The low and high temperature stress might affect the yield and quality of many crop species. Alternative oxidase (AOX) gene is known as factors related to stress resistance in plants. In order to develop molecular markers related to stress resistance in Chinese cabbage, fifteen ESTs sharing sequence similarity to arabidopsis AOX genes were found using Brassica rapa EST database from NCBI. The polymorphic DNA sequences using the ESTs were then screened between Chinese cabbage, 'Chiifu' and 'Kenshin'. We found four ESTs that have either insertion or deletion between the two cultivars. These polymorphic sites were then targeted for development of the four PCR based molecular markers. These molecular markers developed in this study could be useful for a test of their relationship with abiotic stress resistance in Chinese cabbage.
Definitive identification of original plant species is important for standardizing herbal medicine. The herbal medicines Cynanchi Wilfordii Radix (Baekshuoh in Korean and Beishuwu in Chinese) and Polygoni Multiflori Radix (Hashuoh in Korean and Heshuwu in Chinese) are often misidentified in the Korean herbal market due to morphological similarities and similar names. Therefore, we developed a reliable molecular marker for the identification of Cynanchi Wilfordii Radix and Polygoni Multiflori Radix. We used random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of three plant species, Polygoni multiflorum, Cynanchum wilfordii, and Cynanchum auriculatum, to obtain several species-specific RAPD amplicons. From nucleotide sequences of these RAPD amplicons, we developed six sequence characterized amplification region (SCAR) markers for distinguishing Polygoni Multiflori Radix and Cynanchi Wilfordii Radix. Furthermore, we established SCAR markers for the simultaneous discrimination of the three species within a single reaction by using multiplex-PCR. These SCAR markers can be used for efficient and rapid authentication of these closely related species, and will be useful for preventing the distribution of adulterants.
To identify the variation of the RAPD patterns between two Atractylodes species, 52 kinds of random primers were applied to each eight of A japonica and A. macrocephala genomic DNA. Ten primers of 52 primers could be used to discriminate between the species and 18 polymorphisms among 67 scored DNA fragments (18 fragments are specific for A. japonica and A. macrocephala) were generated using these primers, 26.9% of which were polymorphic. RAPD data from the 10 primers was used for cluster analysis. The cluster analysis of RAPD markers showed that the two groups are genetically distinct. On the other hand, to identify the variation of the AFLP patterns and select the species specific AFLP markers, eight combinations of EcoRI/MseI primers were applied to the bulked A. japonica and A. macrocephala genomic DNA. Consequently, three combinations of EcoRI/MseI primers (EcoRI /Mse I ; AAC/CTA, AAC/CAA, AAG/CTA) used in this study revealed 176 reliable AFLP markers, 42.0% of which were polymorphic. 74 polymorphisms out of 176 scored DNA fragments were enough to clearly discriminate between two Atractylodes species.
Molecular characterization of different genotypes reveals accurate information about the degree of genetic diversity that helps to develop a proper breeding program. In this study, a total of 30 EST-based simple sequence repeat (EST-SSR) markers derived from trumpet lily (Lilium longiflorum) were used across 11 native lily species for their genetic relationship. Among these 30 markers, 24 SSR markers that showed polymorphism were used for evaluation of diversity spectrum. The allelic number at per locus ranged from 1 at SSR2 locus to 34 alleles at SSR15 locus, with an average of 11.25 alleles across 24 loci observed. The polymorphic information content, PIC, values ranged from 0.0523 for SSR9 to 0.9919 for SSR2 in all 24 loci with an average of 0.3827. The allelic frequency at every locus ranged from 0.81% at SSR2 locus to 99.6% at SSR14 locus. The pairwise genetic dissimilarity coefficient revealed the highest genetic distance with a value of 81.7% was in between L. dauricum and L. amabile. A relatively closer genetic distance was found between L. lancifolium and L. dauricum, L. maximowiczii and L. concolor, L. maximowiczii and L. distichum (Jeju), L. tsingtauense and L. callosum, L. cernuum and L. distichum (Jeju ecotype), of which dissimilarity coefficient was 50.0%. The molecular fingerprinting based on microsatellite marker could serve boldly to recognize genetically distant accessions and to sort morphologically close as well as duplicate accessions.
Resource plants are important and have strong potential for a variety of utilities as crops or pharmaceutical materials. However, most resource plants remain wild and thus their utility for breeding and biotechnology is limited. Molecular markers are useful to initiate genetic study and molecular breeding for these understudied resource plants. We collected various wild collections of Peucedanum japonicum which is indigenous resource plants utilized as oriental medicine and leafy vegetables in Korea. In this study, we produced two independent whole genome sequences (WGSs) from two collections and identified large scale polymorphic simple sequence repeat (pSSR) based on our pipeline to develop SSR markers based on comparison of two WGSs. We identified a total of 452 candidate pSSR contigs. To confirm the accuracy and utility of pSSR, we designed ten SSR primer pairs and successfully applied those to seven collections of P. japonicum. The WGS and pSSR candidates identified in this study will be useful resource for genetic research and breeding purpose for the valuable resource plant, P. japonicum.
Ficus deltoidea Jack is an important and popular medicinal plant species found in the Malaysia. Plants are being collected and used based on morphology and authentication to prevent adulteration is not in practice. In this study, twenty-six accessions of F. deltoidea Jack were collected from Kelantan and Terengganu states of Peninsular Malaysia to examine their genetic similarities and differences using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) technique. Out of 20 arbitrary primers, two primers (D-10 and D-11) were selected which produced reliable DNA polymorphism. D-10 and D-11 primers generated 138 RAPD bands ranging from 250 bp to 3000 bp. Ninety-nine of them were polymorphic loci (72%) and thirty-nine were nonpolymorphic loci (28%). A total of 56 bands with polymorphic loci were amplified with primer D-10 and analyzed by cluster analysis and UPGMA to present a dendrogram depicting the degree of genetic relationship among 26 accessions. Eight RAPD markers were sequenced to determine their identity. RAPD analysis showed the genetic diversity among 26 accessions of F. deltoidea Jack. The RAPD profile and RAPD marker sequences reported in this paper could be used in plant and/or plant material authentication. This study also suggested that RAPD can be a useful technique to study DNA polymorphism in F. deltoidea Jack.
Tamarind (Tamarindus indica L.) is one of the multipurpose tree species distributed in the tropical and sub-tropical climates. It is an important fruit yielding tree that supports the livelihood and has high social and cultural values for rural communities. The vegetative, reproductive, qualitative, and quantitative traits of tamarind vary widely. Characterization of phenotypic and genetic structure is essential for the selection of suitable accessions for sustainable cultivation and conservation. This study aimedto examine the genetic relationship among the collected accessions of sweet, red, and sour tamarind by using Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) primers. Nine accessions were collected from germplasm gene banks and subjected to marker analysis. Fifteen highly polymorphic primers generated a total of 169 fragments, out of which 138 bands were polymorphic. The polymorphic information content of RAPD markers varied from 0.10 to 0.44, and the Jaccard's similarity coefficient values ranged from 0.37 to 0.70. The genetic clustering showed a sizable genetic variation in the tamarind accessions at the molecular level. The molecular and biochemical variations in the selected accessions are very important for developing varieties with high sugar, anthocyanin, and acidity traits in the ongoing tamarind improvement program.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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