The influence of flavonols from onion skin on xanthine oxidase was investigated. Methanol extract was showed 12.8% of yield, 661.3mg% of flavonoids contents and 88.7% of inhibitory effect on xanthine oxidase F1 and F2 fractions were obtained from the methanol extract by ODS and Sephadex LH-20 chromatography. F1 and F2 fractions flavonols(3-OH free) identified by UV/visible spectroscopy. Inhibitory effect of F1 and F2 on xanthine oxidase were increased with increasing concentration. IC50s of F1 and F2 were 0.95$\mu\textrm{g}$ and 0.67$\mu\textrm{g}$, respectively. To confirm the specificity of F1 and F2 against xanthine oxidase, albumin was added to the reaction mixture. The inhibition of F1 and F2 may be due to specific binding to xanthine oxidase. The modes of their inhibitions were of mixed type with respect to xanthine as a substrate.
To find the role of polyphenol oxidase in lignin biodegradation, chracteristics of extracellular polyphenol oxidase activity from Lentinus edodes JA01 was investigated. Polyphenol oxidase had its optimum activity at pH 4.5 and $45^{\circ}C$ respectively. Also, the enzyme was very unstable in various pHs and comparatively heat stable up to $60^{\circ}C$. In $lignosulfonate-NH_4$ salts medium, the growth rate of L.edodes JA 01 was relatively slow and polyphenol oxidase activity appeared 2 and 14 days after inoculation. No significant relationships were found between polyphenol oxidase activity and the amounts of lignosulfonate present in the culture medium.
The synthesis alcohol-oxidase[EC 1.1.3.13] was investigated in the yeasts, Candida boidinii CBS 8106 and C. boidinii CBS 2428, during growth on different carbon sources. Alcohol-oxidase was undetectable in all strains submitted to the test in the mineral salts medium containing 1.0% glucose, but its production was rapidly increased when the carbon source was changed glucose to 1.0% methanol after 24hrs of incubation. When cells were grown on the various carbon sources (glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, lactic acid or acetic acid), the alcohol-oxidase activity was undetected. These carbon sources together with methanol yielded far better synthesis of alcohol-oxidase than in the case of carbon sources alone. Alcohol-oxidase was active towards alcohol of shorter alkyl-chain length than C5 and unsaturated alcohols. Its affinity for these alcohols decreased with the increasing length of the alkyl-chain. The apparent Km values for the methanol of Candida boidinii CBS 8106 and C. boidinii CBS 2428 were 1.96 and 1.21, respestively.
In the case of immobilizing of glucose oxidase in organic polymer using electrosynthesis, the glucose oxidase obstructs charge transfer and mass transport during the film growth. This may lead to short chained polymer and/or make charge-coupling weak between the glucose oxidase and the backbone of the polymer. That is mainly due to insulating property and net chain of the glucose oxidase. Since being the case, it is useless to increase in amount of glucose oxidase more than reasonable in the synthetic solution. We establish qualitatively that amount of immobilization can be improved by adding a little ethanol in the synthetic solution. As ethanol was added by 0.1 rnol dm" in the synthetic solution, Michaelis-Menten constants of the resulting enzyme electrode decreased from 30.7 mmol $dm^{-3}$ to about 2 mmol $dm^{-3}$. That suggests increase in affinity of the enzyme electrode for glucose and in amount of the immobilized enzyme.zyme.
본 연구는 오이의 추출물에서 Ascorbic acid oxidase 활성의 존재유무를 검토하고 이 효소의 특성을 규명하여 Ascorbic acid의 손실을 최소화하는 과채류의 조리, 가공조건을 설정하는데 도움이 되고저 시도 되었다. 오이에서 Ascorbic acid oxidase를 분리해 내어 그 특성을 연구한 결과 시간의 변화에 따른 Ascorbic acid oxidase의 활성은 처음 10분 동안 Ascorbic acid 감소량이 가장 현저하였으며 Ascorbic acid oxidase의 최저 pH는 6.5로 나타났다. 또한 온도의 변화에 따른 Ascorbic acid oxidase의 활성은 $40^{\circ}C$까지는 계속 증가하다가 최적온도 $40^{\circ}C$를 기점으로 그 이상의 온도에서는 감소하였다. 본 연구에서 고찰한 결과를 실제로 적용시켜 오이 juice를 제조하여 온도 및 pH변화에 따른 Ascorbic acid 함량을 비교한 결과 냉장온도에서 $4^{\circ}C$의 물로 blending한 것이 실온의 물로 blending한 것보다 Ascocbic acid 함량이 높았으며 orang juice (pH 34) 를 첨가하여 blending한 것은 Ascorbic acid 함량이 감소되지 않은 것으로 나타났다. 따라서 야채 juice조제시 저온에서 처리하고 pH 를 3.9 이하로 낮추며 juice 조제후 바로 섭취하는 것이 Ascorbic acid의 파괴를 최소화할 수 있는 바람직한 방법이라고 사려된다.
해조류의 기능특성 해석의 일환으로 해조류 중 갈조류인 미역 (Undaria pinnattnda), 감태 (Ecklonia stolonifera), 곰피(Ecklonia cava), 다시마(Laminaria japonica) 및 모자반(Sargussum fulvellum)과 녹조류인 청각(Codium fragile), 파래(Enteromorpha compressa) 및 홍조류인 김(Porphyra tenera)등을 시료로 하여, 생체내 퓨린대사에서 xanthine 및 hypoxanthine으로 부터 요산을 형성, 혈액 중 이상 고요산 증상에 의하여 신장질환 및 통풍을 유발하는 효소인 xanthine oxidase 저해작용에 대하여 살펴 본 결과, 갈조류의 다시마과 Ecklonia 속인 감태와 곰피가 가장 높은 저해율을 나타내었으며, 용매 추출물에 있어서는 diethyl ether>ethyl acetate>chloroform>수용성 획분의 순으로 나타났다. 또한 xanthine oxidase 저해작용이 가장 높은 감태 diethyl ether 추출물을 silica gel column chromatography, thin layer chromatography 및 HPLC를 통하여 xanthine of idase 저해 인자를 분리한 결과, xanthine oxidase 저해작용이 가장 강한 활성성분은 420, 456, 467nm에서 흡수파장을 가지는 물질로서, 이는 siphonaxanthine인 것으로 추정되었다.
Glucose oxidase-catalase동시 고정화 효소계에 관한 반응을 연구하였다. 두 가지 효소를 미생물 세포벽에 동시 고정과한 제품과, glucose oxidase만 고정화 시킨 것 그리고 두가지 효소를 따로 고정화시켜 혼합한 제품의 반응성을 각각 조사한 결과 동시 고정화 제품이 가장 우수하였다. 충진식 연속 반응조에서 불활성화 상수$(K_d)$는 glucose oxidase만의 고정화 효소경우 $1.12\;{\times}\;10^{-2}\;hr^{-1}$이었고, 동시 고정화 효소의 경우 catalase/glucose oxidase=10일때 $2.17{\times}10^{-3}\;hr^{-1}$이었다. 또한 체장시간$({\tau})$이 $5.55g{\cdot}hr/l\;O_2$ 일때 catalase/glucose oxidase 1 및 10 모두 반응율이 가장 좋았고 이보다 길어지면 외부 물질 전달의 영향으로 반응율이 오히려 떨어 졌다. $O_2$의 최대 허용치는 체장시간 $8.3g{\cdot}hr/l$일때 나타났다. 본 연구 결과로 부터 glucose oxidase와 catalase 동시고정화 효소에서 생산성을 높이기 위해서는 glucose oxidase의 불활성화와 이 효소의 효율이 동시에 고려되도록 두 효소의 비율을 정해야 하는 것을 알았다.
Ascorbate oxidase activity in various cucumber tissue extracts was highest in young fruit peeling. Cucumber callus was induced from young fruit peeling and callus cell lines were selected for more than 7 months, which porduced high levels of ascorbate oxidase and had a high growth rate. Induction of callus was optimized with Linsmaier-Skoog(LS) medium at 25$^{\circ}C$ in dark phase. Ascorbate oxidase activity reached a maximum at 5 days after transfer to LS basal liquid-medium ant then declined. The enzyme activity in callus cells was stimulated by addition of 10${\mu}$M $CuSO_4$ in the early logarithmic phase of growth. And also, adding 10${\mu}$M $CuSO_4$ at 3rd day 7th day of culture period, ascorbate oxidase activity in callus cells was maintained to high level. Maximum yield of ascorbate oxidase was found at the 25th day by flask shaking culture, but three-fold of ascorbate oxidase activity was obtained at the 16th day by jar fermentation.
통풍과 oxygen free radical의 독성에 관여하는 xanthine oxidase에 대한 새로운 저해물질의 탐색 및 개발을 목적으로 본 연구에서 선택분리한 Aspergillus sp. F184가 생산하는 저해물질을 분리.정제하고 구조를 결정하였으며 효소저해활성을 조사하였다. 본 균주를 배양 후 배양액을 여과하여 균체와 배양액을 분리하고 균체를 acetone으로 추출하고 감압농축하고 남은 수용액층을 배양액과 합쳐 HP-20 adsorption column chromatography, ethyl acetate 추출, silica gel column chromatography, 결정화 등을 실시하여 xanthine oxidase에 대한 저해물질을 분리, 정제하였다. 본 저해물질의 구조를 NMR 및 MS 스펙트럼을 측정하여 분석한 결과 5,6-epoxy-2-hydroxy-3-methyl-2-cyclohexene-1,4-dione으로서 terreic acid로 동정되었다. Terreic acid의 xanthine oxidase에 대한 저해활성을 조사한 결과 IC50가 1.1$\times$10-7M로서 기존의 저해제인 allopurinol과 유사하였다. 이에 terreic acid에 의한 xanthine oxidase 저해활성은 보고된 바가 없기에 새로운 통풍치료제로서의 가능성이 있음을 보고한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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