CMCase와 xylanase 분비능이 우수한 고온성 세균을 분리하기 위하여 진주 인근지역의 느타리 재배농장으로부터 수확후배지를 수집하였다. 느타리 수확후배지로부터 17종의 균주를 분리하였으며 이 중 CMCase와 xylanase 활성이 큰 균주 YJ09를 선발하였다. Bacillus ID kit와 MicroLog system을 이용하여 분리균 YJ09의 생리적 생화학적 특성을 조사한 결과 분리균 YJ09은 B. licheniformis와 유사한 특징을 나타내었으며 16S rDNA 염기서열 분석 결과에서도 B. licheniformis와 98.9%의 상동성을 나타내었다. 이와 같은 결과를 종합하여 분리균 YJ09은 B. licheniformis YJ09로 동정되었다. 분리균이 분비하는 CMCase와 xylanase 활성은 분리균이 증식함에 따라 대수증식기 중반부터 급격히 증가하였고 정지기에 진입하면 효소활성이 더 이상 증가하지 않는 것으로 나타났으며 xylanase 활성은 대수증식기 초기부터 지속적으로 증가하여 대수증식기 중반에 최대활성을 나타내었다.
고온성이며 호알칼리성인 Bacillus sp. TA-11이 생성하는 Invertase의 생합성 조절 기작을 규명하고자 먼저 이들의 유도와 억제에 관하여 검토하였다. Invertase는 10mM sucrose을 함유한 생합성 조절배지에서 3시간에 효율적으로 유도되었고 glucose는 sucrose에 의한 invertase 유도를 inducer exclusion 방식으로 억제시켰다. CAMP의 첨가로 glucose에 의한 catabolic repression이 다소 줄어들었다.
A thermophilic bacteria showing proteolytic activity against defatted soybean was isolated from soil. It was identified as Bacillus amyloliquefaciens based on its morphological and physiological characteristics. The Bacillus amyloliquefaciens NS 15-4 was cultivated at 50$\circ$C by rotary shaking in a medium containing defatted soybean. An extracellular protease from this strain was purified to homogeneity by ammonium sulfate precipitation, ion exchange, and hydrophobic interaction chromatographies. The molecular weight of the enzyme was estimated to be approximately 30,000 by SDS-PAGE and the N-terminal amino acid sequence of the enzyme was turned out to be AQSVPYGISQIKAPA. The optimum temperature and pH for the enzyme reaction were 60$\circ$C and 11, respectively, and its thermostability was increased by the addition of calcium ion. The enzyme was inactivated by phenylmethylsulfonylfluoride, suggesting it be a serine protease. Comparing with other commercial proteases, the enzyme showed relatively high proteolytic activity against defatted soybean, a water-insoluble protein substrate.
An intracellular invertase was purified to homogeneity from the cell extract of an alkalophilic and thermophilic Bacillus sp. TA-11, which was classified as a new species belonging to Bacillus cereus based on chemotaxanomic and phylogenetic analyses. The purified enzyme with a recovery of 26.6% was determined to be a monomeric protein with a molecular weight of 23 kDa by SDS-PAGE and 26 kDa by gel filtration. The maximum enzyme activity was observed at pH 7.0 and $50^{\circ}C$, and the purified enzyme was stable at the pH range of 5.0 to 8.0 and below $60^{\circ}C$. $K_m$ and $V_{max}$ values of the enzyme for sucrose were 370 mM and 3.0 ${\mu}M$ per min, respectively. The enzyme activity was significantly inhibited by bivalent metal ions ($Hg^{2+}$, $Cd^{2+}$ and $Cu^{2+}$) and sugars (glucose and fructose).
For production of thermophilic and alkaline protease, Bacillus sp. strain AP-5 was isolated from a compost. The production of the protease was reached at maximum for 4 days at $55^{\circ}$ in standing culture. Chitin and Cellulose as carbon source, and Skim Milk as nitrogen source were favorable for the production of the enzyme. Optimal temperature and optimal pH of the enzyme was $55^{\circ}$ and 11, respectively. Metal ion didn't effect on the enzyme activity, the protease was very stable at heat treatment of 30 min at $55^{\circ}$.
A moderately thermophilic, alkalophlic and powerful crystalline cellulose-digesting bacterium, Bacillus K-12, was isolated from filter paper wastes and found to be similar to Bacillus circulans or Bacillus pumilis, except for its ability to grow at a moderately high pH and temperature. The isolate grew at a pH ranging from 6 to 10 and at a temperature ranging from 35 to $65^{\circ}C$ and produced a large amount of cellulase components containing avicelase, xylanase, CMCase, and FPase when grown in avicel medium for 5 to 7 days at $50^{\circ}C$. The crude enzyme preparation from the culture broth hydrolyzed xylan, raw starch, pullulan and ${\beta}-1,3$ glucan such as laminarin. Furthermore, the enzyme hydrolyzed crystalline cellulose to cellobiose and glucose and had a broad pH activity curve (pH 6~9). The enzyme was stable up to $70^{\circ}C$.
A systematic study of microbial fuel cells comprised of thermophilic Bacillus licheniformis and Bacillus thermoglucosidasius has been carried out under various operating conditions. Substantial amount of electricity was generated when a redox mediator was used. Being affected by operation temperature, the maximum efficiency was obtained at 50$^{\circ}C$ with an open circuit voltage of ca. 0.7 V. While a small change around the optimum temperature did not make much effect on the cell performance, the rapid decrease in performance was observed above 70$^{\circ}C$. It was noticeable that fuel cell efficiency and discharge pattern strongly depended on the kind of carbon sources used in the initial culture medium. In the case of B. thermoglucosidasius, glucose alone was utilized constitutively as a substrate in the microbial fuel cell irrespective of used carbons sources. When B. licheniformis was cultivated with lactose as a carbon source, best charging characteristics were recorded. Trehalose, in particular, showed 41.2% coulombic efficiency when B. thermoglucosidasius was cultured in a starch-containing medium. Relatively good repetitive operation was possible with B. thermoglucosidasius cells up to 12 cycles using glucose as a carbon source, when they were cultured with lactose as an initial carbon source. This study demonstrates that highly efficient thermophilic microbial fuel cells can be constructed by a pertinent modulation of the operating conditions and by carefully selecting carbon sources used in the initial culture medium.
Bacillus sp. TA-11에 대한 오골계 난백 lysozyme과 일반 난백 lysozyme의 용균성을 비교분석 하였다. 오골계 난백 lysozyme의 용균활성은 Bacillus sp. TA-11를 5$0^{\circ}C$에서 18시간 정치배양한 대수기 후기의 세포에 대하여 가장 높았고, lysozyme의 농도는 0.25%가 최적이었다. 또한 lysozyme의 최적반응 pH와 온도는 각각 4.5와 35$^{\circ}C$였다. 일반 난백 lysozyme의 용균활성은 시험균주를 24시간 배양한 정지기의 세포에 대하여 가장 높았고 lysozyme의 최적 농도는 0.5%였으며 반응 최적 pH와 온도는 각각 5.5와 4$0^{\circ}C$이었다.
To achieve optimum operation of a thermophilic aerobic digestion (TAD) process for waste activated sludge (WAS), TAD experiments using Bacillus stearothermophilus (ATCC 31197) were carried out to investigate the optimum concentration of dissolved oxygen (DO). TAD reactors were operated at DO concentrations of 0, 1, 2, 3, 4, and 5 ppm, and the results showed that the WAS could be successfully degraded by a TAD system operated with a DO concentration of 1 ppm and above. When the TAD system with an optimum additive (2 mM Ca ion), selected from a previous study, and 1 ppm DO concentration were combined with a thermal pretreatment ($121^{\circ}C$, 10 min), the results exhibited upgraded total suspended solids and an enhanced protein degradation.
The cellulose-fed microbial fuel cell (MFC) is a biotechnological process that directly converts lignocellulosic materials to electricity without combustion. In this study, the cellulose-fed, MFC-integrated thermophilic bacterium, Bacillus sp. WK21, with endoglucanase and exoglucanase activities of 1.25 ± 0.08 U/ml and 0.95 ± 0.02 U/ml, respectively, was used to generate electricity at high temperatures. Maximal current densities of 485, 420, and 472 mA/m2 were achieved when carboxymethyl cellulose, avicel cellulose, and cellulose powder, respectively, were used as substrates. Their respective maximal power was 94.09, 70.56, and 89.30 mW/m3. This study demonstrates the value of the novel use of a cellulase-producing thermophilic bacterium as a biocatalyst for electricity generation in a cellulose-fed MFC.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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