Cellulose utilising hybrids between Cellulomonas fimi and Bacillus pumilus were isolated after PEG mediated protoplast fusion. 33% (w/v) PEG #6, 000 and 50mM $Ca^{++}$were optimum concentration. The intergeneric fusion frequency was 3.2$\times$10$^{-7}$ xtracellular CMCase and $\beta$-glucosidase activities were detected from one hydrid unlike only CMCase was detected from Cellulomonas fimi.
Two lipase genes (bpl1 and bpl3) from Antarctic Bacillus pumilus strains were expressed in Bacillus subtilis. Both recombinant lipases BPL1 and BPL2 were secreted to the culture medium and their activities reached 3.5 U/ml and 5.0 U/ml, respectively. Their molecular masses apparent using SDS-PAGE were 23 kDa for BPL1 and 19 kDa for BPL3. Both lipases were purified to homogeneity using ammonium sulfate precipitation and HiTrap SP FF column and Superose 12 column chromatographies. The final specific activities were estimated to be 328 U/mg for BPL1 and 310 U/mg for BPL3. Both lipases displayed an optimum temperature of $35^{\circ}C$, similar to other mesophilic enzymes. However, they maintained as much as 70% and 80% of the maximum activities at $10^{\circ}C$. Accordingly, their calculated activation energy at a temperature range of $10-35^{\circ}C$ was 5.32 kcal/mol for BPL1 and 4.26 kcal/mol for BPL3, typical of cold-adapted enzymes. The optimum pH of BPL1 and BPL3 was 8.5 and 8.0, respectively, and they were quite stable at pH 7.0-11.0, showing their strong alkaline tolerance. Both lipases had a preference toward medium chain length ($C_6-C_{10}$) fatty acid substrates. These results indicate the potential for the two Antarctic B. pumilus lipases as catalysts in bioorganic synthesis, food, and detergent industries.
본 연구는 고추 역병 방제시 유기합성 살균제의 사용량을 감소하기 위하여 수행되었다. 고추 역병 방제를 위하여 두 개의 미생물농약과 두 개의 살균제의 혼용처리 효과를 실내, 온실, 포장에서 확인하였다. 미생물농약과 살균제를 혼용하여 토양 관주 시 추천사용농도의 절반농도로 희석하여 시험을 진행하였다. 온실 포트검정 결과 B. pumilus QST2808와 De (dimethomorph + ethaboxam) 혼용처리조합이 2개의 미생물농약(B. pumilus QST2808, P. polymyxa AC-1)과 2개의 살균제(De, Mo) 혼용조합으로 이루어진 총 4개의 혼용처리 조합 중 역병 억제효과가 가장 좋았다. 또한 B. pumilus QST2808와 De 혼용조합은 살균제 De나 Mo 단독처리와 비슷한 억제효과를 나타내었다. 포장시험에서는 역병 방제를 위하여 미생물농약(B. pumilus QST2808, P. polymyxa AC-1)과 유기합성 살균제 De (dimethomorph + ethaboxam)을 혼용하여 7-10일 간격 4회 처리시 78.8%-82.0%의 방제가를 나타내었으며, 살균제(De, Mo) 각각을 단독처리 하였을 경우에는 65.7%-85.8%의 방제가를 나타내었다. 결과적으로 화학농약의 사용량 절감을 위해 미생물농약과 화학농약의 혼용 처리는 가능한 방법으로 추천할 수 있을 것이다.
The purification and characterization of a $Mn^{2+}$-dependent alkaline serine protease produced by Bacillus pumilus TMS55 were investigated. The enzyme was purified in three steps: concentrating the crude enzyme using ammonium sulfate precipitation, followed by gel filtration and cation-exchange chromatography. The purified protease had a molecular mass of approximately 35 kDa, was highly active over a broad pH range of 7.0 to 12.0, and remained stable over a pH range of 7.5 to 11.5. The optimum temperature for the enzyme activity was found to be $60^{\circ}C$. PMSF and AEBSF (1 mM) significantly inhibited the protease activity, indicating that the protease is a serine protease. $Mn^{2+}$ ions enhanced the activity and stability of the enzyme. In addition, the purified protease remained stable with oxidants ($H_2O_2$, 2%) and organic solvents (25%), such as benzene, hexane, and toluene. Therefore, these characteristics of the protease and its dehairing ability indicate its potential for a wide range of commercial applications.
The protease produced by a Bacillus pumilus CN8 strain was purified by DEAE-Cellulose-52 ion exchange. It has a molecular weight of approximately 96,920 Dalton. In the present study, this protease showed strong activity over a broad range of pH (6.5-9.5) and temperature from $40^{\circ}C$ to $60^{\circ}C$, and the protease performed the maximal activity at pH 7.3 at $42^{\circ}C$. The effect of metal ions on protease activity showed that $K^+$ could slightly increase the protease activity, and other ions such as $Zn^{2+}$, $Fe^{2+}$, $Na^+$, $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$ had no significant activation or inhibition to the protease (P> 0.05), and the more important is that $Cu^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Sn^{2+}$, $Cd^{2+}$ had a strong inhibitory effect on the protease activity.
가금류의 도축 부산물로 대량 배출되고 있는 우모는 주로 생물학적으로 난분해성 단백질인 케라틴으로 구성되어 있다. 따라서 물리화학적 처리에 의하여 우모를 처리하고 있으나 이 방법은 환경오염을 유발한다. 따라서 본 연구에서는 환경친화적 우모 분해 공정을 개발하고, 우모 분해산물의 식물 성장을 위한 비료로서의 가치를 평가하기 위하여 퇴비화 볏짚에서 케라틴 분해효소 생성능이 우수한 균주인 RS7을 분리하였다. RS7의 생화학적 특성과 16S rDNA의 염기 서열을 분석하여 동정한 결과, Bacillus pumilus RS7로 동정되었다. B. pumilus RS7은 $30^{\circ}C$에서 배양 5일 만에 우모를 완전히 분해할 수 있었다. 본 균주에 의한 우모 분해산물은 Helianthus sannuus L.의 생장율, 잎 수 증가량, 개화율, 건조 생체량에 있어 대조군과 화학적 우모 분해산물보다 우수하였다. Bacillus pumilus RS7에 의한 우모 분해산물은 식물 성장 촉진을 위한 미생물기원 비료로써의 역할을 수행할 수 있었으며, 이에 따라 양계산업에서 배출되는 우모 폐기물이 환경에 주는 악영향을 감소시킬 수 있을 것으로 예측된다.
Twenty six microorganisms were isolated from soil and horse manure samples from in Iowa, U.S. Microorganisms were cultivated and screened by using plate count agar (PCA) at $35^{\circ}C$ containing 1% (w/v) oat spelt xylan instead of glucose. The xylanase activities of bacterial strains were analyzed by measuring the concentration of reducing sugar by DNS method. All isolated strains were characterized as the rod form and gram positive strains. Among the isolated strains, the HM6 strains gave the highest xylanase activity. This strain was identified as Bacillus pumilus HM6 by 16S rDNA sequence, morphological and biochemical analysis. Optimal culture temperature and initial medium pH for B. pumilus HM6 were $30-35^{\circ}C$ and pH 6-7, respectively. The maximum xylanase activity of 6879 IU/mL was obtained after growth of HM6 with 1% (w/v) oat spelt xylan at $35^{\circ}C$ for 6 days. Studies on enzymatic properties showed that the optimum conditions for the highest xylanase activity were $60^{\circ}C$ and pH 8.0. In addition, xylanase activity was stable over 2 hours at $50^{\circ}C$, whereas activity decreased after 30 min at $70^{\circ}C$.
Rice blast, caused by Magnaporthe oryzae, is one of the most destructive rice diseases worldwide. The aim of this study was to screen bacterial isolates to efficiently prevent the occurrence of rice blast. A total of 232 bacterial isolates were extracted from nonrhizospheric rice soil and were screened for antifungal activity against M. oryzae using a leaf segment assay. Strains S170 and S9 showed significant antagonistic activity against M. oryzae in vitro and in leaf disk assays, and controlled M. oryzae infection under greenhouse conditions. The results showed that strains S170 and S9 could effectively control rice leaf blast and panicle neck blast after five spray treatments in field. This suggested that the bacterial strains S170 and S9 were valuable and promising for the biocontrol of rice disease caused by M. oryzae. Based on 16S rDNA, and gyrA and gyrB gene sequence analyses, S170 and S9 were identified as Bacillus amyloliquefaciens and B. pumilus, respectively. The research also demonstrated that B. amyloliquefaciens S170 and B. pumilus S9 could colonize rice plants to prevent pathogenic infection and evidently suppressed plant disease caused by 11 other plant pathogenic fungi. This is the first study to demonstrate that B. amyloliquefaciens and B. pumilus isolated from nonrhizospheric rice soil are capable of recolonizing internal rice stem tissues.
꿀풀목 현삼과에 속하는 식물들의 재분류가 최근에 이루어졌는데, 엽록체 DNA의 염기서열에 따라 많은 수의 식물들이 꿀풀목의 다른 과로 옮겨졌다. 이들 중에서 국내의 산야에서 쉽게 발견할 수 있는 꽃며느리밥풀, 나도송이풀, 물칭개나물, 외풀, 주름잎의 계통분류를 시도해 보았다. 우선, 이 식물들의 18S rRNA 및 ITS1의 염기서열을 결정하여 GenBank에 등록하였다(각각, accession numbers GU359046, GU359047, GU359048, GU359049, GU359050). 꽃며느리밥풀, 나도송이풀 및 물칭개나물의 경우에는 엽록체 DNA의 염기서열에 기초를 둔 현재의 분류체계와 본 연구에서 분석한 결과가 잘 일치하였다. 그러나 주름잎과 외풀의 경우에는 분석 결과에 있어서의 차이가 커서 결론에 도달할 수가 없었다.
한국 특산종 Cobitis kireensis의 두 아종 C. k. koreensis와 C. k. pumilus의 지리적 변이 및 아종의 위치를 규명하기 위하여 남한의 6개 집단에서 채집된 457개체를 대상으로 형태 형질 분석 및 전기영동법에 의한 유전적 변이를 조사하였다. 형태형질의 계측, 계수 및 discriminant function 분석에서 집단 간 및 아종 간의 유의한 차이는 발견되지 않았다. 각 집단 간 유전적 변이는 평균 A=1.5, P =37.3%, HD=0.053, 및 HG=0.097로 타 어류군이 변이정도보다 다소 높은 편이었으나 C. k. pumilus는 A= 1.2, P=19.0%, HD=0.029, 및 HG=0.078로 변이정도가 매우 낮았다. 두 아종 간의 평균 유전적 근연치는 S=0.894로 C. k. koreensis 5개 집단간 평균 유전적 근연치 S=0.894와 거의 동일하였으며 아종 간에 유전적 차이가 없었다. 따라서 C. k. pumilus를 아종으로 분류하는 것은 부적합하다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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