Inefficiency of in vivo gene transfer using currently available vectors reflects a major hurdle in cancer gene therapy. Both viral and non-viral approaches have been described to improve gene transfer efficiency but suffer from a number of limitations. Here we tested an adenovirus carrying the small peptide ligand derived from heregulin${\beta}$ EGF-like domain onto fiber, the adenoviral capsid protein, to deliver transgene to ovarian cancer cells which overexpress ErbB, the cognate receptors for heregulin. The attachement of 53 amino acids to fiber didn't affect on the fiber's trimer structure that is critical for the viral entry to cells. The fiber-modified adenovirus can mediate entry and expression of a ${\beta}$-galactosidase into cancer cells in an increased efficiency compared the unmodified adenovirus. Particularly, the gene transfer efficiency was improved up to 5 times in OVCAR3 cells, an ovarian cancer cell line. Such transduction systems hold promise for delivering genes to ErbB receptor overexpressing cancer cells, and could be used for future cancer gene therapy.
Transformation of ginseng plants was achieved by biolistic system with cotyledon explants and callus using phosphinothricin acetyl-transferase (PAT) gene resisting to a herbicide of Bialaphos. The binary vector for transformation was constructed with disarmed Ti-plasmid and with double 355 promoter. The introduced NPT II and PAT genes of the transgenic ginseng plants were successfully identified by the PCR, and the survival test on the medium with basta. The transgenic ginseng plants were propagated using repetitive secondary embryogenesis. The transgenic ginseng plantlets had normal structures of roots and shoots, and dormant buds for new year sprouting. We transferred the transgenic plants to greenhouse and observed the continuing growth until a new year.
Proceedings of the Korea Contents Association Conference
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2012.05a
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pp.133-134
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2012
후성유전은 DNA 염기서열이 변화하지 않고 DNA의 메틸화(methylation)및 히스톤 단백질의 변형(modification)등의 후천적 과정에 의해 유전자 발현이 조절되는 현상이다. 특히 DNA 메틸화 정도에 대한 분석은 후성유전을 이해하는 중요한 접근방법 중 하나이다. DNA 메틸화 패턴 분석을 위하여 노화관련 109개 유전자들의 단백질 상호작용 네트워크를 구축하였으며 -3000bp ~ +200bp 사이에 있는 DNA 염기서열 정보를 추출하여 기존에 알려진 메틸화 저항성 (Methylation resistant) 모티프를 네트워크로 구축하였다. 메틸화 모티프기반 단백질 네트워크에서는 기존 단백질 네트워크보다 더 복잡한 구조를 이루고 있었다. 이러한 구조는 동일한 메틸화 모티프들이 여러 유전자들의 활성을 조절할 것으로 추측되며 복잡한 모티프들을 분석하기 위한 방법으로 이용될 수 있을 것이다.
A total of 94 tomato accessions were evaluated for the resistance to $Tomato$$spotted$$wilt$$virus$ (TSWV) using a Sw5-2 SCAR marker and bioassay. PCR products of the marker were approximately 574 bp, 500 bp, and 462 bp, among which the longest was linked to TSWV resistance allele of Sw5-b. This allele was only found in three accessions (09-438, 10-318, and 10-321) in which some individuals showed apparent recovery or stem necrosis symptom to a tomato isolate of TSWV-pb1. Thirty-five individuals (one per each accession) which were non-infected by ELISA were selected for further observation. Among these, 26 individuals that did not show any symptom at 5 months after inoculation were confirmed for viral infection by RT-PCR. TSWV-specific PCR amplicon was weakly detected in all 26 individuals including 'Eureta', a commercial F1 possessing the resistance allele of Sw5-b. The resistant genes in the selected individuals may play an important role for reducing the viral concentration in tissues of inoculated tomato plants and seems to be quantitatively controlled by several factors including Sw5-b gene.
High temperature stress might affect the yield and quality of Chinese cabbage. In order to develop cultivars resistant to high temperature stress, we developed polymorphic DNA markers for trehalose synthesis genes related to abiotic stress resistance. A total of 28 Brassica rapa ESTs homologous to trehalose synthesis genes of Arabidopsis were found from the NCBI database. The polymorphic DNA sequences were searched between Chinese cabbages - Chiifu, which is relatively susceptible to high temperature stress, and Kenshin, which is tolerant to high temperature stress. Among the 28 ESTs, we found 10 ESTs that have either insertion/deletion and/or single nucleotide polymorphism between the two cultivars. Those polymorphic sites were then targeted for the development of 10 PCR based markers. These molecular markers related to trehalose genes could be used not only to test their relationship with abiotic stress resistance in Chinese cabbage, but also the development of abiotic stress resistant cultivars using MAS.
The ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily represents the largest transmembrane protein that transports a variety of substrates across extra- and intra-cellular membranes. In insects, the ABC transporter proteins play crucial roles in insecticide resistance. To date, no studies have investigated the involvement of ABC transporter gene for cross-resistance to insecticide chemistries. Here, we studied such possible mechanisms against six conventional insecticides using transgenic Drosophila melanogaster strains carrying Mdr49 transcript variant A. For the 91-R and 91-C strains of Drosophila melanogaster, although they have a common origin, 91-R has been intensely selected with DDT for over 60 years, while 91-C has received no insecticide selection. Our transgenic analyses showed that overexpression of 91-R-MDR49 transcript variant A along with three amino acid variations can yield a relatively low degree of cross-resistance to carbofuran (2.0~6.7-fold) and permethrin (2.5~10.5-fold) but did not show cross-resistance to abamectin, imidacloprid, methoxychlor, and prothiofos as compared to the Gal4-driver control strain without transgene expression. These results indicate that the overexpression of Mdr49A in itself leads to a cross-resistance and three amino acid changes have additional effects on positive cross-resistance to carbofuran and permethrin.
Virus diseases often cause serious damage to rice production in Asia. The lack of information on virus resistance genes has been a major obstacle for the breeding of resistant varieties. In order to identify DNA marker associated with resistance against rice stripe virus (RSV), the quantitative trait locus (QTL) was carried out using advanced backcross population developed from a cross between RSV-resistant tongil type cultivar Shinkwang and susceptible japonica cultivar Ilpum. A RSV resistance QTL $qSTV11^{SG}$ explaining 44.2% of the phenotypic variation was identified on chromosome 11 of Tongil type rice cultivar 'Shingwang'. $qSTV11^{SG}$ was tightly linked to DNA marker RM6897. The RM6897 divided as resistance type allele and susceptible type alleles. Twenty seven resistant varieties showed the resistant-type allele and 23 susceptible varieties were susceptible-type allele to the marker of RM6897. This results and the molecular markers presented here may be useful in rice breeding for improving RSV resistance in japonica rice.
The study was carried out to develop transformants resisting to Phyophthora blight disease in the domestic pepper cultivar Subicho. In transforming of syn600 promoter with elicitin gene using Agrobacterium (LBA4404/pBI101 syn600-syn${\alpha}$-elicitin) to cotyledons of pepper, rate of shoot formation in 'Subicho' was 11.1% in medium containing 3 mg/L zeatin and 0.05 mg/L NAA, and also 12.8% in medium containing combination of 4 mg/L zeatin and 0.05 mg/L MAA. For PCR reaction using elicitin gene primer of transformants regenerated from cotyledons, we detected a specific band of 536 bp, and also showed strong signal at position of 536 bp in accordance with NPTII gene used as probe in Southern blot. Transformants pepper shown resistance to blight fungus was inoculated to seedlings of the $T_{1}\;and\;T_{2}$ transformants by concentration (density: zoo spore $10^{3}/mL$).
Park, Sang Ryeol;Cha, Eun-Mi;Moon, Seok Jun;Shin, Dongjin;Hwang, Duk-Ju;Ahn, Il-Pyung;Bae, Shin-Chul
Korean Journal of Breeding Science
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v.43
no.5
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pp.457-463
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2011
Plant specific gene family, NAC (NAM, ATAF, and CUC) transcription factors have been characterized for their roles in plant growth, development, and stress tolerance. In this study, we isolated OsNAC69 gene and analyzed expression level by inoculation of bacterial leaf blight pathogen, Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo). NAC transcription factor family can be divided into five groups (I-V). On the basis of phylogenetic analysis, OsNAC69 was fall into group II. OsNAC69 was strongly induced 1 hr after infected with Xoo. To investigate its biological function in the rice, we constructed vector for overexpression in rice, and then generated transgenic rice lines. Gene expression of OsNAC69-overexpressed transgenic rice lines were analyzed by northern blot. Analysis of disease resistance to pathogen Xoo, nine OsNAC69-overexpressed transgenic rice lines showing high expression level of OsNAC69 were shown more resistant than wild type. These results suggest that OsNAC69 gene may play regulatory role during pathogen infection.
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (Pcc) causes soft rot disease in various plants. Although many studies about Pcc have been going on, little is known yet about the defense genes from plants. To identify defense associated genes in response to Pcc, we screened about 20 thousand Arabidopsis T-DNA knock out lines by inoculation with Pcc. We obtained a line (Atspt1) showing more susceptible symptom compared to WT (Col-0) on 1 day after the inoculation of Pcc on leaves of Arabidopsis with toothpicks. In this study, we optimized the system to select resistant and susceptible lines to Pcc from T-DNA inserted pool of Arabidopsis and expect the system and Atspt1 might be used for molecular breeding to produce resistant vegetables against Pcc.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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