The present study was initiated to find out the insect vector of mulberry dwarf phytoplasma. Among the collected insects from mulberry cultivation region, the sucking insects (Hishimonas sellatus, Bothrogonia japonica and Balclutha punctata) were selected for transmission of mulberry dwarf phytoplasma. Sucking insects, H. sellatus and B. punctata successfully transmitted phytoplasma to healthy seedling mulberry and periwinkle plants by inoculation-feeding. Typical dwarf symptom was observed in mulberry tree, but very slender twigs on stem and formatted small leaves were found on periwinkle plants, which are typical witches' broom symptoms. The phytoplasmas were detected in all samples exception sucking insects B. japonica using phytoplasma universal primer pair R16F2n/R2.
The colchicine drop treatment is done on the growthpoint of the Sangilppong, which is the leading mulberry variety for mulberry dwarf resistance. So the breeding of the Sawonppong 27, that is tetraproidy, is succeeded and the chracteristics of this is as follows. The chromosome number of it is 2n=56, tetraproidy. The spring sprouting stage is midseason mulberry variety, and the leaf has a broad width shape that the oval leaf and the 3 lobed leaf exist simultaneously, The thickness of leaf is thick, the branch length and internorde length are short. The nonbudding of basal part does not exist and the cold hardness of this is stronger than the Sangilppong.
The detectable levels and population fluctuations of phytoplasmas infecting dwarf mulberry trees were investigated using nested-PCR and competitive-PCR methods. Samples of five different types were studied : A. petiole of a leaf that displays dwarf symptoms, B. petiole from apparently healthy leaf residing on a branch also supports a leaf with dwarf symptoms, C. the branch portion that supports a leaf with dwarf symptoms, D. the leaf petiole from healthy appearing leaves on branch with no dwarf symptoms, and branch portion of branch with no dwarf symptoms, E. the rootlets of trees with dwarf symptoms. These 5-parts were collected from each tree during June - April, once in every two months. The phytoplasma was detected from all parts of collected mulberry samples during all seasons using nested-PCR with AS-1/AS-2 primer pairs. The phytoplasma was detected until $10^4$ dilution using direct-PCR method, but it was detected until $10^{13}$ dilution by the nested-PCR method. The density of pytoplasma was found to be $7.94{\times}10^{18}-10^{12}copies/{\mu}L$ in mulberry trees. The density of phytoplasma was observed throughout the year in all samples of mulberry trees. The highest rates of phytoplasma was found in the samples B and C during the early growing season followed by the sample A and D during the dormant season. Samples C and E displayed the highest phytoplasma density followed sample D. The density of phytoplasma appeared stable during all the seasons for samples C and A. The result of the present study demonstrates the utility of nested-PCR and competitive-PCR for detection and determination of population fluctuations of phytoplasmas in plant tissues.
A series of experiments were conducted from 1968 to 1970 to find the transmission effects of the dwarf disease of mulberry tree in connection with inlay grafting and insect vector with the following conclusions: 1. The inlay-grafting of sound scions on diseased roots showed a 30 per cent transmission rate among the successful grafts. The inlay-grafting of diseased scions on sound roots showed a 14 per cent transmission rate among the successful grafts ir the case of scions cut and stored before wintering but no transmission effect in the case of scions prepared after wintering, There were some stocks, among the unsuccesful grasfts of diseased scions upon sound roots, that sprouted out new buds, no transmission effects were found in them, 2. Leafhoppers (Hishimonus disciguttus Walker) collected from areas with no dwarf disease infection were grouped into three plots and let to feed on mulberry tree severely infected by dwarf disease for 7 days, 14 days and 21 days respectively. After these preliminary treatment, the leafhoppers were recollected to be fed on the sound seedling divided into three plots for 10 days, 15 days and 20 days respectively to find the transmission effects. The results are that the 7 day plot showed no transmission effect whereas the 14 day plot showed a 22 per cent disease rate and the 21 day plot 61 per cent rate indicating that the longer the feeding period is the higher the transmission rate.
Transmission of mulberry dwarf mycoplasma (MDM) from diseased mulberry to 5 herbaceous plants (periwinkle, white clover, Ladino clover, red clover, and Chinese milk vetch) through insect vector, Hishimonus sellatus, was confirmed by symptom expression and microscopic evidences. The earliest symptom appearance was noticed on periwinkle in which incubation period was 25-30 days, while it ranged 35-40 days in the other plant species. The common symptoms of MDM infected plants were characterized by poor plant growth with accompanying discolorations of leaves (chlorosis with vein clearing in periwinkle, reddish in red clover, brownish in white and Ladino clovers, and yellowish in Chinese milk vetch). Mycoplasmal infections were diagnosed light microscopically by Dienes' and toluidine blue staining of hand-cut and Epon-embedded sections, respectively. In Dienes' stain, all the plants infected with MDM showed specific staining reaction in phloems. In toluidine blue stain, mycoplasmal existence was noted by granular appearance in sieve tubes which were confirmed to be mycoplasma-like organisms under an electron microscope.
This test checked jujube witches'-broom disease, sumac witches'-broom disease, paulonia witches'- broom disease, and mulberry dwarf disease whether or not they were infected by phytoplasma, using universal and specific primers. Upon treatment of DNA amplified by PCR of phytoplasma with Alu I , Hpa II and Sat I restricted enzymes, distinction of phytoplasmas was possible. Particularly, phytoplasma of each host was distinguishable by treatment of Hpa II restricted enzyme. Meanwhile, analysis of restricted enzymes of jujube witches'-broom disease showed a higher infectivity of phytoplasmas of two origins. There were a lot of relations between jujube witches'-broom disease and sumac witches'-broom disease, and between paulonia witches'-broom disease and mulberry dwarf disease.
The incidence of mulberry dwarf disease was surveyed on seventy two cocoon producing areas throughout the country from 1983 to 1984. There was a low tendency of incidence in Gyeonggi, Gangwon and Chungbuk, the northern parts of 37 degrees north latitude. However, in Chungnam and Gyeongnam, was a relatively high incidence observed. The most severe incidence areas of mulberry dwarf disease were found in Jeonnam, Jeonbuk and Gyeongbuk.
Using phytoplasma universal primer pair Pl and P7, a fragment of about 1.8 kb nucleotide sequences of 16S rRNA gene and 16S-23S rRNA intergenic spacer region, and a portion of 23S rRNA gene of jujube witches'broom (JWB) and mulberry dwarf(MD) phytoplasmas were determined. The nucleotide sequences of JWB and MD were 1,850 bp and 1,831 bp long, respectively. The JWB phytoplasma sequence was aligned with the homologous sequence of MD phytoplasma. Twenty-eight base insertions and nine base deletions were found in the JWB phytoplasma sequence compared with that of MD phytoplasma. The similarity of the aligned sequences of JWB and MD was 84.8%. The near-complete 16S rRNA gene DNA sequences of JWB and MD were 1,529 bp and 1,530 bp in length, respectively, and revealed 89.0% homology. The 16S-23S rRNA intergenic spacer region DNA sequences were 263 bp and 243 bp in lengths respectively, while homology was only 70% and the conserved tRNA-lle gene of JWB and MD was located into the intergenic space region between 16S-23S rRNA gene. The nucleotide sequences were 77 bp long in both JWB and MD, and showed 97.4% sequence homology. Based on the phylogenetic analysis of the two phytoplasmas, the JWB phytoplasma belongs to the Elm yellow phytoplasma group (16S rV), whereas, the MD phytoplasma belongs to the Aster yellow group (16S rI).
Studies on the harvest methods for the branch-rearing in autumn are as follows. (1) It turned out to be the best method in the early autumn to thin one to two of the normal branches or the dwarf ones, or pick off some of leaves for the yields, according to the rearing scale. (2) For the rearing of the silkworm larvae at 4th instar, it is recommendable to apply one of the following harvest methods, such as the thinning of dwarf branches, the thinning of some branches, intermediate cutting, and the pick-of of the leaves at low part of mulberry in the regards io the quality of leaves and the labour conditions, and no effects on the harvest. (3) For the rearing of the larvae at 5th instar, it is most practical to adapt one of the yield methods which can produce good harvest with less labours. That is, the pruning. of the middle branches should be gradually made from a part of the mulberry fold. (4) When it is carried out to pick of the leaves on the branches which was left after the middle-pruning harvest in autumn or late, easy and less labours' harvest method of rough picking may be applied in the both of the mulberry pruned in summer or autumn.
The Symptoms of witches' broom disease caused by phytoplasma including general stunting and yellowing, were observed in leafy lespedeza (Lespedeza cyrtobotrya M.) on Doam-myeon, Pyeongchang-gun, in 2006. Based on the sequence analysis of PCR-amplified 16S ribosomal DNA and 16S-23S spacer region DNA products using universal phytoplasma primers, the phytoplasma associated with leafy lespedeza witches' broom (LLWB) disease was identified as a member of Candidatus Pytoplasma trifolii. It was most closely related to alsike clover proliferation phytoplasma (99.8% similarity, accession no. AY390261), Candidatus Pytoplasma trifolii strain. RFLP patterns generated with AluI, HpaII clearly differentiated LLWB phytoplasma from the referenced phytoplasma strains, water dropwort witches' broom, mulberry dwarf, glehni aster yellow dwarf and jujube witches' broom. This paper is the first report on Candidatus Phytoplasma trifolii in leafy lespedeza identified at a molecular level.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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