본 연구에서는 호밀을 이용하여 사일리지 제조시 P. penticeous KCC-23 및 L. plantarum KCC-24를 접종하여 사일리지의 품질 및 미생물상의 변화를 조사하였다. 젖산균 접종 유무에 관계 없이 호밀 사일리지의 사료가치는 크게 변화되지 않았다. 그리나 유산 함량은 젖산균 접종구가 현저하게 높은 경향을 보였으나 초산과 낙산은 젖산균 접종구가 약간 낮아지는 경향을 보였다. 젖산균 분포는 젖산균 접종구에서 현저하게 높았으며 효모는 현저하게 감소되었다. 그러나 곰팡이는 $10^3CFU/g$에서 관찰되지 않았다. 이상의 결과를 요약해 보면 저 수분 호밀 사일리지 제조시 KCC-23 및 KCC-24 접종에 의해 사일리지의 품질이 향상되었다.
The lactic acid bacteria species Lactobacillus plantarum (L. plantarum) has been used extensively for vaccine delivery. Considering to the critical role of dendritic cells in stimulating host immune response, in this study, we constructed a novel CD11c-targeting L. plantarum strain with surface-displayed variable fragments of anti-CD11c, single-chain antibody (scFv-CD11c). The newly designed L. plantarum strain, named 409-aCD11c, could adhere and invade more efficiently to bone marrow-derived DCs (BMDCs) in vitro due to the specific interaction between scFv-CD11c and CD11c located on the surface of BMDCs. After incubation with BMDCs, the 409-aCD11c strain harboring a eukaryotic vector pValac-GFP could lead to more efficient expression of GFP compared with wild-type strains shown by flow cytometry analysis, indicating the enhanced translocation of pValac-GFP from L. plantarum to BMDCs. Similar results were also observed in an in vivo study, which showed that oral administration resulted in efficient expression of GFP in both Peyer's patches (PP) and mesenteric lymph nodes (MLNs) within 7 days after the last administration. In addition, the CD11c-targeting strain significantly promoted the differentiation and maturation of DCs, the differentiation of $IL-4^+$ and $IL-17A^+$ T helper (Th) cells in MLNs, as well as production of $B220^+$$IgA^+$ B cells in the PP. In conclusion, this study developed a novel DC-targeting L. plantarum strain which could increase the ability to deliver eukaryotic expression plasmid to host cells, indicating a promising approach for vaccine study.
Kim, Choong-jae;Kim, Sook-Yang;Kim, Kui-Young;Kang, Young-Sil;Kim, Hak-Gyoon;Kim, Chang-Hoon
한국양식학회:학술대회논문집
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한국양식학회 2003년도 추계학술발표대회 논문요약집
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pp.134-135
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2003
The geographic expansion of the toxic dinoflagellates genus Alexandrium has been shown to be world wide ranging. The members of the genus Alexandrium ocnstituted of 20-30 species did not show substantial differences in their morphology, which is mostly referred in the 'tamarensis species complex', except some species. Though rDNA sequences variations are very few and pseudogene types are so diverse that it is difficult to use them as the specific markers. In this study, we outlined Korean and Japanese A, tamarense and A. catenella regional isolates by phylogenetic analysis inferred from no cutting alignments of LSU rDNA D1-D2 and SSU rDNA sequences to group these regional isolates. The results were compared to RFLP patterns of PCR products targeted chloroplast DNA. Lastly screening of highly repeated microsatellite DNA which is frequently used for population analysis in eukaryotes was conducted. A. catenella regional strains identified by the sequencing of rDNA D1-D2 domain were divided into at least 3 groups of type E, CMC and Chinese type, divergence root may not be deep comparing with that of A. tamarense whose pseudogenes are very variable. Results of RFLP pattern and the phylogeny of the unknown gene targeting chloroplast showed that Korean and Japanese A. catenella regional isolates were divided into 3 types: Korean, Japanese and the third CMC types. Population-specific PCR amplification with Japanese A. catenella type-specific PCR primers was useful method for population analysis of A. catenella. Various types of satellite sequences such as 5 nucleotides repeats were obtained from A. tamarense and A. catenella. The 5 nucleotides repeats were primed at the both 3'and 5' ends, and these repeats were prominent as longer repeated motifs. This repeated DNA was intercalated as internal sequences containing various types subrepeats. It is expected that these satellite DNA would be a useful molecular population marker through detail comparison among Alexandrium regional isolates to trace their transferring pathway and to prevent their human-associated their regional extents.
To develop the novel anti-allergic drug, many sophoricoside derivatives were synthesized. Among these derivatives, JSH-II-3, VI-3, VII-3, VIII-3, VII-20 and VII-20 (sodium salt) were selected and subjected to high throughput toxicity screening (HTTS) because they revealed strong IL-5 inhibitory activity and limitation of quantity. Single cell gel electrophoresis (Comet) assay, mouse lymphoma thymidine kinase ($tk^{+/-}$) gene assay (MOLY), chromosomal aberration assay in mammalian cells and Ames reverse mutation assay in bacterial system were used as simplified, inexpensive, short-term in vitro screening tests in our laboratory. Through the primary screening using the comet assay, we could choose the first candidates of sophoricoside derivatives with no genotoxic potentials as JSH-VI-3, VII-3, VII-20 and VII-20 (sodium salt). Also JSH-VII-3, VII-20 and VII-20 (sodium salt) are non-mutagenic in MOLY assay, while JSH-II-3 is mutagenic at high concentration with the presence of metabolic activation system in both comet assay and MOLY assay. The selected derivatives (JSH-VI-3, VII-3, VII-20 and VII-20 (sodium salt) are not mutagenic in S. typhimurium TA98 and TA100 strains both in the presence and absence of metabolic activation. From results of chromosomal aberration assay, 6 h treatment of JSH-VI-3, VII-3 and VII-20 (sodium salt) were not revealed clastogenicity both in the presence and absence of S-9 mixture. Therefore, we suggests that JSH-VI-3, VII-3, VII-20 and VII-20 (sodium salt), as the optimal candidates with both no genotoxic potential and IL-5 inhibitory effects must be chosen. To process the development into new anti-inflammatory drug of these derivatives, further investigation will need.
A novel bacteriophage, designated as VPP97, that infects the strains of Vibiro parahaemolyticus (hallophilic, Gram-negative bacterium) isolated most commonly from marine environments, has been discovered, and several of its properties have been determined. The plaques were clear and sized $0.6{\sim}1.0\;mm$ in diameter. The virion forms a single band on 70% sucrose gradient and ${\rho}1.50$ CsCl gradient by sucrose gradient centrifugation and CsCl gradient centrifugation respectively. It has a hexagonal head and a relatively long tail, as shown by electron microscopy. Vibrio alginolyticus, Vibrio fluvialis and Vibrio furnissii were also sensitive to this phage. It was almost totally inactivated at $70^{\circ}C$ and at pH below 5 or over 10. The nucleic acid of VPP97 is composed of DNA. The VPP97 had 9 specific structural proteins sized between 21.5 kDa and 97.4 kDa on SDS-PAGE. When V. parahaemolyticus cultures were treated with either phage VPP97 or one of the several antibiotics for 2 hours, the viable number of V. parahaemolyticus treated with the phage VPP97 is lower than that treated with chloramphenicol, erythromycin or penicillin, but not lower than that treated with tetracycline. Mice that have responded to the phage treatment revealed the lower numbers of V. parahaemolyticus in small intestine and less damage on small intestine compared to the untreated mice. Therefore, we suggest that the phage treatment appears effective to the infection by V. parahaemolyticus.
In the search for novel potent fungi-derived bioactive compounds for bioinsecticide applications, crude ethyl acetate culture filtrate extracts from 110 mangrove fungal endophytes were screened for their toxicity. Toxicity tests of all extracts against brine shrimp (Artemia salina) larvae were performed. The extracts with the highest toxicity were further examined for insecticidal activity against Spodoptera litura larvae and acetylcholinesterase (AChE) inhibition activity. The results showed that the extracts of five isolates exhibited the highest toxicity to brine shrimp at 50% lethal concentration ($LC_{50}$) values of 7.45 to 10.24 ppm. These five fungal isolates that obtained from Rhizophora mucronata were identified based on sequence data analysis of the internal transcribed spacer region of rDNA as Aspergillus oryzae (strain BPPTCC 6036), Emericella nidulans (strains BPPTCC 6035 and BPPTCC 6038), A. tamarii (strain BPPTCC 6037), and A. versicolor (strain BPPTCC 6039). The mean percentage of S. litura larval mortality following topical application of the five extracts ranged from 16.7% to 43.3%. In the AChE inhibition assay, the inhibition rates of the five extracts ranged from 40.7% to 48.9%, while eserine (positive control) had an inhibition rate of 96.8%, at a concentration of 100 ppm. The extracts used were crude extracts, so their potential as sources of AChE inhibition compounds makes them likely candidates as neurotoxins. The high-performance liquid chromatography profiles of the five extracts differed, indicating variations in their chemical constituents. This study highlights the potential of culture filtrate ethyl acetate extracts of mangrove fungal endophytes as a source of new potential bioactive compounds for bioinsecticide applications.
Poultry products including meat and eggs constitute a major protein source in the American diet and disease - causing pathogens represent major challenges to the poultry industry. More than 95 % of pathogens enter the host through the mucosal surfaces of the respiratory, digestive and reproductive tracts and over the past few decades, the two main mechanisms used to control diseases have been the use of vaccines and antibiotics. However, in the poultry industry, there are mounting concerns over the ability of current vaccines to adequately protect against emerging hyper - virulent strains of pathogens and a lack of suitable, cost effective adjuvants. Thorough investigation of the immunogenetic responses involved in host-pathogen interactions will lead to the development of new and effective strategies for improving poultry health, food safety and the economic viability of the US poultry industry. In this paper, I describe the development of immunogenomic and proteomic tools to fundamentally determine and characterize the immunological mechanisms of the avian host to economically significant mucosal pathogens such as Eimeria. Recent completion of poultry genome sequencing and the development of several tissue-specific cDNA libraries in chickens are facilitating the rapid application of functional immunogenomics in the poultry disease research. Furthermore, research involving functional genomics, immunology and bioinformatics is providing novel insights into the processes of disease and immunity to microbial pathogens at mucosal surfaces. In this presentation, a new strategy of global gene expression using avian macrophage (AMM) to characterize the multiple pathways related to the variable immune responses of the host to Eimeria is described. This functional immunogenomics approach will increase current understanding of how mucosal immunity to infectious agents operates, and how it may be enhanced to enable the rational development of new and effective strategies against coccidiosis and other mucosal pathogens.
Petunia hybrida is commonly used in landscapes and interiors for its attractive flower. Virus-like foliar symptoms, including a mosaic with dark green islands surrounding the veins and chlorosis on the leaf margins, were observed on a petunia plant from Icheon, Gyeonggido, Korea. Cucumber mosaic virus (CMV) was identified in the symptomatic petunia by serological testing for the presence of CMV coat protein (CP) with a direct antibody-sandwich-enzyme-linked immunosorbent assay. An agent was mechanically transmitted to indicator plant species including Chenopodium quinoa. Examination of the inoculated plant leaves by RT-PCR analysis and electron microscopy revealed the presence of specifically amplified CP products and spherical virions of approximately 28 nm in diameter, respectively, providing confirmation of a CMV infection. Analysis of CP sequences showed that CMV petunia isolate (CMVYJC) shared 82.5-100% amino acid sequence identity with CPs of representative CMV strains. Phylogenetic analysis of CPs supports that CMV-YJC is a member of CMV subgroup IA (CMV-IA) and has biological properties of CMV-IA on host species. To our knowledge, this is the first report of CMV from P. hybrida in Korea.
A moderately halophilic, Gram-positive, spore-forming bacterium was isolated from the roots of Blutaparon portulacoides, a plant found in sandy soil parallel to the beach line in Restinga de Jurubatiba, Rio de Janeiro, Brazil. The strain, designated $M9^T$, was motile and strictly aerobic with rod-shaped cells. It grew in the absence of NaCl and up to 20% NaCl, and was able to hydrolyze casein and starch. Strain $M9^T$ had a cell-wall peptidoglycan based on L-Orn-D-Asp, the predominant menaquinone present was menaquinone-7 (MK-7), diaminopimelic acid was not found, and anteiso-$C_{15:0}$ and iso-$C_{15:0}$ were the major fatty acids. A phylogenetic analysis based on 16S rRNA gene sequences showed that strain $M9^T$ belonged to the genus Halobacillus and exhibited 16S rRNA gene similarity levels of 97.8-99.4% with the type strains of the other nine Halobacillus species. The DNA-DNA relatedness of strain $M9^T$ with H. trueperi, the closest relative as regards 16S rRNA gene similarity, and H. locisalis was 21% and 18%, respectively. Therefore, on the basis of phenotypic, genotypic, and phylogenetic data, strain $M9^T$ (=ATCC BAA-$1217^T$, =CIP $108771^T$, =KCTC $3980^T$) should be placed in the genus Halobacillus as a member of a novel species, for which the name Halobacillus blutaparonensis sp. nov. is proposed.
A novel two-phase anaerobic treatment technology was developed to treat high-concentration organic cassava bioethanol wastewater. The start-up process and contribution of organics (COD, total nitrogen, and $NH_4^+$-N) removal in spatial succession of the whole process and spatial microbial diversity changing when sampling were analyzed. The results of the start-up phase showed that the organic loading rate could reach up to $10kg\;COD/m^3d$, with the COD removal rate remaining over 90% after 25 days. The sample results indicated that the contribution of COD removal in the pre-anaerobic and anaerobic phases was 40% and 60%, respectively, with the highest efficiency of 98.5%; TN and $NH_4^+$-N had decreased to 0.05 g/l and 0.90 g/l, respectively, and the mineralization rate of total nitrogen was 94.8%, 76.56% of which was attributed to the anaerobic part. The microbial diversity changed remarkably among different sample points depending on the physiological characteristics of identified strains. Moraxellaceae, Planococcaceae, and Prevotellaceae were dominant in the pre-anaerobic phase and Bacteroidetes, Campylobacterales, Acinetobacter, Lactobacillus, Clostridium, and Bacillus for the anaerobic phase. Methanosarcinaceae and Methanosaeta were the two main phylotypes in the anaerobic reactor.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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