화상분석장치(IBAS 2000 Kontron, Germany)출 이용하여 충체의 체면적과 불규칙한 내부장기에 대한 발육정도를 측정함으로서 간흡충의 성장과정을 보다 정확히 알아보고자 하였다. 간흡충의 피낭유충을 200 g 내외의 Sprague-Dawley계 백서에 50마리씩 경구투여하여 감염시키고, 1일, 6 일, 9일, 12일, 15일, 21일, 30일 및 90일에 희생시켜 담도내의 충체을 부위별로 치수하였고, 피낭유충은 탈낭시킨 후 형태가 좋은 54마리를 수집하였다. 회수된 충체는 총 474마리로 평균회수율은 31.6%이었나 간흡충의 체장과 체곡은 겸염 후 30일까지 급격히 증가한 다음 감염 후 90일까지는 완만하게 증가하였으나, 체면적은 감염 후 30일 부터 90일 사이에도 성장속도가 감소하지 않는 약간 다른 증가양상을 보였다 또한 고환, 난소, 저정낭 등의 발육정도를 용이하게 측정할 수 있었는데. 이들 내부 장기는 자궁내 충란이 충만하게 되는 감염 21일 까지는 비교적 빠른 발육을 보였으나 이후에는 증가속도가 둔화되어 전형적인 S형 성장곡선을 보여 주었고 전고환과 후고환의 발육양상은 거의 유사하였다. 그러나 저정낭은 감염 15일 부터 21일 사이에 급격한 발육증가를 보였고, 이는 저정낭이 농축된 정액으로 충만되는 시기와 거의 일치하였다. 따리서 저정낭의 성장곡선은 간흡충의 성적지표로 이용할 수 있을 것으로 생각된다. 화상분석장치를 이용함으로서 불규칙하여 측정하기 어려웠던 충제의 체면적 및 내부 장기의 성장정도를 알 수 있게 되어 간흡충의 발육 양상에 대하여 보다 다양하고 정확한 관찰이 가능하게 되었다.
This study was carried out to investigate the effective genetic resources preservation system using the frozen boar semen. The porcine oocytes were matured for 44 hours in NCSU-23 medium with or without 10% Porcine Follicle Fluid (PFF), 0.5 ${\mu}g/ml$ porcine FSH, 0.5 ${\mu}g/ml$ equine LH, 1.0 ${\mu}g/ml$ 17 $\beta$-estradiol ($E_2$) and 10 ng/ml Epidermal Growth Factor (EGF) under mineral oil at $38.5^{\circ}C$ in humidified atmosphere of 5% $CO_2$ in air. After 44 h of culture, the oocytes were inseminated with frozen-thawed semen and fresh semen prepared with mTBM medium for 6 h. Later, set of 50 presumptive zygotes were transferred into 4-well dish (500 ${\mu}l$) of IVC medium. for embryos freezing, slow-freezing and vitrification methods were used as a cryopreservation. Differences among treatments were analyzed using General Linear Model Procedure by SAS Package (version 6.12) differences were considered significant when p<0.05. Following IVF and IVC, the rates of cleavage and blastocysts formation were significantly higher (p<0.05) in hormone supplemented group than that of hormone-free group (25.7 vs, 12.1). The development rates to cleavage and blastocysts were significantly higher in PZM-5 group than NCSU-23 group (60.3%, 46.6% vs 27.4%, 11.1%). Further improvement was achieved when PZM-5 was supplemented with FBS. Cleavage rates was significantly higher in fresh semen source group than frozen semen (66.7% vs 43.7%). However in blastocysts rates was similar two groups. Post-thaw survival rates of embryos were 1.2% and 2.2% in slow-frezing and vitrification groups, respectively. The results of our study suggest that it is still possible to improve the culture conditions and boar semen cryopreservation for enhance reproductive technology and animal genetic resources conservation.
The aim of present experiment was to examine commercial synthetic extender(AndroMed) for semen cryopreservation of Korean Black Bull. Semen was collected from a Korean Black Bull using an artificial vagina and transported to the laboratory. The semen was diluted 1:1 by AndroMed. The pellect was diluted to final sperm concentration of $5{\times}10^5/ml$ by doubling in every 10 minutes at $4^{\circ}C$ cold chamber. The semen was equilibrated for 1 hr at cold chamber and packed to 0.5 ml straw. The semen straws were located above 5 cm of liquid nitrogen for 5 minutes, above 5 cm for 10 minutes and above 10 cm for 10 min. And then the frozen straw was plunged to $LN_2$. The presented straws were examined the viability and motility after thawed at $37^{\circ}C$ water bath. Hanwoo semen was used as KPN (Korea Proven Bull Number) in this experiment. The survival rates was significantly higher in fresh semen than frozen semen ($80{\pm}14%\;and\;43{\pm}11%$). However, the motility rates was similar (80.7% and 66.4%). The survival and motility rates were higher in 5cm, 10 min treatment group than the other two groups in straw-located height and duration above $LN_2$ ($50{\pm}14%$ and 70.7% vs, 33.18% and $65{\pm}7%$ vs, 30.14% and 65.7%, respectively). The development rates to cleavage was higher in Black Cow than Hanwoo semen (62.2%, 64.4%), However, The development rates to blastocyst was higher in Hanwoo than Black cow semen (25.9%, 23.0%). In conclusion. The present results that acceptable fertilization and cryopreservation could be obtained by in vitro fertilization with frozen-thawed semen using a synthetic semen extender (AndroMed).
DSL, 캐이블 모뎀, 그리고 이더넷 기반으로 구축된 대부분의 광대역 접속망은 주로 인터넷 접속 서비스 제공에 활용되고, 최선형(Best-effort) 인터넷 서비스를 제공하며, 정액제(Flat Rate Pricing) 방식의 요금 체계를 채택하고 있어서 사용자별 그리고/또는 응용 서비스별 차별화된 통신 서비스 제공이 어렵다. 그러나 최근 멀티미디어 통신 기술, 보안 기술 등의 발전으로 최선형 인터넷 접속 서비스 이상의 서비스 품질(QoS-Quality of Service) 제공을 요구하는 대화형/스트리밍형 멀티미디어 서비스와 VPN(Virtual Private Network)의 도입이 확대되고 있다. 인터넷에서 QoS 제공을 위하여 RSVP 기반의 IntServ와 DiffServ 와 같은 다양한 기술들이 개발되어 왔다. 본 논문에서는 현재의 광대역 접속망 구조와 QoS 지원 현황을 분석하고, 광대역 접속망 환경에서 멀티미디어 서비스 지원을 위해 요구되는 QoS를 지원할 수 있는 현실적인 접근법과 구현 방안을 제시한다. 본 논문에서 제시하는 QoS 지원 방안은 종량제 형태의 과금 체계와 DiffServ 방식의 QoS 지원 기법의 결합으로 이루어지고, 기존 광대역 접속망과의 역호환성을 고려한 단계적인 접근 방안을 채택하고 있다.
The objective of this study was to develop of semen transport system for cryopreservation and fertility in bull sperm. The ejaculated semen were diluted with Triladyl containing 20% egg-yolk for transportation. Diluted semen was transported by three methods that there were wrapping tissue (Tissue), sinking under $30^{\circ}C$ water (Water) and sinking between warm water and air (Air) methods. Semen was transported within 2 hours in $0.3^{\circ}C$. For this study, the freezing of diluted semen were added with Triladyl containing 20% egg-yolk. And frozen-thawed sperm were estimated with SYBR14/PI double stain for viability, FITC-PNA/PI double stain for acrosome reaction analysis and Rhodamine123 double stain for mitochondrial intact assessment. In results, live sperm (SYBR+/PI-) in Air treatment group ($43.3{\pm}4.7%$) was significantly (p<0.05) higher than other treatment groups (Tissue: $16.3{\pm}2.7%$ and Water: $27.5{\pm}3.1%$), dying sperm (SYBR+/PI+) in Air treatment group ($55.6{\pm}4.7%$) was significantly lower than other treatment groups (Tissue: $77.6{\pm}3.2%$ and Water: $67.6{\pm}3.3%$) (p<0.05). Acrosome reaction in Air treatment group ($0.2{\pm}0.1%$) within live sperm (PI negative region) was significantly (p<0.05) lower than other treatment groups (Tissue: $0.7{\pm}0.2%$ and Water: $0.5{\pm}0.1%$), the acrosome reaction in Air treatment group ($28.6{\pm}2.8%$) within all sperm also was significantly lower than other treatment groups (Tissue: $44.2{\pm}1.8%$ and Water: $36.2{\pm}2.0%$) (p<0.05). And mitochondrial intact in Air treatment group within live ($97.1{\pm}0.4%$) and all ($61.9{\pm}3.3%$) sperm were significantly higher than other treatment groups (Tissue: $85.2{\pm}3.3%$, Water: $87.8{\pm}2.9%$ within live sperm and Tissue: $49.28{\pm}3.7%$, Water: $42.0{\pm}3.1%$ within all sperm) (p<0.05). Therefore, we suggest that transportation by sinking method between warm water and air was beneficial to improvement of fertility in frozen-thawed in bull semen.
For evaluating the boar semen quality, sperm motility is an important parameter because the movement of sperm indicates active metabolism, membrane integrity and fertilizing capacity. Phospholipase C zeta (PLCz) is important enzyme in spermatogenesis, but the effect has not been confirmed in pigs yet. Therefore, this study was aimed to analyze their association with sperm motility and kinematic characteristics. DNA samples from 124 Duroc pigs with records of sperm motility and kinematic characteristics [total motile spermatozoa (MOT), curvilinear velocity (VCL), straight-line velocity (VSL), the ratio between VSL and VCL (LIN), amplitude of lateral head displacement (ALH)] were subjected. A SNP in non-coding region of PLCz g.158 A > C was associated with MOT (p < 0.05), VCL (p < 0.01), LIN (p < 0.01) and ALH (p < 0.05) in Duroc population. Therefore, we suggest that the intron region of the porcine PLCz gene may be used as a molecular marker for Duroc boar semen quality, although its functional effect was not defined yet. Whether the association is due to the candidate gene or not require further verification. Thus, it will be of interest to continue association studies in the regions surrounding those genes.
멸종위험성이 높은 재래돼지를 유전자원으로서 안전하게 보존하고 유전적 다양성을 유지하기 위해 체내수정란의 동결보존 방법을 수행하였다. 재래돼지의 과배란유기는 altrenogest를 1일 20mg씩 18일 경구투여하고 PMSG 500~l,000IU 근육주사후 80시간에 hCG 500~750IU를 근육주사하였다. 발정이 관찰된 개체는 발정개시후 12시간과 24시간에 자연교배 또는 액상정액을 이용하여 2회씩 수정시켰다. 최종 수정후 5일째에 외과적으로 개복수술하여 FBS가 5% 첨가된 D-PBS 관류액으로 자궁으로부터 수정란을 회수하여 상실기, 배반포기, 확장배반포기의 수정란으로 구분하였다. 회수된 수정란은 FBS가 20% 첨가된 D-PBS의 0.4, 0.8, 1.4M glycerol 항동해제에 각 단계별로 10분씩 평형시킨후 수정란동결기(CL863, Australia)를 이용하여 18$^{\circ}C$부터 -7$^{\circ}C$까지 2$^{\circ}C$/min의 냉각속도와 -7$^{\circ}C$부터 -35$^{\circ}C$까지 0.5$^{\circ}C$/min의 동결속도(실험1), 1$^{\circ}C$/min의 냉각속도와 0.3$^{\circ}C$/min의 동결속도(실험 2)로 동결시켰다. 또한 FBS가 20% 첨가된 D-PBS의 ethylene glyco1(EG) 1.8M의 항동제에 15분간 평형시킨후 실험 1과 동일한 방법으로 동결시켰다(실험 3). 동결수정란의 융해는 37$^{\circ}C$의 항온수조에서 30초간 실시하였다. 항동해제로 glycerol을 이용한 수정란은 융해후 3가지 농도로 0.3M sucrose, 0.8M glycerol, 0.4M glycerol을 첨가한 D-PBS에 각각 10분씩 단계적으로 정치시킨 다음, 10% FBS 첨가 mNCSU-23으로 3회 세척했다. 항동해제로 EG를 이용한 수정란은 융해후 즉시 D-PBS에 각각 10분간 정치시킨 다음, 10% FBS 첨가 mNCSU-23으로 3회 세척했다. 항동해제가 제거된 수정란은 FBS가 10% 첨가된 mNCSU-23 배양액에서 39$^{\circ}C$, 5% $CO_2$ 배양기에 48시간 배양하면서 생존여부를 판단하였다. 실험 2에서 확장배반포배 수정란이 25.3%의 생존율을 나타내었으며, 실험 1과 실험 3에서는 수정란의 형태와 관계없이 생존성을 확인할 수 없었다. 이상의 결과로 보아 glycerol 완만동결에서는 확장배반포기 수정란 이상이 보존가능한 것으로 추정되나 더 추가적인 연구가 요구된다.
This studies were conducted to investigate the survival rate of frozen-thawed spermatozoa of Jindo Dog by monosaccharide and freezing rates. Experimental animals were prepared 12 males within 1~8 year's old and collected once in a couple of weeks by digital manuplation methods. Collected semen was diluted 1:1 with Tris-egg yolk extender and added 4, 6 or 8% of glycerol and none, 4 mM glucose or 4 mM fructose as cryoprotectant and was equilibrated for 2 hrs in $4^{\circ}C$. In monosaccharide groups, the freezing rate was 5 cm-5 min. above $LN_2$. The survival rates without monosaccharide were $50.7{\pm}19.0%$, $58.6{\pm}18.0%$, $40.0{\pm}10.0%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively. In addition of glucose, the survival rates were $43.1{\pm}14.7%$, $38.1{\pm}16.5%$, $33.3{\pm}4.0%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively and in fructose, were $47.9{\pm}21.1%$, $61.3{\pm}6.2%$, $34.3{\pm}12.6%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively. There showed significantly different between glycerol groups and monosaccharides groups (p<0.05). The survival rates of freezing rate in 5 cm-5 min. group was $64.5{\pm}15.8%$, $51.9{\pm}27.6%$, $29.7{\pm}24.8%$ and in 10 cm-10 min. group was $62.5{\pm}20.3%$, $64.9{\pm}23.6%$, $34.5{\pm}27.4%$ in 4, 6 or 8% glycerol, respectively. There were significantly different between freezing rates (p<0.05). These results suggest that the addition of fructose with 6%-glycerol and slow freezing improve the survival of frozen-thawed sperm in Jindo Dog.
본시험은 산란노계의 인공수정에 있어서의 적정주정간격을 구명하기 위하여 실시하였다. 580일령 백색레그혼 수탉 20수, 530일령 갈색실용산란계암탉 120수를 공시하였으며, 시험기간중의 평균산란율은 61.6%이었고 공시란은 2,283개이었다. 주정간격 T$_1$ 2일, T$_2$, 4일, T$_3$ 6일의 3개 처리구를 설정하여 혼합정액을 1회 0.03$m\ell$씩 주입하였다. 6일마다 알을 수집, 부화 5일만에 투시검란하였던 바 시험결과를 요약하면 다음과 같다. 전시험기간중의 주정간격별 평균수정율은 T$_1$(2 일) 87.5%, T$_2$(4 일) 81.1%, T$_3$(6 일)65.1%로서 T$_1$과 T$_3$, T$_2$와 T$_3$ 사이에 5% 수준의 유의차가 인정되었다. 주정후의 일별수정율의 평균은 각구 모두 주정 후 제2일이 가장 높아서 T$_1$, 90.7%, T$_2$, 84.0%, T$_3$, 71.7%이었으며, 그 이후는 점진적으로 조금씩 떨어지는 경향을 보였다. 본시험결과를 종합컨대 노산란계에 있어서의 적정주정간격은 2일이라 하겠으며, 전반적으로 주정회수를 거듭함에 따라 수정율이 점증하였는데 2일간격 주정의 경우 최고수준의 수정율(98.2%)에 도달하는 주정회수는 6회차 이었다.
본 연구에서는 수컷 랫드에 DEHP를 투여하여 실험적으로 생식 독성을 유발하고, vitamin E와 catechin을 단독 및 병용 투여하여 수컷 랫드에서 정소의 조직학적 변화, 정액 특성의 변화 및 정자의 운동성 변화 등을 조사하여 그 예방 효과를 알아보고자 하였다. DEHP를 투여한 군은 대조군에 비해 정자농도, 정자 생존율, 정상 정자율이 감소하였다. DEHP에 의한 생식 독성을 예방하기 위해 vitamin E와 catechin을 단독 또는 병행 투여한 결과, DEHP를 투여한 군에 비하여 정자 농도, 정자 생존율, 정상 정자율이 증가하였다. 이러한 결과를 종합해 볼 때, catechin과 vitamin E의 투여는 DEHP에 의한 생식 독성을 예방하는 효과가 있는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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