White and brown strains of Flammulina velutipes were inter-crossed. All $F_1$ showed light-brown fruitbody, suggesting that a gene for the brown fruitbody was incompletely dominant against the white one. And backcross experiment showed that more than two genes were involved in color determination. To isolate a molecular marker linked to fruitbody color, a set of primers was designed from a sequence of clones derived by a bulked segregant analysis. These markers showed a specific band which co-segregated with brown fruitbody forming strains.
Flammulina velutipes was transformed efficiently by Agrobacterium-mediated transformation system. The transformation frequency was about 16% with the gill tissues of the fungal fruiting body. Southern hybridization and genetic analysis suggest that the introduced DNA was inserted onto different locations of the fungal genome, and inherited stably to the next generation via basidiospores. Transformation or gene tagging with Agrobacterium T-DNA based vector should be useful for wide ranges of genetic or molecular biological studies of the mushroom.
Cathamus tinctorius, Coptis japonica and Asarum sieboldii were tested as substrate for the production of Flammulina velutipes. Among the C. tinctoris , C. japonica and A. sieboldii , C. tinctoris was the best substrate for the production of fruitbody. The effects of addition of C. tinctoris to sawdust substrate resulted in the increased mycelial growth on inoculum culture, 3.1% in ratio of fully culture and shorted one day in culture period. C. tinctoris was decreased 6.1% in ratio of fully culture, 11.0% in ratio of fruitbody productive culm. The addition of C.tinctoris, C.japonica to sawdust substrate increased 134.6%, 114.1% on the yield of the mushroom fruitbody respectively . But A. sieboldii decreased the mycelial growth and pineheading ratio delayed the production of fruitbody.
Genome-wide reanalyzed data of 25 Flammulina strains were compared against the reference genome (KACC42780) to establish a genome-wide single nucleotide polymorphism (SNP). The rate of mapping differences between the strains reflected in the strain variation in its result. Genome-wide SNPs distribution divided into types of homozygous SNP and heterozygous SNP moreover all of the strains demonstrated a wide variation in all of the regions. In the further study of topological relationship between the collected strains, phylogenetic tree was separated into 3 major groups. Group I contained F. velutipes var. related strains of ASI 4062, 4148, 4195. Group 2 contained strains that are different species of ASI 4188 F. elastica, ASI 4190 F. fennae, and ASI 4194 F. rossica. The other 19 strains F. velutipes were classified as a single group. However, further experiment to discriminate its genetic relationship between the white group and brown group did not verify its validity. The inferred tree exhibited a phylogenetic relationship between Korea white fruitbody forming strains of ASI 4210, 4166, 4178 and Japan white fruitbody forming strains of ASI 4209, 4167 confirmed to be genetically closely related.
This study was carried out to evaluate the inhibitory effect of Flammulina velutipes extracts on tyrosinase activity and to identify its biologically active component. The ethyl acetate and n-butanol extracts showed potent tyrosinase inhibitory activities. Subsequently, fractions of the n-butanol extract showed only a partial tyrosinase inhibitory activity. The most active compound of tyrosinase inhibitory activity was identified from the ethyl acetate extract as 1',3'-dilinolenoyl-2'-linoleoylglycerol (LnLLn) by comparing its mass, $^1H-$, and $^{13}C-NMR$spectral data with those previously reported in the literature. LnLLn showed tyrosinase inhibitory activity with an $IC_{50}$value of 16.1 ${\mu}g/ml$. These results suggest that the ethyl acetate extract of F. velutipes could be applicable for the development of a new whitening agent.
Gene libraries of DNA from Flammulina velutipes were constructed using Escherichia coli plasmid pBR 322. Leu 2 gene coding ${\beta}-isopropylmalate$ dehydrogenase from F. velutipes was cloned by complementation of leucine requiring mutant of E. coli. The size of inserted DNA fragment of this clone is about 1 Kbp. The fragment has Bam H1 and Ava 1 restriction sites.
Kim, Hong-Il;Kwon, O-Chul;Kong, Won-Sik;Lee, Chang-Soo;Park, Young-Jin
Mycobiology
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v.42
no.4
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pp.322-330
/
2014
The aim of this study was to identify and characterize new Flammulina velutipes laccases from its whole-genome sequence. Of the 15 putative laccase genes detected in the F. velutipes genome, four new laccase genes (fvLac-1, fvLac-2, fvLac3, and fvLac-4) were found to contain four complete copper-binding regions (ten histidine residues and one cysteine residue) and four cysteine residues involved in forming disulfide bridges, fvLac-1, fvLac-2, fvLac3, and fvLac-4, encoding proteins consisting of 516, 518, 515, and 533 amino acid residues, respectively. Potential N-glycosylation sites (Asn-Xaa-Ser/Thr) were identified in the cDNA sequence of fvLac-1 (Asn-454), fvLac-2 (Asn-437 and Asn-455), fvLac-3 (Asn-111 and Asn-237), and fvLac4 (Asn-402 and Asn-457). In addition, the first 19~20 amino acid residues of these proteins were predicted to comprise signal peptides. Laccase activity assays and reverse transcription polymerase chain reaction analyses clearly reveal that $CuSO_4$ affects the induction and the transcription level of these laccase genes.
Yun, Yeo Hong;Koo, Ja Sun;Kim, Seong Hwan;Kong, Won Sik
Mycobiology
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v.43
no.3
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pp.327-332
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2015
Phenylalanine ammonia-lyase (PAL) gene is known to be expressed in plants, and is involved in the differentiation, growth and synthesis of secondary metabolites. However, its expression in fungi remains to be explored. To understand its expression in mushroom fungi, the PAL gene of the edible mushroom Flammulina velutipes (Fvpal) was cloned and characterized. The cloned Fvpal consists of 2,175 bp, coding for a polypeptide containing 724 amino acids and having 11 introns. The translated amino acid sequence of Fvpal shares a high identity (66%) with that of ectomycorrhizal fungus Tricholoma matsutake. Distinctively, the Fvpal expression in the mycelium was higher in minimal medium supplemented with L-tyrosine than with other aromatic amino acids. During cultivation of the mushroom on sawdust medium, Fvpal expression in the fruit body correspondingly increased as the mushroom grew. In the fruiting body, Fvpal was expressed more in the stipe than in the pileus. These results suggest that F. velutipes PAL activity differs in the different organs of the mushroom. Overall, this is first report to show that the PAL gene expression is associated with mushroom growth in fungi.
This study was carried out to investigate applicability of Spent Mushroom Media(SMM) as horticultural nursery media. After the mushroom has been harvested, the SMM contains a lot of organic material, different microorganism and high density of mushroom hypha. The pH, phosphate and exchangeable cation concentrations of SMM of Flammulina velutipes were higher than those of any other treatment. The CEC and $NH_4-N$ were the highest in SMM of bottle-cultivated oyster mushroom (Pleurotus ostreatus). Bacteria and fungi showed the highest density in SMM of Flammulina velutipes. Most dominant bacteria were Microbacterium sp., Rhodococcus sp. and Agrobacterium sp. in SMM of Flammulina velutipes and Bacillus sp., Pseudomonas sp., Curtobacterium sp. and Microbacterium sp. in that of Pleurotus eryngii. The SMM contained high density of mushroom hypha that inhibited germination of seed and growth of young seedlings. Therefore, composting process of the SMM is indispensible to decline of vitality of mushroom hypha. The SMM of Flammulina velutipes with 0~30% vermiculite showed high germination rate in red pepper and chinese cabbage seeds. SMM of Pleurotus eryngii with 20% vermiculite showed 100% germination rate in red pepper seeds, but chinese cabbage seeds nearly failed to germinate with 30% vermiculite. The growth of red pepper was increased according to increasing mixture ratio of vermiculite. Accordingly, we concluded that SMM of Flammulina velutipes contained 0~30% of vermiculite can be used to horticultural growth bed for red pepper.
Flammulina velutipes is a popular edible basidiomycete mushroom found in East Asia and is commonly known as winter mushroom. Mushroom development showing dramatic morphological changes by different environmental factors is scientifically and commercially interesting. To create a genetic database and isolate genes regulated during mushroom development, cDNA libraries were constructed from three developmental stages of mycelium, primordium, and fruit body in F. velutipes. We generated a total of 5,431 expressed sequence tags (ESTs) from randomly selected clones from the three cDNA libraries. Of these, 3,332 different unique genes (unigenes) were consistent with 2,442 (73%) singlets and 890 (27%) contigs. This corresponds to a redundancy of 39%. Using a homology search in the gene ontology database, the EST unigenes were classified into the three categories of molecular function (28%), biological process (29%), and cellular component (6%). Comparative analysis found great variations in the unigene expression pattern among the three different unigene sets generated from the cDNA libraries of mycelium, primordium, and fruit body. The 19-34% of total unigenes were unique to each unigene set and only 3% were shared among all three unigene sets. The unique and common representation in F. velutipes unigenes from the three different cDNA libraries suggests great differential gene expression profiles during the different developmental stages of F. velutipes mushroom.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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