurred largely in 1 h with the decrease of COD and alkalinity destructed was only 74.6% of theoretical value. From the nitrogen balance, the percentage of nitrogen lost in the flask culture was estimated to be 29.0%. This conversion of ammonia to$N_2$ under an aerobic condition was confirmed by GC analysis. The B3 process using the Bacillus species seemed to have some economic advantage. -
Park, Mi-So;Han, Ju-Hui;Kim, Seung-Hyeok;Bae, Hyeon-Cheol;Yun, Yeo-Jun;Lee, Eun-Yeol;Park, Seong-Hun 402
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A newly isolated Rhodopseudomonas palustris P4 could decolorize various synthetic dyes containing different chromogenic groups such as azo linkage (Crocein Orange G, New Coccine, Chromotrope FB, Congo Red, Remazol Black B), anthraquinone Reactive blue 2, or indigo Indigo Carmine. Among them, the degradation rate of Black B was studied in detial. Degradation of Black B followed the Arrhenius equation in 25 -
$40^{\circ}C$ with an activation energy of 7.79 kcal/mol. Optimum pH was 8. Glucose in the range of 5 - 50g/l did not affect the Black B decolorization. When Black B increased from 25 mg/l to 2000 mg/l, decolorization activity increased almost linearly but the extent of decolorization was constant at about 86% irrespective of dye concentration. Analyses by HPLC revealed that the Black B molecules were partially degraded and some chromogenic intermediates were produced. These results indicate that Rps. palustris P4 has an outstanding capability to degrade various dyes. -
Cha, Mi-Seon;Kim, Gi-Han;Son, Hyeong-Sik;Lee, Na-Eun;Lee, Jeong-Eun;Jo, Sun-Ja;Lee, Sang-Jun 409
한국의 서해안과 남해안 47개소의 해수와 mud 시료로부터 광합성세균으로 유추되는 13개의 균주를 분리하였고, agar-shake tube method와 RAPD-PCR을 이용하여 4종의 서로 다른 균주를 순수분리 하였다. 이들 4종의 균주 중 폐수분해능이 우수한 균주를 선정하여, 형태학적, 배양적, 생화학적 특성 및 16S rRNA sequencing에 의한 동정을 실시하였고, 그 결과 purple, non-sulfur bacteria의 Rhodobacter 속에 가장 근접하여, Rhodobacter sp. EGH-24로 명명하였다. Rhodobacter sp. EGH-24가 생산하는 carotenoid 색소는 spheroidene(group 2)이였고, bacteriochlorophyll a를 가지고 있었으며, PHB를 생산하는 것으로 확인되었다. -
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50여종의 PVA 분해용 균주를 분리한 후 PVA 분해 실험을 통해 8종의 균주를 최종 분리하였으며, 이 중 2종의 균주를 동정하였다. 분리 균주의 PVA 분해율을 살펴보기 위하여 단일균주만을 이용한 실험과 단일균주들의 조합을 사용하여 실험을 진행하였는데, 단일균주를 사용했을 때는 최대 96%의 분해율을 얻었으며, 2 종의 조합을 사용했을 때는 최대 95%의 분해율을 얻어 단일균주만으로도 우수한 분해율을 얻을 수 있었다. 또한, 최종 분리균에서 PVA 분해효소를 분리하여 PVA 분해 실험을 진행한 결과 최고 78%를 보였다. 가장 우수한 분해능을 보인 2종을 동정하였는데, Paenibacillus sp.와 Microbacterium barkeri로 동정되었다.
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Streptomyces setonii (ATCC 39116) is a Gram-positive thermophilic soil actinomycetes capable of degrading single aromatic compounds including phenol and benzoate via ortho-cleavage pathway. we isolated approximately 6.3-kb S. setonii DNA fragment containing a thermophilic catechol 1,2-dioxygenase(C12O) gene. Here we further revealed that the 6.3-kb S. setonii DNA fragment was organized into two putative divergently-transcribed clusters with 6 complete and one incomplete open reading frames (ORFs). The first cluster with 3 ORFs showed significant homologies to previously known benA, benB, and benC, implying a part of benzoate catabolic operon. The second cluster revealed an ortho-cleavage catechol catabolic operon with three translationally-coupled ORFs (catR, catB, catA). Each of these individually-cloned ORFs was expressed in E. coli and identified as a distinct protein band with a theoretical molecular weight in SDS-PAGE. The expression of the cloned S. setonii catechol operon was induced in a heterologous S. lividans by specific single aromatic compounds including catechol, phenol, and 4-chlorophenol. The simitar induction pattern was also observed using a luciferase gene-fused reporter system, implying that S. setonii employs an inducer-specific regulatory mechanism for aromatic compound metabolism.
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Jang, Yeong-Seon;Jeong, Seung-Ho;Lee, Gwang-Yeon;Park, Don-Hui;Jeong, Sang-Mun;Cha, Jin-Myeong 428
이 연구는 전기화학적 배양법과 호기성 조건을 유지함으로써 Thiobacillus ferrooxidans의 밀도가 높게 유지될 수 있다는 것을 보여준다. 최적 pH는$2.0{\pm}0.05$ 로 결정하고 1vvm의 Air를 공급하였다 전류와 전압은 0.15A, 4V로 유지하였고 Pt 전극에서 85%의 효율로$Fe^{3+}$ 를$Fe^{2+}$ 로 환원시켰다. 이러한 조건에의 배양에서 초기 건조셀 밀도 0.0025 g-dry cell/L에서 8일 후에는 0.0576 g-dry cell/L에 이르렀다. 이는 같은 조건에서 고전적인 배양법에 의한 것보다 7배가 높은 값이다. -
Epoxide hydrolase(EH) catalyze the enantioselective hydrolysis of racemic epoxides to corresponding diols. A recombinant Pichia pastoris with EH from Rhodotorula glutinis has been constructed by reverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR). The recombinant biocatalyst enantioselectively hydrolyze (R)-styrene oxide faster than (S)-enantiomer. The catalytic activity of recombinant biocatalyst was 7-fold higher than that of wild-type strain. The recombinant EH biocatalyst can be used for kinetic resolution for the production of enantiopure styrene oxide.
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Trichoderma harzianum FJ1의 섬유소분해효소를 이용하여 음식물쓰레기의 효소학적 가수분해 조건을 최적화하기 위해 반응표면분석법을 이용하였다. 반응표면분석을 위한 실험계획은 수정된 Box-Behnken을 이용하였으며, 주요 반응인자로는 기질 및 효소농도, 반응시간에 대해 조사하였다. 반응표면분석 결과 환원당 (RS) 농도에 관련된 방정식은 다음과 같이 얻었다; RS (g/l) = -17.80 +
$5.04X_1$ +$51.37X_2$ +$1.21X_3$ -$0.11X_1\;^2$ -$38.86X_2\;^2$ -$0.03X_3\;^2$ +$1.64X_1X_2$ +$0.04X_1X_3$ -$0.70X_2X_3$ ($R^2$ =0.9939). 환원당 농도 및 당화율을 최대로 얻기 위한 최적 조건은 18.2%의 기질농도, 0.78 U/ml의 효소농도 및 19hr의 반응시간을 얻었으며, 이때의 환원당 농도 및 당화율을 각각 95.13 g/l 및 47.27%이었다. -
As for the purpose, we first introduce an random mutation into wild-type gene to expand a mutation space, and then further recombine the mutant genes by staggered extension process PCR. As a result, we obtained the best clones 6-52 that showed a high activity and stability, from a round of error prone and staggered extension process PCR. The purified enzyme showed a similar pH stability to the wild-type enzyme and reveal a slightly high optimum pH at 12. In the optimum temperature, an identical dependency was also showed and a quite high stability in the thermal stability was obtained. Along with this, the enzyme was also stable at a reaction that supplement with a 15 % of ethanol as an additive. The addition of other solvents and surfactants did not improve the reaction and thus resulted in a similar profile to those of wild-type enzyme. The specific activity on the target compound rac-ketoprofen ethyl ester was calculated to be about 85, 000 unit, and the kinetic constants Km and Vmax were determined to be 0.2 mM and 90 mM/mg-protein/min respectively. The deduced amino acid alignment with the wild type enzyme revealed five mutations at L120P, I208V, T249A, D287H and T357A. Based on these observations, the site directed mutagenesis to delineate the mutagenic effect is under progress.
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Lee, Sang-Gil;Kim, Jeong-Ho;Yu, Yeong-Sin;Hong, Seong-Jung;Jeong, Won-Seok;Choe, Cha-Yong;Yun, Yeo-Jun 453
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본 연구에서는 토양으로부터 높은 pectinase 활성을 나타내는 균주를 분리하였고, pectinase 생산을 위한 최적 배양조건을 검토하였다. strain KL34의 배양특성과 pectinase 생산 조건을 검토한 결과 최적온도
$25^{\circ}C$ , 배양액 초기 pH 8.5, 최적 탄소원 2% polygalacturonic acid 및 최적 질소원 yeast extract 0.25%에서 가장 높은 효소활성을 나타내었다. -
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The endoxylanase (642 bp; 213 amino acids) and
${\beta}-xylosidase$ (1,602 bp; 533 amino acids) genes from Bacillus sp. were amplified by PCR and separately inserted downstream of the yeast ADH1 promoters, resulting in the pAEDX-1 and pAEX plasmid. When the yeast transformants, S. cerevisiae SEY2102 harboring pAEDX-1 or pAEX, were grown on YPD medium, the total activities of the enzymes reached about 9.8 unit/mL for endoxylanase and 2.9 unit/mL for${\beta}-xylosidase$ . When the three kinds of xylan from oat spelts, birch wood, and corncob were hydrolyzed by treatment of recombinant endoxylanase and${\beta}-xylosidase$ , it was found that xylose, xylobiose and xylotriose were produced and xylose was the major product after 12 h reaction. In addition, with the higher amount of enzymes, the more amount of xylose was produced. -
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미더덕으로부터 GAGs는 1/60 M sodium phosphate buffer로
$105^{\circ}C$ 로 열수 추출하는 것이 가장 경제적인 것으로 나타났다. 이렇게 추출한 GAGs의$SO_4$ 함량은 31.2%, 회분 함량은 22.2%이다 회분 함량의 증가는 sodium phosphate의 사용으로 추정되며, 이것은 무기질 분석에서 Na의 함량이 총 무기질의 47.6%를 차지하고 있다는 것으로 뒷받침한다. 일반 성분, HPLC 분석, 당 분석, 아미노산 분석의 결과로 GAGs의 주된 구조는 glucosamine과 galacturonic acid로 결합되어 있으며, 당과 단백질은 threonine으로 연결되어 있다는 것을 알 수 있다. 화장품 원료 규격에 적합한 제단백은 5.0%, 10.0%, 20.0% TCA(w/v) 처리, 10.0%, 20.0%, 40.0% HCl(v/v) 처리, UF(ultra filteration)를 포함한 10.0% TCA(w/v), 20.0% S-SAS(w/v), 25.0% HCl(v/v) 처리가 가능하며, 이중 5.0% TCA(w/v) 및 10.0% HCl(v/v)의 처리가 가장 경제적이며 효율적이라는 것을 알 수 있었다. -
세포 전처리 과정으로 융합 ferritin을 2단계 세포파쇄하여 주입시료로 이용하였으며, 변성된 단백질용액을 젤 여과 크로마토그래피를 통하여 urea의 농도를 희석시켜 재접힘 시켰다. 여기서 분취한 시료를 역상 크로마토그래피에 적용한 결과 FPLC 크로마토그램에서 뒤에 분취한 시료일수록 재접힘 정도가 높은 것으로 나타났다.
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Lee, Byeong-Guk;Yu, Chang-Hun;Lee, Seon-Gyeong;Lee, Yong-Seok;Kim, Jin-Yeong;Lee, Jeong-Hwa;Lee, Eun-Gyu 484
고체상 site-specific mono-PEGylation 공정은 액체상 PEGylation 공정에서 나타날 수 있는 무작위적인 multi-PEGylation 문제점을 해결하고, 또한 고체상에서 PEGylation을 수행함으로써 액체상 PEGylation 공정에서 필요한 분리정제 단계를 줄일 수 있음을 제시하였다. -
질산염은 채소류에 많이 포함되어 있으며, 체내에서 아질산염으로 환원된다. 이는 위장내의 낮은 산성조건에서 쉽게 일어나서 발암물질인 nitrosamine을 생성할 수 있다. 초석잠의 아질산염 소거능은 pH가 낮을수록 높아지고 그 중 뿌리의 ethyl acetate와 butanol 추출물이 가장 높은 소거능을 보이고 있다. 이전 실험에서 ethyl acetate 추출물이 가장 좋은 항산화 활성도를 나타내어 이를 silica gel column으로 분획하여 뿌리는 6개의 분획을 줄기는 5개의 분획을 얻었다. 각 분획의 UY/VIS spectral data는
$280{\sim}300nm$ 에서 최대 흡광도를 나타내어 Phenolic compound의 흡광도인$200{\sim}400nm$ 와 일치함을 보이고 있다. 보다 정확한 구조는 차후 실험에서 C-NMR, H-NMR, IR등을 이용해 밝히고자 한다. -
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A novel prepurification method was developed aiming at increasing yield and purity, also reducing solvent usage for purification of paclitaxel. This method was a simple and efficient procedure, for the isolation and prepurification of paclitaxel from the biomass of Taxus chinensis, consisting of micelle formation, followed by two steps of precipitation. The use of a micelle and precipitation in the prepurification process allows for rapid separation of paclitaxel from interfering compounds and dramatically reduces solvent usage compared to alternative methodologies. This prepurification process serves to minimize the size and complexity of the HPLC operations for paclitaxel purification. This process is readily scalable to a pilot plant and eventually to a production environment where multikilogram quantities of material are expected to be produced. As much as possible, the process has been optimized to minimize solvent usage, complexity, and operating costs.
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TMB 크로마토그래피의 물질수지식으로부터 SMB 크로마토그래피의 디자인 파라미터들을 계산할 수 있으며, 이를 이용하여 6 칼럼 SMB 크로마토그래피 장치를 디자인하였다. SMB 크로마토그래피 장치는 4개의 multi position rotary valve를 사용하여 연속적으로 각 칼럼으로의 유로를 제어할 수 있으며, 효율적인 SMB 크로마토그래피 장치를 구현할 수 있다. 또한 회분식 실험으로부터 얻어진
$m_2$ ,$m_3$ diagram으로부터 SMB 크로마토그래피의 조작에 필요한 파라미터들을 계산할 수 있었다. -
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고체상 풀림과 재접힘 공정을 통해서 EK의 활성이 회복되어지는 것을 확인할 수 있었다. 이는 고정화 효소를 사용함으로써 기존의 액상반응에서 불가능한 효소의 재사용 문제를 해결할 수 있다. 친화도보다는 다중 공유결합을 통한 효소의 고정화가 효소의 활성 회복에 높은 안정성을 가질 수 있다고 예상한다.
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A fructosyltransferase from Leuconostoc mesenteroides TL1 was purified. The molecular mass of the enzyme was estimated to be 38 kDa based on the activity staining. The pH and temperature optima of the enzyme were 6.3 and
$40^{\circ}C$ , respectivly. Structural analysis of the polymer prepared from sucrose by the enzyme was determined by NMR Spectroscopy: It shows the heterogeneous linkages of levan-like fructan and dextran-like glucan. -
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To establish an effective and reliable technique of mutation by protoplast regeneration in doxorubicin overproducing industrial strain, it is essential to optimize the conditions for protoplast regeneration.
$CaCO_3$ as buffer, the negative effect of glucose was still evident without significant changes in pH, ruling out acidity as responsible for the suppression of anthracycline production and suggesting a direct effect of glucose on antibiotic biosynthesis. Production of doxorubicin was improved in doxorubicin overproducing industrial strain (BR-Dox) when protoplast regenerated. BR-Dox4 and BR-Dox6 of BR-Dox derivatives improved doxorubicin production by 25.2 % and 12.2 %, respectively. -
SDS-PAGE 결과 elution pH에 따라 분리되는 band pattern은 비슷하게 2band의 양상을 보이지만, FI값을 비교하여 보았을 때 다른 pH보다 8.0에서 가장 높은 수준을 보였으므로 GFPuv/cytochrome c-552 fusion Protein의 분리
${\cdot}$ 정제에 가장 적합한 pH를 8.0으로 정하였다. -
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After irradiation of a cloned dextransucrase gene (dsrB742) with ultrasoft X-ray, an E. coli transformant (pDSRB742CK) was first developed for the expression of an extracellular dextransucrase, having increased activity and the synthesis of a highly branched dextran. Seven nucleotides of the parent gene (dsrB742) were changed in the nucleotide sequences of dsrB742ck. Among them, four nucleotides were changed at the ORF of dsrB742, resulting in a 30 amino acids deletion in the N-terminal of DSRB742 dextransucrase. The activity of DSRB742CK dextransucrase in culture supernatant was approximately 2.6 times higher (0.035 IU/ml) than that of the DSRB742 clone. The pDSRB742CK clone produced DSRB742CK dextransucrase when grown both on a sucrose medium (inducibly) and on a glucose medium (constitutively). The DSRB742 clone did not produce dextran constitutively on a glucose medium. DSRB742CK dextran had 15.6% branching and 2.7-times higher resistance to dextranase hydrolysis compared to DSRB742 dextran.
$^{13}C-NMR$ showed that DSRB742CK dextran contained${\alpha}-(1{\rightarrow}3)$ branch linkages that were not present in DSRB742 dextran. -
$Hisx_6-GFPuv-Cyt$ c fusion protein을 E. coli 균주 JM109과 BL21 각각에서 발현시킨 결과 발현온도는$30^{\circ}C$ 보다$37^{\circ}C$ 에서, BL21보다 JM109에서의 발현량이 더 많았다. 그러나 JM109,$37^{\circ}C$ 에서 발현시킨 fusion protein의$Ni^{2+}-IDA-agarose$ purification결과 약 45kDa 부근의 fusion protein의 density가 감소되었음을 SDS-PAGE analysis을 통해 알 수 있었다. 또한 western blotting analysis를 통해 이 impurity가 degraded fusion임을 확인 할 수 있었다. degraded fusion은 BL21 균주에서 발현시킨 fusion protein에서도 생성됨을 확인하였다. 모든 결과를 종합해 볼때$Hisx_6-GFPuv-Cyt$ c fusion protein의 발현은 IM109,$37^{\circ}C$ 에서 더 많았지만, BL21,$37^{\circ}C$ 에서 expression시킨 fusion protein이 보다 안정하다고 판단 되어진다. 향후 fusion protein이 bioelectronic device에 적용되려면 degraded fusion protein의 생성을 줄여 activity를 유지하도록 안정한 형태로 발현되어 순수하게 분리정제 되어야 하겠다. -
본 연구에서는 고부가가치 의약단백질인 human growth hormone을 고순도로 얻기 위하여 재조합 대장균을 이용하여 ubiquitin이 융합된 형태로 단백질을 발현시키고, 이를 분해하는 ubiquitin-specific pretense를 발현시켜 이를 분리
${\cdot}$ 정제하고 효소특성을 살펴보았다. UBP1 enzyme을 재조합 대장균을 이용하여 발현하고 분리${\cdot}$ 정제한 결과, 분자량은 약 83.5kDa이었으며,$40^{\circ}C$ , pH 8.0에서 최대 효소활성을 보였다. -
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Monoclonal antibody를 대량으로 생산하기 위한 hybridoma cell의 생존능 개선을 위한 실험에서 각각의 항생제에 대해서 G418은 10ug/ml(figure 1), ciprofloxacin 은 lug/ml 또는10ug/ml 그리고 minocycline은 1ug/ml정도에서 가장 효과가 높아보였다. 다양한 산소 농도에서 실험과 각각 항생제의 monoclonal antibody 생산에 미치는 영향을 실험하여서monoclonal antibody를 가장 경제적으로 대 량 생산할 수 있는 조건을 찾을 수 있을 것으로 사료된다.
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Kang, Young-Min;Lee, Ok-Sun;Jung, Hee-Young;Kim, Won-Jung;Kang, Seung-Mi;Min, Ji-Yun;Bahk, Dong-Jin;Yun, Dae-Jin;Bahk, Jung-Dong;Choi, Myung-Suk 568
The Hyoscyamus niger hyoscyamine$6{\beta}-hydroxylase$ (H6H, EC 1.14.11.11) gene was introduced into the genome of a Scopolia parviflora by the binary vector system using the disarmed Agrobacterium rhizogenes strain KCTC 2703. Expression of H6H enzyme which are involved in alkaloids pathway by western blot analysis using proteins extracted from leaf, stem flower, branch root and main root were examined The enzyme expression was found only in the roots, with no expression in leaf, stem and flower. The alkaloids contents were the most higher in root and then leaf and stem has very small amount of alkaloid contents were analyzed by HPLC. The expression level of H6H in transgenic plants were two or more times than wild type plants. In transgenic plant which constitutively expresses H6H enzyme, high concentration of scopolamine was accumulated. -
A marine aerobic Gram-negative bacterium, Pseudoalteromonas carrageenovora, has been blown to hydrolyze carrageenans, the sulfated galactans of red algae, and to desulfate oligo kappa-carrageenans. Recently, the gene encoding arylsulfatase (aryl-sulfate sulfohydrolase, E.C.3.1.6.1) of A. carrageenovora was cloned and the nucleotide sequence was reported. Enzymatic hydrolysis of sulfate groups in agaropectin simplifies the process of agarose preparation. In order to overproduce the enzyme, the arylsulfatase gene (astA, 984 bp ORF) from P. carrageenovora genome was amplified by PCR and subcloned into the pET21a vector. When the constructed plasmid pAST-A1 was introduced into E, coli BL21(DE3), the transformant on LB plate containing IPTG showed the hydrolyzing activity for p-nitrophenyl sulfate. Most of arylsulfatase activity was found in the cell lysate, but at
$50\;{\sim}\;5000\;{\mu}M$ IPTG concentration the activity was found both in the culture supernatant and the cell lysate. The molecular weight of the recombinant enzyme was estimated to be 34 kDa by SDS-PAGE. -
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Streptomyces lividans is one of the most commonly-used streptomyetes strain as a molecular cloning and expression host. Unlike its close relative S. coelicolor, however, S. lividans rarely produces secondary metabolite such as actinorhodin in a typical glucose-containing culture condition due to insufficient expression of some antibiotic regulatory genes including afsR2. Although multiple copies of afsR2 or a glycerol-specific culture condition stimulated actinorhodin production in S. lividans, both failed to stimulate actinorhodin production in S. lividans cultured in a typical glucose-containing medium. To generate a culture-condition-independent actinorhodin-overproducing S. lividans strain the afsR2 gene was integrated into the S. lividans TK21 chromosome via homologous recombination, followed by the genetic confirmation. This S. lividans strain produced a significant amount of actinorhodin in both glucose-containing liquid and plate cultures, with higher actinorhodin productivity compared to the S. lividans containing multiple copies of afsR2. These results suggest that a chromosomal integration of a single copy of an antibiotic regulatory gene is a promising method for the development of a stable antibiotic-overproducing streptomycetes strain.
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There has been interest in developing gene therapy based on naked plasmid DNA for treating serum protein deficiencies and human erythropoietin (hEPO) is one of the candidate for gene therapy being Investigated most enthusiastically. We constructed novel plasmid DNA vectors pVAC-hEPOI/II/III which contain one, two, three hEPO gene(s) respectively for producing high level expression and secretion of hEPO in vitro and in vivo. NIH3T3 and COS7 cells were transfected transiently with these vectors and increase in hEPO expression in medium reached 2-5 fold in comparison with pSecTagB-hEPO. Intra muscular administrations of pVAC-hEPOI/II/III vectors into mice resulted in high level secretion of hEPO in the serum and corresponding increases in hematocrit level. In conclusion the transduction efficiency of naked plasmid vectors is one of the critical factors of a gene delivery system and these novel plasmid vectors will contribute to various gene therapy based on naked plasmid DNA.
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Geum, In-Gyeong;Yun, Ji-Hyo;Kim, Tae-Jip;Yun, Hyang-Sik;Lee, U-Jong;Kim, Jeong-Ho;Han, Nam-Su 587
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기존 재료들의 단점인 재료의 전이성, 염증 유발, 효과의 단기 지속 등의 문제를 해결하기 위하여 PLGA 미립구를 주 재료로 하는 주사 충전재를 개발하였다. 생쥐 실험 결과 염증 반응이 적고 장기 이동성이 없으며 부피 유지 효과가 우수하다는 결론을 내렸으며 추가적으로 장기 추가 보완 실험을 실시하여 비뇨기과, 성형외과적 주사용 충전재로써의 적합성을 조사하겠다.
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Arabinose is five-carbon sugar that have been used a precursor of chemical synthetic pharmaceutics and an additives for an diet foods. Its contents in the hemicellulose among varied cellulosic materials is approximately
$0.2%\;{\sim}\;4.0%$ . In previous papers, it was focused in the production of xylose. But this study was subjected to an effective production of arabinose. High arabinose yield and selectivty was achieved at 0.6% sulfuric-acid concentration and$100^{\circ}C$ . We will present how to remove an insoluble substances and the process for arabinose separation. -
벙커 C유 1-5%가 주입되었을 경우에는 40.5%, 44.7%가 제거되었으며 본 유류분해균주는 A. calcoaceticus SEBCM-1로 명명하였다. pH 6과 pH 7에서 분해율이 약 73% 정도로 가장 높게 나타났으며 pH 4에서는 약 37% 정도가 미생물 분해에 의해 저감되는 것으로 나타났다. 본균은 다양한 pH조건에서도 생육이 가능하며 일정 수준의 분해력을 가지는 것으로 확인되었다. 본균은 비교적 넓은 온도 범위에서 왕성한 성장이 가능하며 분해가 가능할 것으로 판단된다. 본균의 영양분 조성 중 질소원의 주입량은
$0.5\;g/L{\sim}2\;g/L$ 범위에서 미생물 성장이 활발하였으며 0.1 g/L와 4 g/L로 주입했을 경우에는 미생물 성장이 크게 저하되는 것으로 관찰되었다. -
헛개나무 열수 추출물은 알코올 분해 및 D-galactosamine/LPS와
$CCl_4$ 에 대한 간 보호에 탁월한 효과를 보였다. Rat(SD)에 알코올(50%, 10 ml/kg)을 경구 투여하여 숙취를 유발한 후 헛개열매 열수 추출물을 경구 투여한 결과 혈중 알코올 농도가 크게 감소하였다. 또한 D-galactosamine($600{\mu}g/kg$ )/LPS($600{\mu}g/kg$ )와$CCl_4$ (1.0ml/kg)를 처리한 후 헛개열매 열수 추출물을 투여한 결과 간 기능 수치인 AST, ALT 및 LDH 값이 상당히 감소함을 알 수 있었다. -
p-KG03의 고유점도는 65.22 및 50.75
$d{\ell}/g$ 이며, 사슬강도성은 0.170이였고, 특성화 농도는 0.114 g/l이었다. p-KG03은 non-Newtonic fluid로 Power-Low Model에 의한 pseudoplastic한 물성을 갖으며, 유체성으로 p-KG03 1%의 constancy index (K)는 2,172 cp, flow behavior index (n)는 0.52이었다. 특히 pH, 염 및 열에 안정하며 기존 다당류와의 혼합이용 가능성이 있을 것으로 생각된다. -
Gyrodinium impudicum strain KG03의 세포외 다당류인 p-KG03은 황함유 다당류로 항바이러스 검색 결과, 조사대상 바이러스 중 특히 뇌심근 경색바이러스 (encephalomyocarditis virus; EMCV)에 항바이러스 활성을 가지는 것으로 조사되었다.
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Poly(lactic acid) is a biodegradable themoplastic based on the renewable resources to substitute for petrochemical plastics. Most of PLA is produced by ring opening polymerization from lactide. However, pyrolysis process in the lactide synthesis is expensive, we studied lactide synthetic process for more economical preparation of PLA. In this research was tried to minimize the pyrolysis time, and obtained L-lactide from lactic acid without any catalyst.
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In this work fiber-optic biosensor that has been used in medical applications was developed. And we can monitored the concentration of glucose and lactate in blood sample by using developed fiber-optic glucose and lactate sensor. Glucose oxidase(GOD) and Lactate oxidase(LOD) were immobilized by using acrylamide adhesive and zeolite on the tip of the optic fiber.
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Transfer of an electron from one site to another in a molecular or between molecules and/or electrodes is one of the most fundamental and ubiquitous processes in chemistry, biology and physics. In this study fusion proteins composed by green fluorescent protein(GFP) and cytochrome b562 were used in fabricating molecular array as an electron sensitizer and electron acceptor, Protein formation onto the substrate was performed by the self-assembly technique. The fusion protein film were analyzed using scanning probe microscope(SPM), Surface Plasmon Resornance(SPR) and hybrid STM/I-V. The results suggest that the proposed molecular photodiode can be used as a basic unit of the memory device.
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For the acute assessment on biological toxicity of wastewater, surface plasmon resonance(SPR) based cell viability detection was performed using gold surface-confined cell as a result of adhesion-modifying chemicals. Escherichia coli O157:H7 (E. coli O157:H7) was investigated after exposure to EDTA. Cells were immobilized on gold coated slide glass for SPR analysis by the method of cross-linking carboxyl group on the bacterial surface with amine group of poly-L-lysine that had been coupled to the gold surface modified by a self-assembled monolayer of 11-mercaptounde canoic acid (11-(MUA)). Reflective intensity of each flow step was changed with respect to confect of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt and phosphate-buffered saline (PBS) solution. The proposed detection technique can be used for biological toxicity test.
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본 연구는 후각 수용 단백질인 ODR10를 GST와 Histidine tag를 각각 N 말단과 C 말단에 삽입한 후 두 가지의 발현 벡터에 넣어 대장균에서 발현시켰다. 부분 정제된 단백질을 QCM의 수정진동자에 코팅한 후 여러 종류의 냄새 분자와의 상호 작용을 관찰하였다. 발현양은 적었지만 QCM실험 결과 발현된 단백질이 diacetyl과 반응한다는 것을 알 수 있었다. ODR10 단백질과 diacetyl의 결합 정도는 다른 냄새 분자와 비교했을 때
$5{\sim}10$ 배 정도 차이가 났으며 이를 통해 후각 수용 단백질을 발현시킨 대장균 세포들을 후각센서를 개발하는데 사용할 수 있다는 것을 알 수 있었다. 또한 현재까지는 1000가지 이상 존재한다고 알려진 후각 수용 단백질들이 어떤 냄새 분자와 특이적인 결합성을 가지는지 조사하기 위해서는 복잡하고 시간이 오래 걸리는 실험을 해야 했었지만, 대장균에서 발현시키는 시스템을 통해 경제적이고 효율적으로 조사를 할 수 있게 되었다. -
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Yu, So-Yeong;Jang, Gyeong-Hui;Yu, Seung-Min;Im, Jeong-Hwa;Yu, Nae-Chun;Geum, Gi-Chang;Yu, Won-Min;Kim, Jun-Myeong;Lee, Sang-Yeop 644
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Pseudomonas aerugenosa BYK-2로부터 분리해낸 biosurfactant는 0.05% NaCl. pH 5에서 비교적 우수한 유화안정성을 보였고, pH 및 이온강도가 증가함에 따라 유화능 및 유화안정성이 감소하는 경향을 보였다. 생물유화제를 각 농도별로 첨가하여 어육소세지의 물성을 조사한 결과 0.1 % 첨가구가 deformation 9.45 mm, force는 119.2 g으로 다른 첨가구에 비해 높은 수치를 나타낸 반면, whiteness는 생물유화제를 첨가하지 않은 것에 비해서 점차 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 천연 유화물과 타 유화제의 첨가에 따른 어육 소세지의 물성에 대한 효과를 알아보기 위해 각각 또는 복합적으로 첨가하여 물성과 색차를 측정한 결과 천연유화물의 고유한 색깔로 인해 whiteness는 감소하였으나, deformation이 다른 유화제에 비해서 월등히 증가하는 경향을 보였고, force 값 또한 증가하는 경향을 보였다.
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본 연구에서는 항염증 및 항산화 활성을 갖는 유용한 물질을 검색하기 위해 40여 가지 생약재를 에탄올을 이용하여 추출한 후 hyaluronidase 억제 및 라디칼 소거 활성을 측정하였다. hyaluronidase 활성을 저해시키는 물질로서 황기, 목단피, 오미자 등이 높은 효과를 보였고, 목단피, 백작약, 복분자 등은 유리 라디칼종에 대해 높은 소거활성을 나타내어 조직 손상 및 염증 질환에 매우 유효한 소재로서 이용될 수 있으리라 사료된다.
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송이버섯의 저장성 향상을 위하여 산지에서 사용하고 있는 방법을 대조구로하여 이끼, 솔잎, 양파의 구근을 첨가하여 동일한 조건에서 저장하면서 저장연장 효과를 검정하였다. 그 결과 산지에서 포장하는 방법으로 저장하였을 경우 저장 7일 까지 상품성이 있으나 14일에 급격한 품질 저하 현상을 나타내는데 반하여 양파를 이용한 방법과 이끼를 깔아 포장하는 방법은 무처리구 보다 7일 이상의 저장성 향상효과를 나타내었다.
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An antioxidative activity of Portulaca oleracea was tested by in vitro experimental models. The antioxidative activities were determined by evaluation the DPPH radical scavenging activity and by measuring lipid peroxide using 2-thiobarbituric acid (TBA). The crude extract was sequentially partitioned with n-hexane, 15% aq. MeOH, EtOAc, n-BuOH,
$H_2O$ . Among them, a remarkable antioxidative effect was observed in the fractions of EtOAc and n-BuOH. The DPPH radical scavenging effect$(IC_{50}=17.90{\mu}g/ml)$ of the n-BuOH soluble fraction was comparable with that of natural antioxidant,${\alpha}-tocopherol(IC_{50}=\;6.99{\mu}g/ml)$ and the inhibitory effect of lipid peroxidation in mouse liver homogenate was similar to that of natural antioxidant, L-ascorbic acid at a concentration of 0.1mg/ml to 5mg/ml. From the BuOH soluble fraction yielded two biophenolic glycosides, 3-hydroxy-1-(2-hydroxyethyl)phenyl-4-O-${\beta}$ -D-glucopyranoside(1) and 2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl-O-${\beta}$ -D-glucopyranoside(2) using column chromatography and revered-phase HPLC. In particular, the DPPH radical scavenging activity of 2 was comparable to that tocopherol$(IC_{50}=6.59{\mu}g/ml)$ . -
The antioxidant activities of methanol and dichloromethane extracts of eighteen salt marsh plants were tested by using 1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH) at a
$100{\mu}g/ml$ concentrations. The methanol extracts of four salt marsh plants(Rosa rugosa Thunberg, Erigeron annuus, Ixeris tamagawaensis kitamura, Artemisia capillaris Thunberg) were found to be most effective in DPPH radical scavenging activity. The DPPH radical scavenging effect of these plants was Artemisia capillaris Thunberg(88.67%), Rosa rugosa Thunberg(87.51%), Erigeron annuus(78.49%), Ixeris tamagawaensis kitamura(69.99%) in order and was comparable with that of natural antioxidant, L-ascorbic acid(96.64%). The next effective ones were the methanol extracts of Teragonia tetragonoides(58.66%) and the dichloromethane extracts of Artemisia capillaris Thunberg(54.67%) and the others did not show a considerable activity. These salt marsh plants were evaluated using the pyrogallol UV-VIS spectrophotometeric method to generate superoxide anion. Among them, the dichloromethane extracts of four salt marsh plants and the methanol extracts of fifteen ones were weak superoxide dismutase-like activities. -
혐기성 반응조는 침강성이 좋고 활성이 높은 생물을 어떻게 고농도로 반응기내에 축적시키기까지 자연적인 조건에서 6개월이라는 장시간이 요구된다. 하지만 유
${\cdot}$ 무기 복합 고분자를 이용하여 단기간에 입상슬러지를 형성한 후, Fed-Batch 실험을 통하여 폐수에 대한 입상슬러지의 적응 기간을 알아보았다. 반복 실험의 결과,$30{\sim}40$ 일 정도의 적응기간 동안 유${\cdot}$ 무기 복합 고분자를 이용하여 형성된 입상슬러지는 실플랜트의 입상슬러지와 비슷한$80{\sim}90%$ 의 COD제거율을 보였다. -
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염기서열 분석이 완료된 9종의 고세균 (Archaea)과 15종의 단백세균 (Proteobacteria)에 대하여 유전자보유 유무와 16S rRNA에 의한 계통수를 neighbor joining method와 통계적 의미를 갖는 bootstrap method (n=1000)를 이용하여 분석하였다. 보존적 COG와 각 미생물 보유 ortholog수에 대한 비율은 4.60% (Mezorhizobium loti)와 56.57% (Mycoplasma genitalium) 사이로 종에 따라서 공통 유전자의 보유정도가 차이를 보이는 것으로 독특한 유전자를 탐색할 수 있는 가능성을 제시하는 결과로 사료되었다. Archaeabacteria와 Proteobacteria 그리고 Firmicutes모두 유전자보유 계통수와 16S rRNA 계통수가 일치하는 부분과 일치하지 않는 부분으로 나뉘어진다는 것을 알 수 있었다.
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The antimicrobial effect of the Ginkgo biloba leaves extracts, Wood flavor and 1% sorbic for the total microorganics in beef examined by serial dilution method. As a result of using GLEA(T20), GLW80, Wood flavor and 1% sorbic acid by serial dilution method, it was revealed that wood flavor is most antibiotic. The decreased of wood flavor 82.80%, GLEA(T20) 73.44%, sorbic acid 66.33%, GLW80 64.36%, was compared with not treated.
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본 실험은 전해 알칼리수 처리에 의한 마늘의 저장성을 향상시키고자 실험실에서 직접 분리, 동정한 결과 Bacillus subtilis G-25와 B. lentimobus G-37로 동정되었다. 전해 알칼리수에 대한 살균효능 검정을 위해 마늘 부패균에 대한 최소저해농도(MIC)를 측정한 결과 전해 알칼리수가 마늘 부패균에 대하여 생육억제 효과가 있는 것으로 판단되었다. 이는 전해 알칼리수 처리가 마늘에 대하여 살균 효과가 있음을 나타내며, 유통 체계 개선 및 저장성 향상에 대한 기술개발에 중요한 매개체로 작용하여 그 이용 가능성이 높음을 시사해 준다.
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젓갈에서 분리한 유용 유산균인 Lactococcus lactis NK24, Lactobacillus plantarum NK181, 효모인 strain HW161를 대상으로 항산화능과 콜레스테롤 저해능을 검토 하였다. 항산화능을 조사한 결과, DPPH의 free radical 소거능은, strain HW161, Lactococcus lactis NK24, Lactobacillus plantarum NK181 순서로 나타났다. TCA를 이용한 실험의 결과, 과산화물질 저해능을 확인할 수 있었다. 또한, 콜레스테롤 저하 실험의 결과 는 strain NK181이 가장 우수하게 나타났다. 따라서 본 실험에서 사용된 균주들은 프로바이오틱 생균제로서의 가능성을 보여 주었다.
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$40^{\circ}C$ , 110bar 조건에서 초임계 추출장치를 이용하여 타르, 탄화취 등의 유해성분이 제거된 정제 목초액을 간장 및 된장에 첨가한 결과 간장의 경우 정제 목초액의 첨가 농도가 증가할수록 첨가하지 않은 것에 비해 균수가 적어 보존효과가 있었으며, 정제 목초액을 첨가한 간장은 산막효모의 생성이 전혀 없어 품질에는 변화가 없었다. 된장의 경우 정제 목초액을 첨가한 것이 첨가하지 않은 것에 비해 대체로 균수가 적어 보존효과가 있었으며, 된장의 색을 측정해 본 결과 정제 목초액을 첨가한 것은 된장의 갈변이 첨가하지 않은 것에 비해 느리게 진행됨을 알 수 있었다. -
The antioxidant activities of methanol and dichloromethane/acetone extracts of twenty three seaweeds were tested by using 1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH) at a
$100{\mu}g/ml$ concentrations. The dichloromethane/acetone extracts of three seaweeds(Symphyocladia latiuscula, Gloiopoltis furcata, Sagassum thunbergii), were found to be most effective in DPPH radical scavenging activity. The DPPH radical scavenging effect of these seaweeds was Symphyocladia latiuscula(85.82%), Gloiopoltis furcata(82.83%), Sagassum thunbergii(74.05%) in order. These seaweeds were evaluated using the pyrogallol UV-VIS spectrophotometeric method to generate superoxide anion. Among them, the methanol extracts of six seaweeds were showed weak superoxide dismutase-like activities. The dichloromethane/acetone extracts obtained from Symphyocladia latiuscula was fractionated with$CH_2Cl_2$ , n-hexane, 15% aq.MeOH, n-BuOH,$H_2O$ . The 15% aq.MeOH soluble fraction exhibiting the strongest antioxidative activities was further purified by C18 column flash chromatography and reversed HPLC. The two active principles of Symphyocladia latiuscula were isolated and characterized as 2,3,6-tribromo-4,5-dihydroxybenzyl alcohol(1), 2,3,6-tribromo-4,5-dihydroxybenzyl methyl ether(2). -
A new species of Gram-negative halophilic cartenoid producing bacterium was isolated from the Haeundae Coast, Korea. This strain is non-motile, aerobic, orange-pigmented, rod-shaped, and produced carotenoids, mainly astaxanthin. All the type strains of the genus Paracoccus were compared with this strain using 16S rDNA sequence analysis, fatty acid patterns, and physiological reaction profiles. From the results obtained, this strain is classified as a new species, Paracoccus sp..
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Clusters of orthologous groups of proteins (COG) 알고리즘을 이용하여 42 종의 원핵생물, 33종의 진정세균, 16종의 단백세균 수준에서의 보존적 유전자 (conserved gene)를 파악하였다. 분석대상 원핵생물 모두 75종의 COG 즉 보존적 유전자가 관찰되었다. COG0195, COG0358 그리고 COG0528은 원핵생물에서만 관찰되었고 64종류의 보존적 유전자가 33종의 Bacteria에서 관찰되었다. 각 분류단계를 특징짓는 새로운 COG의 추가를 확인하였고 각 단백세균 그룹은 독자적인 COG 레퍼토리를 소유하였으며 물질대사에 관련된 보존적 유전자는 beta 그룹이 다른 그룹에 비해 다양한 것을 확인하였다. 본 연구는 Proteobacteria의 기원과 진화적 유연관계를 파악하는데 도움을 줄 뿐만 아니라 향후 세균분류학과 생명공학에 필수적인 유용유전자 탐색 등에서도 충분한 연구가치가 있는 것으로 사료되었다.
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Cystan의 분산활성은 점토광물에 대한 침강속도가 완연히 느려짐을 확인하여 분산제로서의 성능이 우수함을 볼 수 있었으며, 넓은 범위의 중성 pH에서는 고르게 분산활성을 유지하는 것으로 밝혀졌다. 이는 rheological test에서도 알 수 있었는데, 여러 pH와 온도에서의 Cystan 용액의 점도측정결과 넓은 영역에서 pH 및 온도 변화에 따른 큰 차이가 없었다. Cystobacter sp. MSL-9에 의해 생산되는 Cystan은 분산활성과 안정성이 높으며 기존 화학분산제보다 환경친화적이어서 그 산업적 가치가 클 것으로 기대된다.
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Ornithine decarboxylase (ODC) is a key enzyme on the regulation of cellular polyamines. ODC antizyme is a protein that represses ODC through accelerating enzymatic degradation by the 26S proteasome. We have isolated two distinct antizyme cDNA clones (AZS and AZL) from a brain cDNA library constructed with flounder (Paralichthys olivaceus). AZS and AZL cDNA clones were encoding 221 and 218 residues long respectively and revealed 57.7% amino acids sequence identity. The presence of two antizymes mRNA were detected in brain, kidney, liver, and embryo.
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Ornithine decarboxylase (ODC) is the key enzyme in the synthetic pathway of polyamines. This enzyme is a homodimeric and a pyridoxal 5-phosphate (PLP) dependent enzyme. We have isolated, a cDNA clone encoding ODC from brain cDNA library constructed from flounder (Paralichthys olivaceus). The ODC cDNA contained a complete ORF consisting of 460 amino acids and one stop codon with comparison to nucleotide sequences of the flounder, zebrafish and rat ODC genes, the ODC genes were highly conserved. The transcription of ODC was analyzed with reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) species in brain, kidney, liver, and embryo.
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생분해성인 Curdlan을 이용하여 pH 의존성 약물 전달계 개발을 위한 실험을 수행한 결과, pH 1,4에서 약물 방출 보다 pH 7.4에서 약물 방출이 10배 이상 증가하였다. 이러한 결과로 curdlan acetate microsphere는 pH 의존성 약물 전달계로 유용하다고 판단된다.
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The major pathological lesion in Parkinson's disease(PD) is selective degeneration and loss of pigmented dopaminergic neurons in substantia nigra (SN). Although the initial cause and subsequent molecular signaling mechanisms leading to the dopaminergic cell death underlying the PD process is elusive, the potent neurotrophic factors (NTFs), brain derived neurotrophic factor (BDNF) and glial cell line derived neurotrophic factor (GDNF), are known to exert dopaminergic neuroprotection both in vivo and in vitro models of PD employing the neurotoxin, MPTP. BDNF and its receptor, trkB are expressed in SN dopaminergic neurons and their innervation target. Thus, neurotrophins may have autocrine, paracrine and retrograde transport effects on the SN dopaminergic neurons. This study determined the BDNF secretion from SN dopaminergic neurons by ELISA. Regulation of BDNF synthesis/release and changes in signaling pathways are monitored in the presence of free radical donor, NO donor and mitochondrial inhibitors. Also, this study shows that BDNF is able to promote survival and phenotypic differentiation of SN dopaminergic neurons in culture and protect them against MPTP-induced neurotoxicity via MAP kinase pathway.
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본 실험은 Bifidus균의 위 장관 내 공급 시 균의 사멸에 대한 안정성을 높이기 위해 제조하는 microcapsule화 된 비드의 생산성을 향상시킬 목적으로 실시하였다. Bifidus균의 세포 포집 시 유사 위액과 담즙산에 높은 생존률을 보인 것으로 조사된 여러 종류 첨가물의 최적 농도로 비드를 제조하였을 때, material의 점도가 멸균 후 300cp 이하로 감소하였으며, cell 첨가 시 alginate bead 제조 한계 점도인 300cp 부근까지 증가하였다. 이상의 조건에서 고 점도의 alginate solution을 이송, 압출할 수 있는 SPS를 구성하였다. 비드의 생산성 비교 실험에서 18G, 4mm 규격의 nozzle을 13개 장착한 multi-nozzle은
$308{\pm}3ea/min$ 의 생산성을 보였으며 airgun 및 sylinge를 이용해 제조한 경우보다 각각 2.18배, 14.09배의 생산량 증대효과를 얻을 수 있었다. -
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