톨 페스큐의 최적 조직배양 조건을 확립하기 위하여 성숙종자로부터 최적 배발생 캘러스유도조건 및 효율적인 식물체 재분화 체계를 확립하였다. 배발생 캘러스는 6 mg/L 2,4-D와 0.1 mg/L BA가 첨가된 MS배지에서 가장 높은 빈도로 유도되었으며, 식물체 재분화율도 증가시키는 것으로 나타났다. 식물체 재분화는 배발생 캘러스를 1 mg/L 2,4-D와 3 mg/L BA가 첨가된 N6배지에서 배양했을 때 50% 이상의 재분화율을 나타내었다. 기본배지의 종류에 따른 배양효율의 차이는 캘러스유도에는 MS배지가, 식물체 재분화에는 N6배지가 효과적이었다. 품종간 배발생 캘러스의 형성율과 식물체 재분화율은 Kentucky-31 품종이 각각 58.3%와 52%로서 가장 높은 효율을 나타내어 품종 간에 큰 차이를 나타내었다. 탄소원으로는 sucrose를 첨가해주었을 때 식물체 재분화율이 55%로 증가되었다. 본 연구를 통하여 확립된 단기간 고효율 재분화 시스템은 분자육종을 통한 신품종 톨 페스큐의 개발에 유용하게 응용되어질 수 있을 것이다.
섬오갈피 부정근의 생장과 생리활성물질 생산에 적합한 MS 배지 내 오옥신(IBA, NAA, IAA)과 사이토키닌(BA, kinetin, TDZ)의 종류와 농도를 구명하고자 250mL 삼각플라스크를 이용하여 5주간 액체 진탕 배양하였다. IBA $5mg{\cdot}L^{-1}$ 처리구에서 생체중과 건물중이 가장 높았으며, 부정근 내 총 페놀과 플라보노이드 함량 역시 NAA나 IAA처리구에 비해 높았다. 오옥신과 사이토키닌의 혼용처리에 따른 부정근의 생장은 IBA $5mg{\cdot}L^{-1}$와 TDZ $0.1mg{\cdot}L^{-1}$와의 혼용 처리구가 IBA 단용 처리구에 비해 생체중과 건물중이 각각 1.4배와 1.6배 증가하여 가장 높은 생장량과 생리활성물질 함량을 나타내었다. 이에 비해 BA와 kinetin과의 혼용 처리는 IBA 단용 처리와 비교해 부정근의 생장과 생리활성물질 생산에 크게 영향을 주지 않았다. 본 실험을 통하여 MS 배지 내 오옥신과 사이토키닌을 IBA $5mg{\cdot}L^{-1}$와 TDZ $0.1mg{\cdot}L^{-1}$로 혼용 처리 할 경우 섬오갈피 부정근의 생장량과 생리활성물질 함량을 크게 증가시킬 수 있음을 확인하였다.
The main objective of this study was to identify the most appropriate condition for root formation of in vitro micropropagated pear (Pyrus spp.) plants. In vitro propagation was induced on Murashige and Skoog (MS) medium with 2.0 mg/L of N6-benzyladenine (BA) and 0.2 mg/L of Indole-3-butyric acid (IBA) medium. The short pre-treatment of explants with a high concentration (1 mg/L) of NAA and IBA (R0 medium) in dark for three days, followed by transfer to five different media (R1 to R5) resulted in good rooting responses in the pear 'Oharabani (P. pyrifolia × P. communis)' genotype. For the rooting experiments, the highest rooting percentage (83.3 ± 8.3%), average root length (3.6 ± 1.9 mm), total root number (31 ± 4.0), and average root number per plant (2.6 ± 2.1) were obtained on half strength (1/2) of MS medium supplemented with 30 g/L sucrose without hormones and activated charcoal (AC) (R1 medium). The highest rooting percentage was obtained at 83.3% from explants on R1 and R3 media. The rooting procedure described in this study resulted in good root formation and significantly shorting the root induction time to within 14 days of culture. Further studies are underway to test the suitability of the protocol developed in this study for other pear genotypes.
We micropropagated pear (Pyrus species) using shoot tips and nodal explants from three pear genotypes. The ability to establish shoot tip cultures, proliferate shoots, induce rooting, and acclimatize the resulting plantlets are all elements of in vitro micropropagation. Shoots were induced from shoot tips on Murashige and Skoog medium (MS) with five different plant growth regulator combinations. The highest shoot formation rates were achieved for the three genotypes using MS supplemented with 1.0 mg/L N6-benzyladenine (BA) and 0.1 mg/L gibberellic acid (GA3). The maximum shoot number and shoot length for the three cultivars were recorded with 2.0 mg/L BA and 0.2 mg/L indole-3-butyric acid (IBA) in multiplication medium using nodal explants produced from microshoots. Nodal explants with one or two axillary buds cultured for three weeks initiated roots on medium supplemented with various concentrations of 1-naphthaleneacetic acid (NAA) or/and IBA in half-strength MS medium for adventitious rooting. The highest rooting response was with the combination of 0.2 mg/L NAA and 0.2 mg/L IBA. A combination of NAA and IBA resulted in a significant increase in the rooting ratio over NAA or IBA alone. In this medium, the root formation rate according to ranged from 68.9% for the BaeYun No. 3 genotype to 51.8% for the Hwanggeum genotype. We also investigated the influence of the concentration the polyamine phloroglucinol in rooting medium. For all three genotypes, the highest rooting ratio, longest root length, and greatest root number were observed in the treatments with 75-150 mg/L phloroglucinol. Most rooted plants were acclimatized successfully.
Mata-Rosas, Martin;Baltazar-Garcia, Rosario J.;Moon, Pamela;Hietz, Peter;Luna-Monterrojo, Victor E.
Plant Biotechnology Reports
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제4권2호
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pp.157-163
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2010
A protocol for in vitro propagation from pseudobulb sections of Lycaste armomatica (Graham ex Hook) Lindl., an ornamental and fragrant orchid, was developed. The effect of four cytokinins: kinetin (K), metatopolin (mT), $N^6$-benzyladenine (BA), and thidiazuron (TDZ), in equimolar concentrations, was investigated. Shoot formation from apical and basal pseudobulb sections was obtained in all treatments. A few medial sections cultured in media supplemented with BA formed protocorm-like bodies. Shoot formation was greater from the basal section than the apical, and mainly occurred in explants cultured in media containing TDZ. The highest average numbers of shoots per explant were achieved from basal sections cultured in media supplemented with TDZ at 4.4, 8.87 and 2.2 ${\mu}M$, forming on average 9.9, 8.6 and 7.3 shoots per explant, respectively. Since the medial pseudobulb section was the worst explant for propagation of L. aromatica, we recommend that pseudobulbs be divided into two sections; the basal half should be cultured in MS medium supplemented with TDZ at 4.4 ${\mu}M$ and the apical half with TDZ at 2.2 ${\mu}M$. Subculturing individual shoots in MS medium without plant growth regulators allows further development and rooting. A survival rate of more than 90% under greenhouse conditions was achieved. This research represents a direct contribution to the conservation and sustainable use of this valuable natural resource.
The goal of this research was to develop an efficient cryopreservation protocol for germplasms of yam (Diosorea batatas), that were cultivated in Korea. Comparative studies with four other cryogenic techniques and subsequent experiments for shoot regrowth were conducted. in vitro-grown shoot-apices of the D. batatas were successfully cryopreserved by encapsulation-dehydration. The maximum survival of shoot-apices could be achieved when the precultured (with 0.3 M of sucrose for one day) and encapsulated (with a 3%(w/v) Na-alginate solution) apices were dehydrated for $3.5{\sim}4\;h$ prior to direct immersion in LN (liquid nitrogen). The frequency of regrowth rate of cryopreserved apices was not decreased during 3-month storage period. The thawing method markedly affected survival of the cryopreserved apices, and thawing at $40^{\circ}C$ for 3 min produced the best results. When cryopreserved apices were post-cultured on the post-culture medium (MS), supplemented with $0.2mgl^{-1}$ of BA ($N_6$-benzyladenine) and $0.2mgl^{-1}$ of kinetin, they showed direct shooting without callusing.
Tea is one of the most consumed beverages worldwide and the relatively high levels polyphenols is benefit for health. In this study, we developed an efficient system for proliferation of callus from 'Anji Baicha', a cultivar of tea (Camellia sinensis). Callus tissue was initially induced by culturing leaf explants on medium containing different plant growth regulators. For callus induction, thidiazuron (TDZ) was more effective than 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), ${\alpha}-naphthalene$ acetic acid (NAA), and $N^6-benzyladenine$ (BA). The frequency of callus induction from leaf explants reached 90.21% on $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ TDZ and the developed callus was reddish and friable. We also tested the effect of different concentrations of NAA, 2,4-D, indole 3-acetic acid (IAA), BA, and TDZ, alone and in combinations, on callus proliferation. Medium supplemented with TDZ in combination with IAA was suitable for callus proliferation and accumulation of tea polyphenols. The growth index value and tea polyphenol content of callus cultured on MS medium containing $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ TDZ and $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ IAA was maximally 1,351% and 23.24%, respectively, and the relative abundance of epicatechin was as high as 17.449%. We also measured the antioxidant activity of all samples and the callus with the highest tea polyphenol content also exhibited high potential radical scavenging activity.
본 연구는 자생 난초과식물인 금새우난초의 기내 비대배 유도, 발아 및 배직경에 미치는 몇 가지 영향(NaOCl, 배지, 식물생장조절제)을 조사하기 위해 수행되었다. 1% NaOCl을 30분간 처리한 후 POM배지에 배양할 경우, 비대배 유도는 28.3%, 발아율은 54.8%, 배직경은 $205.8{\mu}m$로 가장 높게 조사되었다. NaOCl 무처리 종자를 POM배지에 배양할 경우, 비대배 유도는 8.5%, 발아율은 13.4%, 배직경은 $14.6{\mu}m$로 조사되었다. 또한 식물생장조절물질의 처리가 발아에 미치는 영향을 조사한 결과, 1.0 mg/L의 BA 처리구(95.6%)의 발아율은 대조구(54.5%)에 비해 1.75배 높게 조사되었다. AC와 sucrose의 처리 농도가 기내 식물체 생장에 미치는 영향을 조사한 결과, 엽장은 10 g/L의 sucrose 처리구에서 6.8 cm로 가장 길었고, 대조구는 3.3 cm로 가장 짧았다. 근장은 50 g/L의 sucrose 처리구에서 5.8 cm로 가장 길었고, 대조구는 1.7 cm로 가장 짧았다. 생중량과 건중량은 AC와 sucrose 처리구가 대조구에 비해 2~5배 이상 높은 결과를 보였다. 결과적으로 본 연구는 금새우난초의 기내 발아 및 증식에 미치는 몇 가지 요인에 관해 구체적인 결과를 제시하였고, 이러한 결과는 향후 자생 난초과식물의 증식 및 보존전략 개발에 중요한 기초자료로 제공 될 것이다.
Pterocarpus marsupium, Clitoria ternatea, and Sanseveiria cylindrica are some of the important and endangered medicinal plant species of India. Despite of medicinal properties, antibacterial potential of the plants have not yet been explored. The present study was designed to optimize the in vitro technique for micropropagation and to screen the extracts from leaves and in vitro raised calli for antibacterial properties. Excised leaf-explants from the parent plants were surface sterilized and cultivated on Murashige & Skoog's (MS) medium containing $N^6$-benzyladenine (BA) in concentrations of 1, 2, 5, and $10{\mu}M$. Optimal growth of calli was noticed at a concentration of $5{\mu}M$, therefore the extracts from calli grown at this concentration were further studied for antibacterial activity. Both alcoholic and aqueous extracts from leaves of respective plants, and their in vitro raised calli were tested for antibacterial activity by agar well diffusion method against a range of Gram-positive and Gram-negative bacteria. Aqueous extracts showed antibacterial activity against limited number of bacterial species; notably the extracts of C. ternatea which showed antibacterial activity against Streptococcus pyogenes, Bacillus subtilis and Bacillus cereus. Alcoholic extracts of all three plants showed antibacterial activity against a wider range of bacteria. Among the Gram-positive bacteria, extracts from C. ternatea showed strong antibacterial activity against Bacillus spp., whereas the extracts of S. cylindrica showed good antibacterial potential for Staphylococcus aureus, S. epidermidis and S. pyogenes. The extracts from all three plants showed antibacterial activity against Gram-negative bacteria, including, Salmonella spp. and Shigella dysenteriae; organisms causing enteric fever and dysentery. In most of the cases, the extracts from respective calli showed comparable, and in some cases better, result in comparison to the extracts from parent leaves. To the best of our knowledge this is the first preliminary report on antibacterial potential, especially through calli extracts, of these plants; and in vitro cultivation of the explants may be used to obtain phytotherapeutic compounds.
Pear (Pyrus spp.) is a typical fruit and grown in the temperate climate regions throughout the world. Development of appropriate methods for in vitro propagation and root induction are important to increase the production rate and plant quality rapidly. This study was conducted to find the most appropriate media conditions for in vitro propagation and rooting of three pear cultivars, 'Barttlett', 'BaeYun No.3' and 'Oharabeni'. In vitro propagation was induced on Murashige and Skoog medium (MS) with 2.0 mg/L N6-benzyladenine (BA) and 0.2 mg/L indole-3-butyric acid (IBA) medium. For root induction of these cultivars, the shoot explants of the propagated plants were cultured on two different media containing 1/2 MS medium containing 0.2 mg/L IBA with 15 g/L Sucrose (Rooting Medium 1, RM1) and 1/4 Linsmaier and Skoog medium (LS) medium containing 1 mg/L IBA and 1 mg/L NAA hormone with 7.5 g/L glucose (Rooting Medium, RM2) and after 2 weeks, the plants on the RM2 medium are transferred on RM1 medium (RM2 condition). After nearly seven weeks, percentage of rooting formation were 22.2% in RM1 and 30% in RM2 conditions for Barttlett and 70% in RM1 and 60% in RM2 conditions for Oharabeni cultivars. No differences in these cultivars were observed between RM1 and RM2 conditions. However, BaeYun No.3 cultivar was observed 0% in RM1 and 72.7% in RM2 conditions. This study will help to propagation and root induction of in vitro plants for various pear cultivars.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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