수입되는 중국산 완성형 배지를 대체하고, 수출에 적합한 표고 완성형 배지를 개발하고자 본 연구를 수행한 결과 참나무톱밥+미송톱밥+파옥쇄(40:40:20, v/v) 혼합배지인 T13에서 pH 5.3으로 대조구와 비슷하였으며 C/N율은 82로 대조구 52 대비 높게 나타났다. 배지조성별 균사 생장을 조사한 결과 영양원으로 파옥쇄 혼합 시 균사 생장이 빨라지는 것을 확인할 수 있었으며, 대조구 대비 균사 생장이 빠르고 밀도가 높은 3가지 처리를 1차 선발하였다. 1차로 선발된 3가지 처리를 본 배지에 접종하고 배양특성을 조사한 결과 T12, T13, T18 3처리 모두 대조구 대비 배양기간이 단축되었고, 그 중 T13에서 대조구 대비 '농진고'는 12일, '참아람'은 10일 배양기간이 단축되었으며 특히 2품종 모두 갈변 소요일수가 크게 단축되었다. 1차 선발한 3처리를 재배생육한 결과 '농진고'는 T13에서 대조구 대비 갓이 크고 두꺼웠으며, 대도 길고 굵어 개체중이 높게 나타났다. '참아람' 품종에서도 비슷한 경향을 나타냈으나 대 직경은 대조구 대비 가는 형태를 나타내었다. 1주기부터 5주기까지의 배지조성에 따른 혼합배지별 수량은 파옥쇄가 영양원으로 혼합된 T12, T13, T18 배지조성에서 대조구 대비 모두 수량이 증가하였으며, 그 중 T13에서 대조구 대비 '농진고'는 5.9%, '참아람' 12.6% 증수되었다. 이러한 연구 결과를 바탕으로 참나무톱밥+미송톱밥+파옥쇄(40:40:20, v/v) 혼합배지를 표고 완성형 배지의 적합 배지로 최종 선발하였다.
참당귀 세포(Angelica gigas H4)를 현탁배양하여 면역 증강성 다당을 생산하기 위한 최적배지 설계 및 생산조건 최적화 연구를 수행하였다. 우선 세포의 성장에 가장 좋은 배지로서 Schenk and Hildebrandt(SH) 배지를 선택하여 배양한 결과 $25^{\circ}C$, 암배양조건에서 각각 15.8g DCW/l와 0.85 g/l의 세포 및 다당을 얻을 수 있었다. 한편 다당 생산용 배지의 개발을 위하여 여러 가지 식물세포배양용 배지 중에서 다당 생산능이 가장 높은 배지로서 Gamborg B5 배지를 선정하였으며 B5 배지를 변형하여 면역증강성 다당생산을 위한 최적배지(PPM)를 개발하였다. 그리고 최적배지를 이용한 당귀 세포증식과 다당 생산을 위한 최적 pH는 6.0-6.5, 배양온도는 $20^{\circ}C$, 그리 고 광조건보다는 암조건이 좋은 것으로 밝혀졌다. 상기 최적조건에서의 최대 세포증식과 다당생산은 각각 14.8 g/l, 1.5 g/l 이었다.
본 실험의 목적은 생물반응기를 이용한 현삼 종묘의 기내증식과 기내순화에 관여하는 적정 배지조건을 검토하여 추후 종묘의 건전한 생육과 안정적 생산에 활용할 수 있는 기초자료를 얻고자 하였으며 얻어진 결과는 다음과 같다. 1. 생물반응기에서 4주간 배양한 신초의 발근과 생장은 1X MS 액체배지에서 양호하였으나 6주간 배양한 신초는 1/10 MS 배지에서 좋았다 2. MS 고체배지에서의 잎 전개율은 생물반응기에서 6주간 배양한 신초가 4주간 배양한 신초보다 높았다. 3. 잎이 전개된 신초의 수와 신초당 잎의 수는 1X MS 고체배지에서 많았으나 유리화도 1/2X MS 고체 배지에서 보다 많이 발생하였다. 4. 전반적으로 보아 신초의 지상부 생육은 MS 기본배지에서 양호하였으나 지하부 생육은 암모니아 태 질소를 1/4로 줄인 배지에서 좋았다. 5. 암모니아태 질소를 1/4로 줄이고 아가농도를 1.2%로 조정한 배지에서 신초의 생육이 좋았으나 유리화가 많이 발생하였다. 6. 신초의 생육과 순화는 1X MS배지에 1.6% 아가농도가 좋았으나 1/2X MS에 1.2%의 아가를 첨가한 경우보다 유리화가 많이 나타났기 때문에 신초의 순화는 1/2 MS 기본배지에 아가농도를 1.2%로 한 배지가 가장 적합한 것으로 생각되었다.
The MRS medium is widely used as an optimized medium for the growth of Lactobacillus spp. and also used for the growth of Leuconostoc spp. Leuconostoc mesenteroides shows quite different physicochemical properties compared to Lactobacilli spp. and it is one of the major strain of kimchi fermenting microorganisms with its usefulness in our traditional foods and availability in biotechnology in the future, specifically tailor-made medium is necessary for the growth of Leuconostoc mesenteroides. Sequential experimental designs (Plackett-Burman, fractional factorial, steepest ascent, central composite design and response surface methodology) were introduced to optimize and improve the Leuconostoc medium. Fifteen medium ingredients were investigated and fructose, sodium acetate and ammonium citrate were determined to give a critical and positive effect for cell-growth. The yield of biomass using the optimal medium was improved more than that of the MRS medium and the result of fed-batch culture showed the capability of the improvement in cell mass similar to the E.coli system.
구성을 확인한 결과, 무기질의 종류와 배양기간에 따라 생성된 지방질 중 비극성지질과 극성지질의 함량비는 변하며 일반적으로 무기질을 복합으로 사용하는 경우보다 단독으로 사용하는 경우가 비극성지질의 함량이 높았다. 그리고 비극성 지질의 조성은 트리글리세리드 유리지방산 및 유리스테롤이 주성분이며 무기질을 단독으로 사용한 경우가 복합으로 사용한 때 보다 트리글리세리드의 함량이 높으며 일반적으로 배양 초기 보다 말기기 트리글리세리드의 양이 감소되었다. 균체중 총 지방질, 비극성지질 및 극성지질의 주요 지방산은 올레산, 팔미트산, 리놀레산으로 이들 지방산의 함량은 전체 지방산의 약 90%를 차지하며 배지의 무기질 조성에 따라 이들의 함량은 약간씩 달라지는 경향이었다.
We investigated factors affecting primary cultures of Pacific abalone Haliotis discus hannai ovary-dissociated cells to identify general aspects of their early-phase culture. Ninety-seven cell populations derived from 30 individuals were cultured in different media with varying compositions of medium supplements, and initial attachment, subculture, and survival for ${\geq}10$ weeks were assessed according to medium composition and individual. We also examined the time required for subculture and the rate of cell death according to both culturing period and passage number within 10 weeks. A lack of fetal bovine serum (FBS) and hemolymph significantly inhibited the growth of cultured cells, while we detected no significant effect of medium composition on initial cell attachment. Through data reallocation, with the omission of data from cell populations cultured in FBS-free and hemolymph-free media, we showed that growth inhibition was also affected by individual differences among the abalones used. During the culture, we observed four different types of cell morphology. Moreover, considerable time was required for subculture-18.4 and 19.5 days for first and second subcultures, respectively-and cell death did not occur within 30 days or for passage 0. Our results will provide valuable information for developing universal cell culturing guidelines in abalone species and suggest the feasibility of culturing abalone ovary-dissociated cells.
은행나무( Ginkgo bilaha 1.)의 잎으로부터 flavon noids 화합물틀을 Amberlite XAD-7으로 흡착시 키 는 최적 조건에 대한 연구를 수행하였다. 흡착제의 투입량, 수용액의 pH, 수용액의 조성 등의 흡착 조 건을 달리 하면서 flavonoids 화합물들의 흡착 경향 을 조사한 결과 20% 의 에탄올이 첨가된 pH 5.0의 수용액에 XAD-7이 15g/L의 양으로 투입된 경우 가장 선택적인 흡착이 이루어졌다. 이 경우 유기용 매 추출에 비해 약 98% 이상의 flavonoids 화합물 이 XAD-7에 흡착되었으며 selectivity도 약 50% 이상 증가된 85%를 나타내었다. 잎 내에 존재하는 여러 가지 화합물들 중 극성인 물질들은 수용액 내 에 용해되어 분리가 이루어졌고 flavonoids 화합물 에 비해 비극성인 지용성 물질들과 polyphen이류 등 은 흡착제가 투입되면 hydrophobic attraction에 의해 aggregation을 이루면서 석출이 되었다. 이로 인해 flavonoids 화합물들만이 흡착제로 이통하게 되 었다. 이와 같은 흡착 공청은 기존의 유기용매 추출 법에 비해 공정에 소요되는 경비와 시간을 크게 감 소시켜 새로운 분리 방법의 지표를 제시할 수 있을 것으로 기대된다.
교반배양시 배지에 첨가되는 에탄올의 농도가 증가할수록 $Cel^-$ mutant의 발생율이 증가하므로 $1.5\%$ 에탄올이 첨가된 배지의 경우 500 rpm보다 높은 교반속도를 유지해야 효과적으로 $Cel^-$ mutant의 발생이 억제되고 BC 생산량을 증가시킬 수 있다. 교반 배양과 같은 강한 shear stress의 배양환경 하에서는 진탕배양의 경우와 달리 $1.0\%$ 에탄올을 분할공급하더라도 BC 생산의 효율성을 높일 수 없었다. Phosphate ion이 첨가된 배지보다 첨가되지 않은 배지에서 BC 생산량이 더 높았다. 배지조성 중 아세트산의 농도를 $1.0\%$로 증가시키면 균체의 건조중량은 변화가 없었으나 BC 생산량이 감소되었다. 배양액의 pH 제어는 BC의 생산에는 영향을 미치지 않았으나 균체의 성장과 WSPS의 생산을 향상시켰다.
Rhizopus japonicus had the highest chitosan productivity compared with the chitosan productivity among Rhizopus sp. strains. To increase the productivity of microbial chitosan from Rhizopus faponicus, production medium and incubation conditions were optimized. The composition of the medium and the incubation conditions were as follows : starch 2%, yeast extract 2.5%, KH2PO4 0.05%, MgSO4 0.01%, FeSO4 0.002%, MnSO4 0.002%, ZnSO4 0.002%, CaC12 0.002%, PH 5.5, incubation temperature medium compared with chitosan productivity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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