This study was to assess the antimicrobial action of 2-hydroxyethyl ${\beta}$-undecenate purified from cumin (Cuminum cymium L.) seed against the oral anaerobe, Streptococcus mutans, which is associated with gingivitis, specifically focusing on the catabolic effect. 2-Hydroxyethyl ${\beta}$-undecenate inhibited the acid production and growth of S. mutans after 30 hr incubation at 50 mM. The glycolysis of S. mutans with glucose as substrate was similarly sensitive to 2-hydroxyethyl ${\beta}$-undecenate, with 70% inhibition of glucose utilization at 5 mM and 90% inhibition at 50 mM. In addition, this substance potently inhibited the glycolysis enzyme, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GADP); the phosphoenolpyruvate, glucose phosphotransferase (Glucose-PTS); and membrane ATPase, in a concentration dependent manner. The $IC_{50}$ values for inhibition of GADP, Glucose-PTS, and ATPase were 1, 0.9, and 5 mM, respectively. Furthermore, 2-hydroxyethyl ${\beta}$-undecenate inhibited teeth calcium ion elution by 80% at 50 mM. These results suggest that 2-hydroxyethyl ${\beta}$-undecenate is a potent inhibitor of carbohydrate metabolism and the growth of S. mutans JC-2.
Treponema phagedenis KS1, a fastidious anaerobe, was isolated from a bovine digital dermatitis (BDD)-infected dairy cattle in Chungnam, Korea. Initial data indicated that T. phagedenis KS1 exhibited putative virulent phenotypic characteristics. This study reports the whole genome assembly and annotation of T. phagedenis KS1 (KCTC14157BP) to assist in the identification of putative pathogenicity related factors. The whole genome of T. phagedenis KS1 was sequenced using PacBio RSII and Illumina HiSeqXTen platforms. The assembled T. phagedenis KS1 genome comprises 16 contigs with a total size of 3,769,422 bp and an overall guanine-cytosine (GC) content of 40.03%. Annotation revealed 3,460 protein-coding genes, as well as 49 transfer RNA- and 6 ribosomal RNA-coding genes. The results of this study provide insight into the pathogenicity of T. phagedenis KS1.
F. nucleatum is a gram-negative obligate anaerobe which is the principal and most frequent cause of gingival inflammation and is the predominant pathogen isolated in subsequent periodontal breakdown. It is also one of the most numerous bacteria found in subgingival plaque samples from healthy sites; its numbers are about 10-fold greater in plaque from periodontally diseased sites. The purpose of this study is to examine the effects of outer membrane(OM), outer membrane vesicle(OMV), and lipopolysaccharide(LPS) from F. nucleatum ATCC 25586 strain on the growth of human gingival fibroblasts and HOS 941 cells, and on the $TNF-{\alpha}$ production / $TNF-{\alpha}$ mRNA expression of mouse splenocytes. For the examination of cytotoxic effects, $TNF-{\alpha}$ production and $TNF-{\alpha}$ mRNA expression, the MTT assay, the ELISA and the RT-PCR were performed, respectively. All extracts of F. nucleatum tested were cytotoxic to both of human gingival fibroblasts and HOS 941 cells, and the significant difference of cytotoxic activity among the extracts was not observed. In the effects of these extracts on the $TNF-{\alpha}$ production / $TNF-{\alpha}$ mRNA expression of mouse splenocytes, all extracts of F. nucleatum tested also stimulated the $TNF-{\alpha}$ production / $TNF-{\alpha}$ mRNA expression, but the effects of the OM extracts on the $TNF-{\alpha}$ production / $TNF-{\alpha}$ mRNA expression were higher than those of the OMV and the LPS extracts. The pattern of the $TNF-{\alpha}$ mRNA expression was similar to that of the $TNF-{\alpha}$ production. These results indicate that F. nucleatum seems to contribute to the pathogenesis of periodontal diseases at least by its cytotoxicity, directly and its $TNF-{\alpha}$ production, indirectly.
한국의 서해안과 남해안 47개소의 해수와 mud 시료로부터 광합성세균으로 유추되는 13개의 균주를 분리하였고, agar-shake tube method와 RAPD-PCR을 이용하여 4종의 서로 다른 균주를 순수분리 하였다. 이들 4종의 균주 중 폐수분해능이 우수한 균주를 선정하여, 형태학적, 배양적, 생화학적 특성 및 16S rRNA sequencing에 의한 동정을 실시하였고, 그 결과 purple, non-sulfur bacteria의 Rhodobacter 속에 가장 근접하여, Rhodobacter sp. EGH-24로 명명하였다. Rhodobacter sp. EGH-24가 생산하는 carotenoid 색소는 spheroidene(group 2)이였고, bacteriochlorophyll a를 가지고 있었으며, PHB를 생산하는 것으로 확인되었다.
Listeria monocytogenes is a gram-positive, facultative anaerobe food pathogen responsible for the listeriosis that mostly occurs during the low-temperature storage of a cold cut or dairy products. To understand the systemic response to a wide range of growth temperatures, L. monocytogenes were cultivated at a different temperature from 10℃ to 42℃, then whole cell proteomic analysis has been performed both exponential and stationary cells. The specific growth rate increased proportionally with the increase in growth temperature. The maximum growth rate was observed at 37℃ and was maintained at 42℃. Global protein expression profiles mainly depended on the growth temperatures showing similar clusters between exponential and stationary phases. Expressed proteins were categorized by their belonging metabolic systems and then, evaluated the change of expression level in regard to the growth temperature and stages. DnaK, GroEL, GroES, GrpE, and CspB, which were the heat&cold shock response proteins, increased their expression with increasing the growth temperatures. In particular, GroES and CspB were expressed more than 100-fold than at low temperatures during the exponential phase. Meanwhile, CspL, another cold shock protein, overexpressed at a low temperature then exponentially decreased its expression to 65-folds. Chemotaxis protein CheV and flagella proteins were highly expressed at low temperatures and stationary phases. Housekeeping proteins maintained their expression levels constant regardless of growth temperature or growth phases. Most of the growth related proteins, which include central carbon catabolic enzymes, were highly expressed at 30℃ then decreased sharply at high growth temperatures.
한국미생물생명공학회 2001년도 Proceedings of 2001 International Symposium
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pp.35-39
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2001
The Integration Host factor (IHF) of Escherichia coli is a small, basic protein that is required for a variety of functions including site-specific recombination, transposition, gene regulation, plasmid replication, and DNA packaging. It ,is composed of two subunits that are encoded by the ihfA ($\alpha$-subunit) and ihjB ($\beta$-subunit) genes. IHF binding sites are composed of three elements called the WATCAR, TTG, and poly (dAT) elements. We have characterized IHF binding to the H site of bacteriophage λ. We have isolated suppressors that bind to altered H' sites using a challenge phage selection. Two different suppressors were isolated that changed the adjacent $\alpha$P64 and $\alpha$K65 residues. The suppressors recognized both the wild-type site and a site with a change in the WATCAR element. Three suppressors were isolated at $\beta$-E44. These suppressors bound the wild-type and a mutant site with a T:A to A:T change (H44A) in the middle of the TIR element. Site-directed mutagenesis was used to make several additional changes at $\beta$E44. The wild-type and $\beta$E44D mutant could not bind the wild-type site but were able to bind the H44A mutant site. Other mutants with neutral, polar, or a positive charge at $\beta$E44 were able to repress both the wild-type and H44A sites. Examination of the IHF crystal structure suggests that the ability of the wild-type and $\beta$E44D proteins to discriminate between the T:A and A:T basepairs is due to indirect interactions. The $\beta$-E44 residue does not contact the DNA directly. It imposes binding specificity indirectly by interactions with residues that contact the DNA. Details of the proposed interactions are discussed.
Clostridium novyi (C. novyi) is a gram positive, non-capsulated, motile, obligatory anaerobe that produces endospores. Both C. novyi type A and B produce a bacteriophage encoded lethal alpha toxin which belongs to a family of large clostridial cytotoxins. These large clostridial cytotoxins of C. novyi bind to the uncharacterized receptors on host vascular endothelial cells, which leads to the loss of integrity of the vascular endothelium with subsequent edema, refractory hypotension, organ failure, and sudden death. A total of 13 sudden death cases were submitted to Chonbuk National University-Veterinary Diagnostic Center between June and October, 2015. The samples, mainly liver, were collected in sterile vials after necropsy and processed within 12~24 hours for diagnosis, isolation and identification of C. novyi. All of the 4 gram positive samples showed amplification by PCR. Out of 4 positive samples, 3 were detected to be C. novyi type B and 1 was detected as C. novyi type A. Based on the 16S rDNA sequence analysis, 1 case (150564) showed 99% similarity with C. novyi type A while other 3 cases (150388, 150557 and 150775) presented 99% similarity with C. novyi type B. Based on the results, C. novyi was found to be prevalent in Korean pig farms and causes sudden death to finishing pigs or sows during summer season. Thus, C. novyi should be considered for differential diagnosis on sudden death cases during the summer season.
Porphyromonas gingivalis is a gram negative. black-pigmented anaerobe, associated with periodontitis & peri-implantitis. Fimbriae(fimA) of P. gingivalis are filamentous components on the cell surface and important in the colonization and invasion of periodontal tissue. But all P. gnigivalis strains don't have equal pathogenicity, inequality among strains originates from different fimA genotype. P. gnigivalis fimA gene encoding fimbrillin(structural subunit of fimbriae) has been classified into 5 genotypes(types I to V) based on the nucleotide sequences. In the present study, we examined the prevalence of these fimA genotypes in patients with dental implant and the relationship between prevalence of these genotypes and a condition of peri-implant tissue. Dental plaque specimens obtained from 189 peri-implant sulci of 97 patients with dental implants were analyzed by 16S rRNA fimA gene-directed PCR assay. P. gingivalis were detected in 86.2% of the alll samples. Among the P. gingivalis-positive samples, a significant difference in the occurrence of typeII was observed between test and the two control groups. In two control groups, typeII fimA were detected in 6.3%(PD<5mm/BOP-). 18.7%(PD<5mm/BOP+). In the test $group(PD{\geqq}5mm/BOP+)$, type II fimA genotype were detected most frequently in 50.0% . And a correlation between specific fimA types and peri-implantitis was found in $typeII(R^2=l.105)$. These results suggest that P. gingivalis strains that possess typeII fimA are gradually increased, as a condition of peri-implant tissue is getting complicated and are closely associated with peri-implant health status. We speculate that these organisms be involved in peri-implantitis
A bacterial strain named HY-3 that produces a highly active extracellular protease was isolated from the digestive tract of a spider, Nephila clavata. The bacterium was a Gram-negative, oxidase-negative, catalase-positive, nonhalophilic, nitrate-reducing, facultative anaerobe. Transmission and scanning electron microscopies demonstrated that the isolate was non-spare-forming, straight, rod-shaped, and motile by peritrichous flagella. The G+C content of the DNA was 57.0 mol%. The isoprenoid quinone type was ubiquinone with 8 isoprene units (Q-8). The morphological and biochemical characteristics including the predominant fatty acid and phospholipids profiles placed the isolate HY-3 in the family Enterobacteriaceae. Further biochemical characterization and phylogenetic studies including determination of an almost complete 16S ribosomal DNA sequence suggested that the bacterium was closely related to the genus Serratia. DNA-DNA hybridization analysis revealed that this extracellular protease-producing strain belongs to Serratia proteamaculans, which is also known far its association with insects.
Tetanus is a specific infectious disease, which is often associated with catastrophic events such as earthquakes, traumas, and war wounds. The obligate anaerobe Clostridium tetani is the pathogen that causes tetanus. Once the infection of tetanus progresses to an advanced stage within the wounds of limbs, the rates of amputation and mortality increase manifold. Therefore, it is necessary to devise a rapid and sensitive point-of-care detection method for C. tetani so as to ensure an early diagnosis and clinical treatment of tetanus. In this study, we developed a detection method for C. tetani using loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay, wherein the C. tetani tetanus toxin gene was used as the target gene. The method was highly specific and sensitive, with a detection limit of 10 colony forming units (CFU)/ml, and allowed quantitative analysis. While detecting C. tetani in clinical samples, it was found that the LAMP results completely agreed with those of the traditional API 20A anaerobic bacteria identification test. As compared with the traditional API test and PCR assay, LAMP detection of C. tetani is simple and rapid, and the results can be identified through naked-eye observation. Therefore, it is an ideal and rapid point-of-care testing method for tetanus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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