Transgenic plants with the herbicide-resistance gene (bar gene) were obtained via organogenesis from isolated mesophyll protoplasts of Nierembergia repens after applying electroporation. Transient ${\beta}-glucuronidase$ (GUS) activity of electroporated protoplasts assayed 2 days after applying an electric pulse showed that optimum condition (transient GUS activity 319 pmol 4 MU/mg per min and plating efficiency 2.43%) for electroporation was 0.5 kV/cm in field strength and $100{\mu}F$ in capacitance. The protoplasts electroporated with the bar gene at this condition initiated formation of microcolonies on medium after 2 weeks. After 4 weeks of culture, equal volume of fresh 1/2-strength Murashige and Skoog (MS) medium containing 0.2 mg/l bialaphos was added for selection of transformed colonies. After 6 weeks of culture, growing colonies were transferred onto regeneration medium containing 1.0 mg/l bialaphos, on which they formed adventitious shoots 1-2 months after electroporation. The adventitious shoots rooted easily after transfer onto MS medium with bialaphos lacking plant-growth regulators. Transformation of these regenerants with the bar gene was confirmed by Southern analysis. Some of the transformants showed strong resistance to the application of bialaphos solution at 10.0 mg/l.
Digitalis purpurea L. is a medicinal herb and have been used to congestive heart failure, mycocardial infarction, edema, angina etc. A protocol has been developed for in vitro propagation of adventitious shoot buds directly from leaf segments of D. purpurea Leaf explants of D. purpurea directly formed shoot buds when cultured on a MS medium supplemented with $2\;mg/l$ BA and $0.1\;mg/l$ IAA for 5 weeks. Adventitious shoots were multiplied by subculturing on the $B_5$ medium and shoot elongation was developed by subculturing on the WPM medium. Root formation from the shoot regenerated was achieved on MS basal medium containing 1 mg/ IBA.
Adventitious shoots were directly induced from leaf explants of R. glutinosa, an important medicinal plant. Proliferating shoot cultures were obtained by culturing leaf discs on Murashige and Skoog(MS) medium alone or combination with auxins and cytokinins. MS medium supplemented with 1 $mg/{\ell}\;BA\;and\;2\;mg/{\ell}$ IAA was the most effective, providing high shoot bud formation frequency without formation of intervening callus. The effect of leaf age on adventitious shoot formation was also investigated. The maximum shoot bud production (93.4%) was achived using 3rd leaf from apex of 6 weeks old plantlets after seed germination. Plantlet were rooted on an half-strength MS (1/2MS) medium containing 0.1 $mg/{\ell}\;IBA$. This prtocol is useful for clonal propagation and Agrobacterium-mediated transforamtion in R. glutinosa.
A method for plant regeneration via organogenesis from Pelagonium inquinans leaf disc has been developed. Mature leaf explants were collected from field-grown plants and used for the induction of adventitious shoot regeneration on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 3% (w/v) sucrose plus plant growth regulators. Maximum shoot organogenesis, with $11.8{\pm}1.5$ shoots (98.6%) per leaf disc, was obtained with $2\;mg/l$$N^6-benzyladenine$ (BA) and $0.5\;mg/l$${\alpha}-naphthyleneacetic$ acid (NAA) in 30 days. For rooting, the in vitro proliferated and elongated shoots were excised into 1.5-2 cm in length microcutting, which were plated individually on an half-strength MS (1/2MS) medium supplemented with 2% (w/v) sucrose plus various concentrations of indole-3-butyric acid (IBA). Shoots rooted with a frequency of 100% following culture on 1/2MS medium containing $0.5\;mg/l$ IBA.
Efficient plant regeneration via shoot organogenesis from in vitro cultured leaf segments of chrysanthemum (Dendranthema grandiflora Tzvelev cv. Namjeon) was achieved. Adventitious shoot formation from leaf explants was greatly influenced by plant growth regulator, leaf age, light condition, explant number per culture vessel, and explant orientation. Leaf segments, obtained from fully expanded young 1-2nd leaves and inoculated 8 explants per petri-dish with adaxial surface contact with MS medium supplemented with 0.5 mg/L BA and 2.0 mg/L NAA, produced 100% regeneration frequency and 13.7 shoots per explant. Regenerated adventitious shoots were successfully rooted in MS medium with 0.1 mg/L NAA. The plantlets were acclimatized in artificial soil mixtures (Vermiculite:Perlite=1:1), and transferred to greenhouse for flowering. The regenerated plants showed normal phenotypes.
Experiments were conducted to find out the optimum condition for in vitro proliferation using shoot tip of Gypsophila paniculata. Formation and fresh weight of adventitious shoots were promoted by shoot culture with $0.2mg{\cdot}L^{-1}$ BA and $0.2mg{\cdot}L^{-1}$ NAA in 'Bristol Fairy', while were promoted with $0.2mg{\cdot}L^{-1}$ BA and $0.1mg{\cdot}L^{-1}$ NAA in 'Red Sea'. Vitrification was suppressed by using $7{\times}13cm $$(diameter{\times}height)$ vessel. Aeration treatment on cap and agar concentration did not affect vitrification, but promoted the elongation of adventitious shoots. Formation of adventitious shoot was inhibited by increasing agar concentration in the medium.
An efficient in vitro protocol has been established for somatic embryogenesis and plantlet conversion of Korean wild ginseng (Panax ginseng Meyer). Wild-type and mutant adventitious roots derived from the ginseng produced calluses on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 0.5 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and 0.3 mg/L kinetin; 53.3% of the explants formed callus. Embryogenic callus proliferation and somatic embryo induction occurred on MS medium containing 0.5 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. The induced somatic embryos further developed to maturity on MS medium with 5 mg/L gibberellic acid, and 85% of them germinated. The germinated embryos were developed to shoots and elongated on MS medium with 5 mg/L gibberellic acid. The shoots developed into plants with well-developed taproots on one-third strength Schenk and Hildebrandt basal medium supplemented with 0.25 mg/L 1-naphthaleneacetic acid. When the plants were transferred to soil, about 30% of the regenerated plants developed into normal plants.
Kim, Ji Ah;Moon, Heung Kyu;Kim, Yong Wook;Bae, Eun Kyung
Journal of Plant Biotechnology
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v.42
no.3
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pp.235-238
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2015
Adventitious buds were obtained from isolated cotyledons cultured on MS medium with various concentrations of 6-benzylamino purine (BA) and thidiazuron (TDZ). The highest numbers of adventitious buds were obtained on MS medium supplemented with 0.2 mg/L BA. Experimental culturing with half the petiole portion and half with the terminal segments were grown on MS medium contained with 0.2 mg/L BA. Frequency of the adventitious bud induction was variable accordingly to the type of cultured explants. Explants with the half petiole showed the highest adventitious bud induction rate (80%) compared to explants of half with terminal segment (20%). An elongated shoot from the buds and growth of advent roots were both possible on the 1/2 MS medium without a plant growth regulator. These results offer an effective way in which clonal propagation can be accomplished.
The effects of cytokinin and putrescine on adventitious shoot induction from leaf explant of Rhodiola sachalinensis A. Bor were investigated. Among cytokinin used in this experiment, BA was more effective on adventitious shoot induction and shoot elongation than kinetin. Especially, 1 mg/L BA was the best to increase adventitious shoot induction (71%) and shoot elongation (3.0 mm). In addition, 100 mM putrescine in MS medium with 1 mg/L BA was higher in adventitious shoot induction (93%) and shoot elongation (3.8 mm) than single treatment of 1 mg/L BA. Adventitious shoots induced in this experiment rooted on 1/2 MS medium and acclimated over 95% on composed soil (peatmoss:sand=1:1).
This study was conducted to determine the effect of growth regulators, IBA, GA, and BA, on the adventitious bud formation, shoot differentiation, and inflorescence development in embryo culture of Korean ginseng. The adventitious bud formation and shoot differentiation were significantly promoted by application of a combination of 1 ma/l IBA and 5 mg/l GA. The adventitious buds had the primordial shoots and were differentiated as to plantlets. About 5 to 10 adventitious buds developed around the basal axis of the epicotyle of the ginseng embryo, and development of inflorescence was possible only after shoot differentiation. The MS medium supplemented with a combination of 3 mal 1 each of IBA, GA, and BA was most effective for in vitro inflorescence development, and the ratio of inflorescence formation was 18.4%.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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