알콜증류 폐액에 빵효모를 배양하는 중에 포도당, 암모늄 및 인산을 자동 첨가하여 균체량을 효율적으로 증가시킴으로써 폐액의 재이용성을 향상시키고자 하였다. 포도당은 DO를 제어파라미터로 하는 제어방법을 사용하여 자동 첨가함으로서 그 농도를 300 mg/L 이하로 유지하였다. 암모늄은 pH-stat 방법을 사용하여 N $H_4$OH로서 자동 첨가함으로서 12.6~17.4mM의 낮은 농도범위로 유지하였다. 인산의 경우에는 분석방법으로써 ascorbic acid법을 채택한 자동화 FIA sysetm을 제작하여 사용하였다. 이 system으로 배양 19.4 시간 후부터 배양액을 자동분석하고 제어한 결과 배양액의 P $O_4$-P 농도를 23.3~43.4 mg/L 의 낮은 농도범위로 유지할 수 있었다. 세가지 영양성분을 자동첨가하면서 배양한 결과 증식의 정체없이 균체량을 33.0배 더 증가시킬 수 있었다. 비증식속도는 0.19 $hr^{-l}$였다.
Most of the biosynthetic pathways for secondary metabolites are influenced by carbon metabolism and supply of cytosolic NADPH. We engineered carbon distribution to the pentose phosphate pathway (PPP) and redesigned the host to produce high levels of NADPH and primary intermediates from the PPP. The main enzymes producing NADPH in the PPP, glucose 6-phosphate dehydrogenase (encoded by zwf1 and zwf2) and 6-phosphogluconate dehydrogenase (encoded by zwf3), were overexpressed with opc encoding a positive allosteric effector essential for Zwf activity in various combinations in Streptomyces lividans TK24. Most S. lividans transformants showed better cell growth and higher concentration of cytosolic NADPH than those of the control, and S. lividans TK24/pWHM3-Z23O2 containing zwf2+zwf3+opc2 showed the highest NADPH concentration but poor sporulation in R2YE medium. S. lividans TK24/pWHM3-Z23O2 in minimal medium showed the maximum growth (6.2 mg/ml) at day 4. Thereafter, a gradual decrease of biomass and a sharp increase of cytosolic NADPH and sedoheptulose 7-phosphate between days 2 and 4 and between days 1 and 3, respectively, were observed. Moreover, S. lividans TK24/pWHM3-Z23O2 produced 0.9 times less actinorhodin but 1.8 times more undecylprodigiosin than the control. These results suggested that the increased NADPH concentration and various intermediates from the PPP specifically triggered undecylprodigiosin biosynthesis that required many precursors and NADPH-dependent reduction reaction. This study is the first report on bespoke metabolic engineering of PPP routes especially suitable for producing secondary metabolites that need diverse primary precursors and NADPH, which is useful information for metabolic engineering in Streptomyces.
Singh, Jeet Bahadur;Vyas, Deepak;Kumar, Har Darshan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제7권2호
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pp.127-131
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1997
Alkaline phosphatase (APase) was found to be inducible in Anabaena sp. strain CA Growth was less than control in presence of most amino acids except glycine and serine, but most amino acids enhanced APase activity. Highest APase activity was recorded in tyrosine supplemented culture followed by hydroxyproline, cystein, valine and glutamic acid. Threonine supplemented material showed lowest APase level (1.8 nmol/mg protein/min). Lactose, glucose, sodium pyruvate and succinate stimulated growth but not APase activity. APase activity was high in the presence of sucrose, mellibiose, mannitol, arabinose, maltose and sorbose, even though the growth in these supplements was less than in control. Organic phosphate sources supported good growth of the organism. Best growth occurred in presence of inorganic phosphate, adenosine diphosphate, fructose 1,6-diphosphate or ribulose 1,5-diphosphate, followed by other phosphorus sources tested. APase activity in presence of any of the organic phosphate sources was 3 to 5 fold low as compared to phosphate limited culture. Also, there was no APase activity in cultures grown on inorganic phosphate. These data indicate that most amino acids and a few carbohydrates (sucrose, mellibiose, arabinose and sorbose) are suitable for APase production. Lactose, glucose, pyruvate or succinate may be used as a carbon source during photoheterotrophic growth of the cyanobacterium. Glycine and serine are preferred nitrogen sources for its growth. Phosphate repressible APase activity has been found in Anabaena sp. strain CA.
From July 1985 to December 1986, 28 variables of phycal-chemical factors, bacteria and heterotrophic activity were investigated 17 times at 3 stations in the estuary of Naktong River and the influences of environmental factors to bacterial population and heterotrophic activity were analyzed through multiple regression. The results of multiple regression were as follows. At station 1, total bacteria and heterotrophic bacteria(Z-25) could explain 57% of the variation of maximum uptake velocity for glucose and 54% of turnover time for glucose was explained by total coliform bacteria and MBOD, Sixty four percent of the variation of Kt+SN was accounted for salinity, MBOD-N and inorganic phosphate. Turnover rate for acetate was also accounted for the change of MBOD-P by 56%. At station 2 maximum uptake velocity for glucose depends on MBOD-N by 81%; turnover time on bacteria by 50%; Kt+Sn on avilable nutrient by 61%. More than 50% of maximum uptake velocity and turnover time for glucose were influenced by bacteria and that of Kt+Sn by the change of nutrient in the surface water of station 3. In the bottom water of station 3, the change of maximumuptake velocity, turnover time and Kt+Sn for glucose was controlled by total bacteria and available nutrient, bacteria, the change of nutrient salts respectively. On the whole, more than 50% of maximum uptake velocity and turnover time for glucose could be due to the change in the number of bacetria and the value of Kt+Sn was affected by the change of nutrient salts. Turnover rate for acetate was controlled by available phosphate at station 1 and by bacteria at station 2 and 3, which showed a distinct difference between the environmental factors which govern the rate of glucose and acetate uptake in the Naktong esturine ecosystem. And bacterial communities were controlled by available nutrients at station 1, by nutrient salts and salinity at station 2 and in the surface water of station 3 and by salinity in the bottom water of station 3.
The growth rate of yeast population (Saccharomyces uvarum) cultivated in the Knopp's modified medium (plus various carbon sources) appeared the highest value when the Knopp's minimal medium was treated to 1.5% with disaccharide such as maltose and sucrose. Also the treatment of lactose and raffinose resulted in polulation growth as to the population size in case of maltose and sucrose. However, the gorwth of yeast was not occurred at all when a polysaccharide, such as inulin, was added as carbon source. The growth from of yeast population in Knopp's modified medium are characterized by the fact that log phase continued 100hrs after inoculation and that stationary state phase appeared in general 250hrs after inoculation. Applying the various carbon sources to respiration substrate for yeast cell, the respiration rate of yeast showed the highest value in treatment of maltose and followed in order of raffinose, lactose, glucose, and sucrose. Determined the amount of poly-phosphate and turn over pathway of poly-phosphate according to culture phase of yeast, it is revealed that the yeast synthesized 3 types of poly phosphate (poly-P A,B, and C) and postulated that turn over pathway of poly-phosphate as follows ; Inorganic phosphate is converted into each kind of polyphosphates, and then one part of poly-P-C is converted into poly-P-B, the rest poly-p-C and poly-P-B are converted into poly-P-A. The synthesized poly-phosphate is considered to have a role as energy pool utilizing to synthesis of cellular organic materials. Of the 13 carbon sources used in this experiment, the useful carbon sources for biosynthesis of poly-phosphate and cellular organic materials are confirmed as disaccharide (maltose and sucrose) as well as glucose. Protein synthesis in yeast cell showed the two peaks on 6th and 8th day after inoculation ; nucleic acid on 2nd day (48hrs), carbohydrates on 2nd day (48hrs), and phospholipid on 2nd and 8th day after inoculation, respectively.
Rescently we are interested in the biosurfactant. Biosurfactant have a low toxcity and easily biodegradable compound. Pseudomonas sp. 13 was isolated from soil. This microorganism produced biosurfactant that consists of glycolipid R-1 and R-2. A time course study of fermentation indicated that the appearance of glycolipid in the fermentation broth the commencement of the stationary phase with the respect to biomass. The effect of variation of the media components such as amount of glucose, nitrogen, phosphate and metal ions has been investigated. The following values found to be optimum for biosurfactant production (glucose, $20g/{\ell}$; carbon to nitrogen ratio, 40; carbon to phosphate, 18; $FeSO_4{\cdot}7H_2O\;20mg/{\ell}$).
Enterobacter intermedium은 호기조건에서 glucose를 gluconic acid로 이를 다시 2-ketogluconic acid로 산화시킨다. 리터당 22.5 g의 glucose와 8.3 g gluconic acld, 그리고 40 g 인광석을 포함한 배지에서 배양 10일 후 $1028mg\;L^{-1}$ 의 수용성 인산이 얻어졌으며, 이 배양액을 인산생물비료로 사용하였다. E. intermedium에 의해 인광석이 용해된 인산생물비료를 평가하기 위하여 다섯 가지 처리구가 사용되었다 (PBF1/3, PBF2/3, PBF3/3, BP 그리고 MF). MF와 BP처리구에서는 인산비료가 10a당 $5.9kg\;P_2O_5$ 기준으로 시용되었으나, PBF1/3, PBF2/3 그리고 PBF3/3처리구는 10a당 $5.9kg\;P_2O_5$ 에 해당하는 인산량의 1/3, 2/3, 3/3에 해당하는 인광석 용해 배양액이 각각 시용되었다. 상추 정식 후 20일, 35일 그리고 50일 후에 성장요소, biomass, 토양효소 활성 그리고 토양 화학성이 분석되었다. 근권의 dehydrogenase 활성과 유효인산농도가 인산생물비료 (PBF1/3, PBF2/3 그리고 PBF3/3)처리구에서 BP 및 MF처리구에 비해 일반적으로 높았다. 토양 미생물 blomass는 생육초기에 BP 및 MF처리구에 비해 PBF3/3처리구에서 매우 높았다. 모든 결과를 고려할 때, PBF2/3처리구에서는 MF처리구와 비교하여 생체중이 23% 증가하고 인산흡수가 50% 증가하였다. 즉, 인산생물비료는 무기인산비료의 대용으로 사용 가능성을 나타내었다.
본 연구에서는 식품 원료로 이용이 허가된 Acetobacter pasteurianus SRCM101388을 사용하여 바이오매스 고농도배양을 위한 최적화 연구를 실시하였다. SRCM101388의 최적 배양온도와 pH 조건은 각각 28℃와 pH 6.0으로 나타났다. 배지조건을 확립하기 위하여 Plackett-Burman design을 실시한 결과, glucose, sucrose, yeast extract가 biomass 증가에 가장 높은 효과를 보였다. Glucose, sucrose, yeast extract의 최적농도를 알아보기 위하여 central composite design을 실시하였으며, 최적농도는 glucose 10.73 g/L, sucrose 3.98 g/L, yeast extract 18.73 g/L로 나타났다. Plackett-Burman design에서 biomass 증가에 영향이 있는 기타 미량원소에 대한 최적농도를 조사한 결과, ammonium sulfate 1 g/L, magnesium sulfate 0.5 g/L, sodium phosphate monobasic 2 g/L, sodium phosphate dibasic 2 g/L로 나타났으며, 최종 최적화된 배지 제조 시 pH는 6.10으로 최적 pH 조건과도 일치하였다. 최적화된 배지 3.5 L를 함유한 5 L jar fermenter에서의 배양결과, SRCM101388은 DO가 낮은 rpm에서 DO 감소가 더 빠르게 나타났다. 최대 생균수는 150 rpm, 0.5 vvm, pH 6.0, 28℃ 조건에서 18시간 배양 시 2.53± 0.12×109 CFU/mL로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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