• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제10권3호
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• pp.367-374
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• 2000

The composition of dissolved gases and nutrients in a liquid medium were determined for establishment of the optimum conditions for in vitro culture of Helicobacter pylori. A microaerobic condition facored by the organism was prepared by adjusting the partial pressure of the gas, agitation speed, and viscosity of the medium. The gaseous concentrations were controlled by utilizing CampyPak Plus that reduced oxygen while augmenting carbon dioxide. Agitation of the broth facilitated the oxygen transfer to the cells, yet inhibited the growth at high rates. An increase of viscosity in the medium repressed the culture although this variable was relatively insignificant. The chemical constituents of the liquid broth were examined to establish an economic model for H. pylori cultivation. The microbe required a neutral pH for optimum growth, and yet was also able to proliferate in an acidic condition, presumably by releasing the acidity-modulating enzyme, urease. Cyclodextrin and casamino acid were investigated as growth enhancers in place of serum, while yeast extract unexpectedly inhibited the cells. A low concentration of glucose, the unique carbon source for the organism, increased the cell density, yet high concentrations resulted in an adverse effect. Under optimally dissolved gas conditions, the cell concentration in brucella broth supplemented with serum substitutes and glucose reached $1.6{\times}10^8$ viable cells/ml which was approximately 50% higher than that obtained in the liquid medium added with only cyclodextrin or serum.

• Molecules and Cells
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• 제26권2호
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• pp.193-199
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• 2008

The pro-apoptotic Bcl-2 family member Bim acts as a sensor for apoptotic stimuli and initiates apoptosis through the mitochondrial pathway. To identify novel regulators of Bim, we employed the yeast two-hybrid system and isolated the human gene encoding macrophage migration inhibitory factor (MIF), a ubiquitously expressed proinflammatory mediator that has also been implicated in cell proliferation, the cell cycle and carcinogenesis. The interaction between MIF and Bim was confirmed by both in vitro and in vivo protein interaction assays. Intriguingly, protein complexes between MIF and the three major Bim isoforms (BimEL/BimL/BimS) could be detected in HEK293 and K562 cells, especially in cells undergoing apoptosis. Moreover, exogenous expression of MIF partially inhibited Bim-induced apoptosis in HEK293 cells. SiRNA-mediated knockdown of MIF increased apoptosis in K562 cells exposed to the chemical oxidant diamide. Endogenous MIF may regulate the pro-apoptotic activity of Bim and inhibit the release of cytochrome c from mitochondria.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제20권1호
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• pp.1-6
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• 2005

약용식물내 에스트로겐성과 항-에스트로겐성을 조사하고 항암인자를 발견하기 위하여, 본 연구는 에탄올추출로 제조된 9종류의 한국산 약용식물에 대하여 재조합효모와 MCF-7 사람유방암세포주를 이용하여 스크리닝하고 비교하였다. 재조합효모를 이용한 실험결과, 7종류의 약용식물에서 에스트로겐성이 나타났고, 4종류에서 안드로겐성이 나타났다. 또한 MCF-7 사람유방암세포주를 이용한 실험결과, 8종류의 추출물이 MCF-7 세포의 성장을 억제하는 것으로 확인되었으며 비스페놀 A와 동시 처치한 경우에도 유의적으로 억제하는 것으로 나타났다. 또한 Glycyrrhiza uralensis, Cassia tora, Syringa velutina, Zingiber officinale, Malva verticillata, Panax ginseng C.A. Meyer는 식물성 에스트로겐으로서 에스트로겐에 양성인 사람유방암세포의 증식을 유의적으로 억제시키는 흥미로운 결과가 제시되었다. 따라서 이번 연구는 한국산 약용식물이 식물성 에스트로겐과 항암인자로서 이용될 수 있으며, 에스트로겐의 활성을 조사하는데 유용하게 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제21권12호
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• pp.1666-1677
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• 2011

세포주기조절에서 유전자 발현의 조절은 매우 중요한 부분이다. 본 연구에서는 인간의 유전자인 CIP29/Hcc1과 상동성을 가지는 분열형 효모의 새로운 유전자 mas1+을 분리하였다. 중합효소연쇄반응을 수행하여 cDNA를 얻고 이 cDNA의 염기서열을 분석한 결과 mas1+의 전체 염기서열은 735 bp로서, 245개의 아미노산을 암호화하고 있다. mas1+의 프로모터에서는 M-G1에 특이적인 전사를 보이는 유전자들에 보존되어 있는 PCB 서열이 발견되었다. 세포주기별 mas1+의 전사 수준을 분석한 결과 격막이 형성된 세포수의 빈도를 나타내는 격막 세포지표 의 양상과 유사하게 발현하는 것을 확인하였다. mas1+ 결손 돌연변이를 $25^{\circ}C$와 $36^{\circ}C$에서 배양한 결과, 세포질 분열과정이 늦어진 다중격막 세포의 빈도가 증가하였다. 이를 FACS로 분석하여 DNA 함량이 2C, 4C와 6C등이 형성됨을 확인하였다. mas1+결손 돌연변이 세포를 질소 결핍 배양액에서 배양한 결과 다중격막 세포의 형성이 확연히 증가하였는데 이는 질소 결핍에 따른 세포분열의 가속화 단계에서 mas1+의 결손이 특히 부정적 영향을 초래함을 시사한다. mas1+ 유전자 결손 돌연변이 세포에 mas1+을 포함한 plasmid를 형질전환한 후 mas1+의 발현을 유도한 결과 정상의 세포 형태로 전환됨을 확인하였다. Mas1 단백질에 EGFP를 융합시켜 발현을 유도한 결과 핵내에서 위치함을 분열형 효모와 인간 배양세포인 HeLa에서 확인하였다. 또한, mas1+ 결손 돌연변이에서 상동성을 가지는 인간 유전자 CIP29/Hcc1을 발현시킨 결과 multi-septate 세포가 줄어들었다. 한편, 생쥐의 배발달 단계에 따른 CIP29 유전자의 전사체 수준은 세포 분열이 활발한 시기에 증가하였다. 이상의 결과들은 Mas1은 인간의 핵단백질인 유전자 CIP29/Hcc1과 구조 기능적으로 상동성을 가지며, 세포주기 중 M-G1에 속하는 세포질 분열에 연관되어 있음을 시사한다.

• BMB Reports
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• 제38권3호
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• pp.328-333
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• 2005

A human homologue of Sar1, named Sara2, was shown to be preferentially expressed during erythropoiesis in a culture stimulated by EPO. Previous studies, in yeast, have shown that secretion-associated and Ras-related protein (Sar1p) plays an essential role in protein transport from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus. Here, we report the molecular analysis of Sara2 in erythroid cell culture. A 1250 bp long cDNA, encoding a 198 amino-acid protein very similar to Sar1 proteins from other organisms, was obtained. Furthermore, we also report a functional study of Sara2 with Real-time quantitative PCR analysis, demonstrating that expression of Sara2 mRNA increases during the initial stages of erythroid differentiation with EPO and that a two-fold increase in expression occurs following the addition of hydroxyurea (HU). In K562 cells, Sara2 mRNA was observed to have a constant expression and the addition of HU also up-regulated the expression in these cells. Our results suggest that Sara2 is an important gene in processes involving proliferation and differentiation and could be valuable for understanding the vesicular transport system during erythropoiesis.

• Molecules and Cells
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• 제28권5호
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• pp.455-461
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• 2009

Calcineurin is a $Ca^{2+}$/Calmodulin activated Ser/Thr phosphatase that is well conserved from yeast to human. It is composed of catalytic subunit A (CnA) and regulatory subunit B (CnB). C. elegans homolog of CnA and CnB has been annotated to tax-6 and cnb-1, respectively and in vivo function of both genes has been intensively studied. In C. elegans, calcineurin play roles in various signaling pathways such as fertility, movement, body size regulation and serotonin-mediated egg laying. In order to understand additional signaling pathway(s) in which calcineurin functions, we screened for binding proteins of TAX-6 and found a novel binding protein, HLH-11. The HLH-11, a member of basic helix-loop-helix (bHLH) proteins, is a putative counterpart of human AP4 transcription factor. Previously bHLH transcription factors have been implicated to regulate many developmental processes such as cell proliferation and differentiation, sex determination and myogenesis. However, the in vivo function of hlh-11 is largely unknown. Here, we show that hlh-11 is expressed in pharynx, intestine, nerve cords, anal depressor and vuvla muscles where calcineurin is also expressed. Mutant analyses reveal that hlh-11 may have role(s) in regulating body size and reproduction. More interestingly, genetic epistasis suggests that hlh-11 may function to regulate serotoninmediated egg laying at the downstream of tax-6.

• 미생물학회지
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• 제40권4호
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• pp.334-341
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• 2004

와송으로부터 고온 고압의 열수 추출로 다당체 조추출물(OJP1)을 얻어 디스크 확산법, fluorescein diacetate(PDA)법 및 액체 배지 희석법을 통하여 세균과 진균에 대한 항균 활성을 조사하였다. 또한 Sephadex G-50을 통하여 다당체(FI)와 올리고당류(FII)를 분리하고, 이들의 항암 활성을 조사하였다. FI과 FII의 분자량은 각각 30$\~$50 kDa과 1$\~$3 kDa으로 추정되었다. OJP1의 항균 효과는 디스크 확산법에서 Candida albicans가 $20\pm4.9\;mm$의 억제대로 가장 높았으며, Salmonella typhimurium과 Staphylococcus aureus도 각각 $18\pm2.0\;mm$ 와 $17\pm1.0\;mm$의 억제대로 비교적 높게 나타났다. 또한 Escherichia coli와 Pseudomonas aeruginosa에 대해서도 양성 대조군인 프로폴리스보다 높게 나타났으며, FDA법, 액체배지 희석법에서도 비슷한 양상을 나타냈다. OJP1과 Fl, FII의 인체 암세포주와 Sarcoma 180 세포주에 대한 항암 활성을 측정해 본 결과, 이들은 모두 MTT assay와 형태 변화 관찰에서 강력한 암세포주 증식 억제 효과를 나타내었는데, 특히 폐암 세포주인 A549 세포와 자궁 경부암 세포주인 HeLa 세포, 위암 세포주인 AGS에서 현저한 효과를 보였다. 더 나아가 DNA 분절화를 통해 apoptosis 유발 여부를 확인해 본 결과, 대조군에 비해서 이들 물질을 처리한 실험군에서 apoptosis발생을 뜻하는 DNA 분절화 현상이 뚜fut하게 나타났다. 요컨대, OJP1과 Fl, FII는 광범위한 병원성 균주에 대하여 효과적인 항균 활성을 보였으며, 각종 암세포주에 대하여 현저한 항암 활성을 나타내는 것으로 확인되었다.

• 생명과학회지
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• 제19권1호
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• pp.101-110
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• 2009

유전자 발현의 조절은 세포주기 조절에 중요한 역할을 한다. 본 연구에서 새로운 $mas2^+$ (${\underline{m}}itosis$ ${\underline{as}}sociated$ protein) 유전자는 인간의 SMARCAD1와 상동성을 갖고 분열형 효모인 Schizosaccharomyces pombe (S. pombe)에서 gene-specific PCR 방법에 의해서 분리하였다. 분리된 유전자는 SNF2 도메인이 위치해 있고, 이것은 염색체 재구성에 관련되어 있다. $adh1^+$을 이용한 $mas2^+$ 전사체의 발현량 분석은 $mas2^+$의 발현수준은 S. pombe에서 격막 형성 전에 가장 높았다. $mas2^+$ 완전돌연변이의 세포분열은 26와 $35^{\circ}C$에서 지연되는 현상이 보였고, 다수익 다중 격막이나 핵분열이 일어나지 않는 세포들을 발견하였다. 세포들을 완전배지인 YES에서 증식을 증가시키기 위해서 배양했을 때, 정상과 다른 형태의 표현형을 가진 $mas2^+$ 완전돌연변이 세포들이 증가했다. 이런 표현형들은 $mas2^+$ 유전자의 과발현에 의해서 감소하였다. Mas2 단백질은 S. pombe의 핵내에 위치하였다. 이런 결과들은 $mas2^+$가 인간의 SMARCAD1과 상동성을 갖고 있고, 염색체 재구성과 격막 형성 조절에 사용된다는 것을 나타낸다.