시험한 유기 질소원 중 yeast extract와 soytone이 Tricholoma matsutake DGUM 26001의 균사생장에 가장 우수한 질소원이었다. Yeast extract를 starch-pyridoxine 배지에 1.0% 농도까지 첨가하였을 때, 균사생장이 증가하였다. $24^{\circ}C$에서 30일간 yeast extract가 첨가된 배지에서 배양하였을 때, 50 ml 배양액에서 518 mg의 건조 균사체를 얻을 수 있었다.
Tricholoma matsutake has been the most valuable ectomycorrhizal fungi in Asia because of its unique flavor and taste. However, due to the difficulty of artificial cultivation, the cultivation of T. matsutake has relied on natural growth in forests. To cultivate the T. matsutake artificially, microorganisms in fairy rings were introduced. In this study, we isolated 30 fungal species of microfungi from the soil of fairy rings. Among them, one single fungal strain showed a promoting effect on the growth of T. matsutake. The growth effect was confirmed by measuring the growth area of T. matsutake and enzyme activities including a-amylase, cellulase, and b-glucosidase. In comparison with control, microfungal metabolite increased the growth area of T. matsutake by 213% and the enzyme activity of T. matsutake by 110-200%. The isolated fungal strain was identified as Penicillium citreonigrum by BLAST on the NCBI database. The Discovery of this microfungal strain is expected to contribute to artificial cultivation of T. matsutake.
외생균근성 버섯균인 송이(Tricholoma)속 균은 현재 인공 재배가 이루어지지 않고 있으며, 성공적인 자원이용을 위해서는 다양한 환경조건에서 균사생장 특성을 규명하는 연구가 선행되어야 한다. 이에 따라 본 연구는 야생버섯 자실체로부터 순수 분리한 4종의 Tricholoma bakamatsutake (가송이), T. fulvocastaneum (구실잣밤나무송이), T. matsutake (송이), T. terreum (땅송이)로부터 물리적, 화학적 환경조건에서 균사생장 특성을 조사하였다. 4종 모두 균사생장에 적합한 물리적 환경으로서 최적 배양 환경 조건은 온도가 $20{\sim}25^{\circ}C$, pH가 4~7, 암 배양 조건인 것을 확인하였다. T. matsutake는 $30^{\circ}C$에서 균사생장이 멈추는 매우 민감한 특성을 보였다. 균사생장에 미치는 화학적 요소 조사 결과, NaCl 농도조건에서 4종의 Tricholoma 모두 1.0% 농도수준 까지 생장이 가능하였다. T. matsutake는 2.0% 농도에서도 균사생장이 가능하였다. 중금속인 카드뮴(50 ppm 농도)과 농약인 emamectin benzoate이 첨가된 배지에서 네 가지 송이속 균의 균사생장이 가장 많이 저해된다는 것을 확인하였다. 중금속구리(Cu) 이온(50 ppm 농도)이 함유된 배지에서는 4종 송이속 균주 모두 균사생장이 거의 저해되지 않았다. T. matsutake는 emamectin benzoate 외에 다른 세 가지 살충제에 대해선 균사생장 억제가 거의 나타나지 않았다. 세포외효소는 T. bakamatsutake와 T. fulvocastaneum만 발색배지에서 Amylase, ${\beta}$-glucosidase 등의 효소활성을 보였다. 본 연구 결과는 4종 송이속 균주의 균사배양에 적합 또는 유해한 환경조건을 구분 할수 있어서 향후 응용 연구에 도움이 될 것으로 기대된다.
본 연구는 효과적인 송이산 관리를 위한 기초자료 확보를 위하여 강원도 양양군을 사례로 송이 생육환경특성을 고려한 소나무비오톱지도 작성을 목적으로 수행하였다. 연구방법은 송이와 관련한 국내 외 관련연구 고찰을 통해 송이 생육환경 특성을 도출하고, 송이 생산지의 식물군집구조와 토양환경을 파악하여 소나무비오톱 지도화 기준을 도출하였다. 지도화 기준은 송이가 발생할 수 있는 중요 요인을 지형 조건과 토양 조건, 식생 조건으로 구분하여 도출하였다. 전체 비오톱유형은 송이생산 가능지, 송이생산 잠재지로 크게 구분하였으며, 송이생산 가능지는 송이생산이 가능한 지형구조 및 토양구조 내 분포하는 소나무 비오톱으로 관목층에 기타 관목성상의 수종이 우점하는 흉고직경 30cm 미만의 단층구조의 소나무 비오톱과 아교목층에 소나무가 우점하는 다층구조의 소나무비오톱이 해당되었다. 송이생산잠재지는 송이생산이 가능한 지형구조 내에 분포하고 있으나 흉고직경 30cm 이상의 노령화된 소나무가 우점하는 단층구조의 소나무비오톱, 아교목층에 참나무류가 우점하는 소나무 비오톱, 관목층에 참나무류가 우점하는 단층구조의 소나무 비오톱 등 식생구조가 부적절한 지역으로 향후 식생관리를 통해 송이 발생 유도가 가능한 지역이었다. 연구결과 소나무비오톱은 송이생산 가능지 6개 유형, 송이생산 잠재지 9개 유형, 송이생산 불가능지 등 총 16개 유형으로 구분되었다. 송이생산 가능지는 전체 소나무림 중 총 $9.8km^2$, 15.48%이었고, 송이생산 잠재지는 $20.52km^2$, 32.42%이었으며, 송이생산 불가능지는 $32.97km^2$, 52.10%이었다.
경주시 남산으로부터 송이를 채집하여 균사를 분리하였다. 집락 및 균사의 형태, 균사의 독특한 송이향(1-octene-3-ol)을 기준으로 하여 Tricholoma matsutake DGUM 26001이라 명명하였다. T. matsutake DGUM 26001은 사용한 복합액체배지 중 yeast malt extract 및 Czapek-Dox 배지에서 가장 우수한 균사생육을 보여주었으며, nutrient glucose 배지, Macaya-Lizano 배지, 및 Tricholoma matsutake 배지(TMM)에서의 균사생육은 양호하였다. 세균 배양에 사용되는 colombia 배지, brain heart infusion 배지, Luria-Bertani glucose 배지 및 brucella 배지에서의 균사 생육은 매우 저조하였다. TMM 배지에 다양한 탄수화물을 탄소원으로 첨가하였을 때, 다당류의 starch, 이당류의 trehalose 및 maltose, 단당류의 sorbitol, xylitol 및 glucose를 사용하였을 때 균사생육이 양호하였다. Starch를 탄소원으로 하는 TMM 배지에서 30일간 균사를 배양하였을 경우, 8.85 g/L의 건조 균사중량을 얻을 수 있었다. 포도당을 탄소원으로 하는 TMM 액체배지에 coconut water 및 pyridoxine을 비타민으로 첨가하여 30일간 배양 후, 가장 우수한 균사 건조체를 얻을 수 있었으며 각각 8.65 및 8.32 g/L의 균사 건조량을 얻을 수 있었다.
송이(Tricholoma matsutake, Songyi, matsutake) 생산과 소나무 생장과의 관계를 알기 위하여, 경북 상주지역의 18년(1978-1995)간의 송이 생산량과 인접 속리산의 소나무 연륜생장과 상관관계를 분석하였다. 두 변수간의 상관관계는 r=0.408로써 통계적으로 유의하지 않았다. 상관관계가 낮은 이유로는 송이생산 변동은 버섯발생 및 생장시기인 9월과 10월의 기상에 영향을 받는 데 비하여 소나무 연륜생장 변동은 5월과 6월의 기상에 주로 영향을 받기 때문으로 생각되었다. 1999년의 경우 충북 월악산 국립공원내 송이생산이 절정을 이룬 시기는 10월 초 1주일간으로 이때 일최저기온은 약 $7^{\circ}C-13^{\circ}C$이었다. 이러한 것은 송이생산의 풍-흉년이 단순한 해거리 현상이 아님을 의미한다. 송이증산을 위해서는 자실체 발생기간 중에 발생지의 토양수분과 온도조절이 중요하다고 생각한다.
Two isolates of Tricholoma matsutake T-008 and T-034, preserved in Entomopathogenic Fungal Culture Collection (EFCC) of Korea, were used in the present study. The isolates had 100% Bootstrap homology with Tricholoma matsutake U62964 and T. matsutake AB188557 and AF309538 preserved in Gene Bank of NCBI. Mycelial growth of T. matsutake was highest in TMM and MYA at $25^{\circ}C$. The highest dry wt. of mycelium was obtained after 65 days of culture, when 6 mycelial discs were inoculated in 100 ml of broth in 250 ml shaking flask. Mycelial mats were observed in clumped condition at the inoculation sites of pine forest after two weeks of inoculation. After 5 months of inoculation, mycelia mats were observed growing inside soil and walls of a few inoculation sites, while mycelial mats growth up to $5{\sim}8$ cm were observed in the roots of pine tree after 6 months. The survival rate of the inoculum was about 40% of the total inoculation sites. The survival rate was found below 20% when the mycelium was inoculated in the summer. The reasons for low survival rates of the mycelium were mainly due to dry season and the soil-borne small animals such as earthworm and mole. After one year of inoculation, no external difference was observed between the artificially inoculated mycelia and the naturally existing mycelia of T. matsutake. The present study showed that fruiting bodies of T. matsutake could be produced by artificial inoculation under the appropriate environmental conditions.
Tricholoma matsutake is an ectomycorrhizal fungus that has a symbiotic relationship with the root of Pinus densiflora. Soil microbial communities greatly affect the growth of T. matsutake, however, few studies have examined the characteristics of these communities. In the present study, we analyzed soil fungal communities from Gyeongju and Yeongdeok using metagenomic pyrosequencing to investigate differences in fungal species diversity, richness, and taxonomic composition between the soil under T. matsutake fruiting bodies (Sample 2) and soil where the fairy ring of T. matsutake was no longer present (Sample 1). The same spot was investigated three times at intervals of four months to observe changes in the community. In the samples from Yeongdeok, the number of valid reads was lower than that at Gyeongju. The operational taxonomic units of most Sample 2 groups were less than those of Sample 1 groups, indicating that fungal diversity was low in the T. matsutake-dominant soil. The soil under the T. matsutake fruiting bodies was dominated by more than 51% T. matsutake. From fall to the following spring, the ratio of T. matsutake decreased. Basidiomycota was the dominant phylum in most samples. G-F1-2, G-F2-2, and Y-F1-2 had the genera Tricholoma, Umbelopsis, Oidiodendron, Sagenomella, Cladophialophora, and Phialocephala in common. G-F1-1, G-F2-1, and Y-F1-1 had 10 genera including Umbelopsis and Sagenomella in common. From fall to the following spring, the amount of phyla Basidiomycota and Mucoromycota gradually decreased but that of phylum Ascomycota increased. We suggest that the genus Umbelopsis is positively related to T. matsutake.
송이생산을 고려한 소나무비오톱유형화 및 지도 작성을 통한 송이생산지의 생태적 관리방안을 제시하고자 하였다. 연구대상지는 동서고속도로 신설구간 중 송이가 다량 생산되는 양양군구간을 대상으로 도로노선중앙에서 좌우 700m씩 범위내 총 $19.79km^2$을 설정하였다. 연구의 내용은 4단계로 구분하였으며 첫째, 양양군 송이관련특성, 둘째, 송이관련 선행연구 고찰, 셋째, 송이생산을 고려한 소나무비오톱유형화 기준 및 프로세스 정립, 넷째, 송이생산을 고려한 소나무비오톱지도화 등이다. 송이생산에 적합한 경사도 $30{\sim}40^{\circ}C$ 지역은 24.77%, 남향계열은 17.44%이었고 식생구조는 소나무군락 26.00%, 평균수령, $38{\pm}8.34$ 년생, 교목층 평균식생밀도 $9.55{\pm}4.98$ 주/$100m^2$ 등으로 송이생산에 최적 식생구조였다. 토양산도(pH)는 5.0~5.6(47.96%) > 5.6~7.0(42.90%) > 4.0~5.0(9.14%)로서 송이발생에 적합한 약산성 토양인 pH 4.0~5.6의 면적은 57.10%였다. A0층의 깊이는 평균 $3.39{\pm}2.14cm$이며 4~6cm(78.03%) > 0~2cm(18.10%) > 2~4cm(3.87%)였다. 선행연구와 현장조사 결과를 바탕으로 현존식생(소나무우점비율), 지형(지형특성 및 경사도), 수령, 토양특성(토양산도와 A0층 깊이), 식생밀도를 유형화 기준으로 설정하여 총 6개 송이생산을 고려한 소나무비오톱유형으로 구분하였다. 유형별 분포면적은 송이생산잠재(II)소나무비오톱유형(32.86%) > 송이생산 부적합 소나무비오톱유형(22.17%) > 송이생산적합(II)소나무비오톱유형(17.79%) > 송이생산적합(I)소나무비오톱유형(14.86%) > 송이생산잠재(I)소나무비오톱유형(9.77%) > 송이생산소나무비오톱유형(2.55%) 등의 순이었다.
송이의 공시균(KFR1432)과 실험실에서 자체 분리한 균(YxT, WxT, $\textrm{NK}_3\textrm{T}$)의 생장속도의 차이와 FE SEM으로 확인한 미세구조의 차이로 공시균과 자체 분리균이 서로 다른 균임을 확인할 수 있었다. Tyrosinase 활성 억제 실험을 위해 각각 균사체의 열수 추출물, 에탄올 추출물, 배양액을 hexane, chloroform, ethyl acetate로 분획하였다. 그 결과 모든 균의 ethyl acetate 분획층과 수층에서 tyrosinase 활성을 억제하는 것으로 나타났으며, KFR1432의 ethyl acetate 분획층과 YxT의 수층에서 억제율이 100%를 넘어 큰 저해 활성을 보였다. 또한 항산화제 처리 결과 ascorbic acid와 glutathion은 생장을 다소 증가시키거나 별 영향을 주지 못한 반면, tocopherol 의 경우 농도가 높아질수록 생장을 억제하는 것으로 나타났다. Tyrosinase 활성 억제에 있어서는 모든 항산화제 처리구에서 무처리구에 비해 높은 억제율을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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