Ganoderma lucidum, an oriental polypore fungus and medicinal mushroom, has a long history of use for promoting health and longevity in Korea, China, and other Asian countries. This study was aimed at determining the anti-inflammatory activity and mechanism of action of Ganoderma lucidum in murine macrophage RAW 264.7 cells. Ganoderma lucidum was extracted with ethanol and freeze-dried. The anti-inflammatory effect (nitrite production) of Ganoderma lucidum extracts was tested using a nitric oxide (NO) colorimetric assay. Semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed to quantify the mRNA expression of cytokines including tumor necrosis factor-${\alpha}$ ($TNF-{\alpha}$), interleukin $(IL)-1{\beta}$, and IL-6. Western blotting was performed to measure the expression levels of inflammation-related proteins, such as inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), nuclear factor kappa B ($NF-{\kappa}B$) p65, and phosphorylated $NF-{\kappa}B$ p65. The NO colorimetric assay showed that NO production increased with the treatment of lipopolysaccharide in (LPS)-activated RAW 264.7 macrophages and decreased with the cotreatment of Ganoderma lucidum extracts and LPS. Ganoderma lucidum extracts repressed the mRNA expressions of cytokines, which were increased after the LPS treatment. In addition, Ganoderma lucidum extracts inhibited the LPS-induced expression of iNOS and COX-2 and the LPS-induced phosphorylation of $NF-{\kappa}B$ p65. These results suggest that the Ganoderma lucidum extracts exert an anti-inflammatory activity by inhibiting $NF-{\kappa}B$ related proteins and cytokines.
Ovotransferrin (OTF) is a well-known protein of the transferrin family with strong iron chelating activity, resulting in its antimicrobial activity. Furthermore, OTF is known to have antioxidant, anticancer, and antihypertensive activities. However, there have been few studies about the immune-enhancing activity of OTF. In current study, we investigated the immune-enhancing activity of OTF using the murine macrophage cells in vitro. The effect of OTF on production of pro-inflammatory mediators and cytokines were determined using Griess assay and quantitative real-time PCR. Using Neutral Red uptake assay, we confirmed the effect of OTF on phagocytic activity of macrophages. Ovotransferrin significantly increased the production of nitric oxide (NO) and secretion of inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA with no cytotoxic activity. Ovotransferrin (2 mg/mL) stimulated NO production up to $31.9{\pm}3.5{\mu}M$. Ovotransferrin significantly increased the mRNA expression levels of pro-inflammatory cytokines which are tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$), Interleukin-$1{\beta}$ (IL-$1{\beta}$), and IL-6: OTF (2 mg/mL) treatment increased the secretion of mRNA for TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, and IL-6 by 22.20-, 37.91-, and 6.17-fold of the negative control, respectively. The phagocytic activity of macrophages was also increased by OTF treatment significantly compared with negative control. Also, OTF treatment increased phosphorylation level of MAPK signaling pathways. These results indicated that OTF has immune-enhancing activity by activating RAW 264.7 macrophages via MAPK pathways.
It is well-known that cultivated wild Panax ginseng has anti-inflammatory effect. However, a comparative study on cultivation period vs biofunctionality is currently lacking. In this study, 70% ethanol extracts of 3-years (yrs)-, 5-yrs-, or 7-yrs-old cultivated wild ginseng were evaluated for their inhibitory effects on RAW264.7 murine macrophages. Specifically, the production of pro-inflammatory cytokines (interleukin-6 [IL-6] and tumor necrosis factor-alpha [TNF-${\alpha}$]), the expression of surface proteins (CD80, CD86, and MHC-II), and the phagocytic properties were investigated. RAW264.7 cells were induced by 500 ng/mL of lipopolysaccharide (LPS) and treated with 0.1, 1, and 10 ppm of samples. LPS-induced IL-6, TNF-${\alpha}$ and surface proteins in all samples were down-regulated in a dose-dependent manner. Both IL-6 and TNF-${\alpha}$ were significantly reduced at 10 ppm of the 7-yrs-old sample compared to 10 ppm of 3-yrs- and 5-yrs-old samples. CD80 and CD86 were also reduced at 10 ppm of all samples, and there was no difference among samples. The phagocytosis has no difference except in 10 ppm of 3 yr-old sample. The results suggest that cultivated wild ginseng extract has anti-inflammatory effect without decreasing phagocytosis.
Park, Donghwan;Ro, MyungJa;Lee, A-Jin;Kwak, Dong-Wook;Chung, Yunro;Kim, Jae-Hong
Molecules and Cells
/
v.44
no.12
/
pp.893-899
/
2021
BLT2 is a low-affinity receptor for leukotriene B4, a potent lipid mediator of inflammation generated from arachidonic acid via the 5-lipoxygenase pathway. The aim of this study was to investigate whether BLT2 plays any role in sepsis, a systemic inflammatory response syndrome caused by infection. A murine model of cecal ligation and puncture (CLP)-induced sepsis was used to evaluate the role of BLT2 in septic inflammation. In the present study, we observed that the levels of ligands for BLT2 (LTB4 [leukotriene B4] and 12(S)-HETE [12(S)-hydroxyeicosatetraenoic acid]) were significantly increased in the peritoneal lavage fluid and serum from mice with CLP-induced sepsis. We also observed that the levels of BLT2 as well as 5-lipoxygenase (5-LO) and 12-LO, which are synthesizing enzymes for LTB4 and 12(S)-HETE, were significantly increased in lung and liver tissues in the CLP mouse model. Blockade of BLT2 markedly suppressed the production of sepsis-associated cytokines (IL-6 [interleukin-6], TNF-α [tumor necrosis factor alpha], and IL-1β [interleukin-β] as well as IL-17 [interleukin-17]) and alleviated lung inflammation in the CLP group. Taken together, our results suggest that BLT2 cascade contributes to lung inflammation in CLP-induced sepsis by mediating the production of inflammatory cytokines. These findings suggest that BLT2 may be a potential therapeutic target for sepsis patients.
Background: As a kind of common complication of the surgery of perianal diseases, perianal ulcer is known as a nuisance. This study aims to develop a kind of 20(S)-ginsenoside Rg3 (Rg3)-loaded hydrogel to treat perianal ulcers in a rat model. Methods: The copolymers PLGA1600-PEG1000-PLGA1600 were synthesized by ring-opening polymerization process and Rg3-loaded hydrogel was then developed. The perianal ulcer rat model was established to analyze the treatment efficacy of Rg3-loaded hydrogel for ulceration healing for 15 days. The animals were divided into control group, hydrogel group, free Rg3 group, Rg3-loaded hydrogel group, and Lidocaine Gel® group. The residual wound area rate was calculated and the blood concentrations of interleukin-1 (IL-1), interleukin-6 (IL-6), and vascular endothelial growth factor (VEGF) were recorded. Hematoxylin and eosin (H&E) staining, Masson's Trichrome (MT) staining, and tumor necrosis factor α (TNF-α), Ki-67, CD31, ERK1/2, and NF-κB immunohistochemical staining were performed. Results: The biodegradable and biocompatible hydrogel carries a homogenous interactive porous structure with 10 ㎛ pore size and five weeks in vivo degradation time. The loaded Rg3 can be released sustainably. The in vitro cytotoxicity study showed that the hydrogel had no effect on survival rate of murine skin fibroblasts L929. The Rg3-loaded hydrogel can facilitate perianal ulcer healing by inhibiting local and systematic inflammatory responses, swelling the proliferation of nuclear cells, collagen deposition, and vascularization, and activating ERK signal pathway. Conclusion: The Rg3-loaded hydrogel shows the best treatment efficacy of perianal ulcer and may be a candidate for perianal ulcer treatment.
Kim, Hyun Jung;Lee, Young-Ju;Back, Seon-Ok;Cho, Shin-Hyeong;Lee, Hee-Il;Lee, Myoung-Ro
Parasites, Hosts and Diseases
/
v.60
no.5
/
pp.309-315
/
2022
Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic and recurrent illness of the gastrointestinal tract. Treatment of IBD traditionally involves the use of aminosalicylic acid and steroids, while these drugs has been associated with untoward effects and refractoriness. The absence of effective treatment regimen against IBD has led to the exploration of new targets. Parasites are promising as an alternative therapy for IBD. Recent studies have highlighted the use of parasite-derived substances, such as excretory secretory products, extracellular vesicles (EVs), and exosomes, for the treatment of IBD. In this report, we examined whether EVs secreted by Giardia lamblia could prevent colitis in a mouse model. G. lamblia EVs (GlEVs) were prepared from in vitro cultures of Giardia trophozoites. Clinical signs, microscopic colon tissue inflammation, and cytokine expression levels were detected to assess the effect of GlEV treatment on dextran sulfate sodium (DSS)-induced experimental murine colitis. The administration of GlEVs prior to DSS challenge reduced the expression levels of pro-inflammatory cytokines, including tumor necrosis factor alpha, interleukin 1 beta, and interferon gamma. Our results indicate that GlEV can exert preventive effects and possess therapeutic properties against DSS-induced colitis.
Kamidi, Rahul;HaeYong, Kweon;Hun-bok, Kim;Ji Hae, Lee
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
/
v.45
no.2
/
pp.99-107
/
2022
Silkworm pupal extracts (SPE) were prepared in different solvents (water, 30%, 50%, 70%, and 100% ethanol) and their anti-inflammatory effects were evaluated in the RAW264.7 cell line. The SPE composition was initially evaluated by determining the protein content and performing Fourier transform infrared (FTIR) analysis. The protein content of the different SPE ranged from 6.75-130.93 mg/g of extract. FTIR analysis exhibited distinguishable absorption peaks among the extracts and indicated the presence of lipids, proteins, carbohydrates, and nucleic acid moieties. The levels of released nitric oxide (NO) and interleukin-6 (IL-6) expression in lipopolysaccharide (LPS)-induced RAW264.7 cells were only attenuated by 100% ethanolic SPE to 19.44% and 16.77%, respectively. The other solvent extracts were ineffective. Hence, further studies were conducted with 100% ethanolic SPE from three distinct stages of male and female silkworm pupae belonging to four silkworm varieties (Baegokjam; B, GoldenSilk; G, Juhwangjam; J, and YeonNokjam; Y). The best reduction in NO release and interleukin-1β (IL-1β) expression levels was achieved by the SPE of early female pupae belonging to the Baegokjam variety (32.72%) and those of early female pupae belonging to the Baegokjam and GoldenSilk (59.93%) varieties, respectively. The best reduction in IL-6 expression by 49.70% was achieved by SPE from female pupae of the mid-pupal stage belonging to the Baegokjam variety.
Objectives : Jema-sunghyangjungkisan (JSGS, Jima Xingxiang Zhengqi san) and yeoldahanso-tang (YDHST, Reduo hanshao decoction) are traditional herbal formulas which commonly used to prevent and treat stroke in traditional korean medicine. However, JSGS and YDHST extracts have not been previously reported to have anti-inflammatory effects. Therefore, We measured the anti-inflammatory effects of JSGS and YDHST extracts on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated murine macrophage cell line, RAW 264.7 cells. Methods : To investigate the anti-inflammatory activities of JSGS and YDHST extracts, tumor necrosis factor-alpha ($TNF-{\alpha}$), interleukin (IL)-6, nitric oxide (NO) and prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) were examined in RAW 264.7 cells with LPS of $1{\mu}g/m{\ell}$. Results : JSGS and YDHST extracts did not have any cytotoxicity in RAW 264.7 cells. $TNF-{\alpha}$ concentration decreased 49.67% at $500{\mu}g/m{\ell}$ by JSGS but, YDHST has no statistically significant effect at all concentration. IL-6 accumulation on JSGS and YDHST extracts in LPS-stimulated RAW 264.7 cells reduced 22.03% and 41.44% at $500{\mu}g/m{\ell}$ respectively. In addition, JSGS has no inhibitory effects on NO accumulation and YDHST reduced 10.08% at $500{\mu}g/m{\ell}$. Moreover, JSGS and YDHST treatment does-dependently reduced the $PGE_2$ production. In particular, YDHST ($500{\mu}g/m{\ell}$) extract was more effective compared with $10ng/m{\ell}$ of indomethacin which is the $PGE_2$ positive control. Conclusions : Our results suggest that treatment of JSGS and YDHST extracts decreased the LPS-stimulated inflammation. Therefore, in the present study, we demonstrated that JSGS and YDHS may be used as a potential anti-inflammatory therapeutic agent.
Despite the various medications used in clinics, the efforts to develop more effective treatments for depression continue to increase in the past decades mainly because of the treatment-resistant population, and the testing of several hypotheses- and target-based treatments. Undesirable side effects and unresponsiveness to current medications fuel the drive to solve this top global health problem. In this study, we focused on neuroinflammatory response-mediated depression which represents a cluster of depression etiology both in animal models and humans. Several meta-analyses reported that proinflammatory cytokines such as interleukin 6 (IL-6) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were increased in major depressive disorder patients. Inflammatory mediators implicated in depression include type-I interferon and inflammasome pathways. To elucidate the molecular mechanisms of neuroinflammatory cascades underlying the pathophysiology of depression, we introduced hycanthone, an antischistosomal drug, to check whether it can counteract depressive-like behaviors in vivo and normalize the inflammation-induced changes in vitro. Lipopolysaccharide (LPS) treatment increased proinflammatory cytokine expression in the murine microglial cells as well as the stimulation of type I interferon-related pathways that are directly or indirectly regulated by Janus kinase-signal transducer and activator of transcription (JAK-STAT) activation. Hycanthone treatment attenuated those changes possibly by inhibiting the JAK-STAT pathway and inflammasome activation. Hycanthone also ameliorated depressive-like behaviors by LPS. Taken together, we suggest that the inhibitory action of hycanthone against the interferon pathway leading to attenuation of depressive-like behaviors can be a novel therapeutic mechanism for treating depression.
Moonkyung, Kang;Ayoung, Song;Jiyoung, Kim;Se Hun, Kang;Sang-Jin, Lee;Yeon-Soo, Kim
BMB Reports
/
v.55
no.12
/
pp.615-620
/
2022
The murine leukemia virus-based semi-retroviral replicating vectors (MuLV-based sRRV) had been developed to improve safety and transgene capacity for cancer gene therapy. However, despite the apparent advantages of the sRRV, improvements in the in vivo transduction efficiency are still required to deliver therapeutic genes efficiently for clinical use. In this study, we established a gibbon ape leukemia virus (GaLV) envelope-pseudotyped semi-replication-competent retrovirus vector system (spRRV) which is composed of two transcomplementing replication-defective retroviral vectors termed MuLV-Gag-Pol and GaLV-Env. We found that the spRRV shows considerable improvement in efficiencies of gene transfer and spreading in both human glioblastoma cells and pre-established human glioblastoma mouse model compared with an sRRV system. When treated with ganciclovir after intratumoral injection of each vector system into pre-established U-87 MG glioblastomas, the group of mice injected with spRRV expressing the herpes simplex virus type 1-thymidine kinase (HSV1-tk) gene showed a survival rate of 100% for more than 150 days, but all control groups of mice (HSV1-tk/PBS-treated and GFP/GCV-treated groups) died within 45 days after tumor injection. In conclusion, these findings sug-gest that intratumoral delivery of the HSV1-tk gene by the spRRV system is worthy of development in clinical trials for the treatment of malignant solid tumors.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.