• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제3권1호
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• pp.12-18
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• 1993

Pseudomonas aeruginosa strain B5 with antagonistic activity against Phytophthora capsici and Magnaporthe grisea, was isolated from pepper-growing soil. From the culture of P. aeruginosa strain B5 grown on King's medium B, antibiotic substances were purified using XAD-2 column chromatography. XAD-2 eluates inhibited not only the mycelial growth of P. capsid and M. grisea, but also the development of Phytophthora blight on pepper plants. The crude antibiotic substances were further purified by using silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, thin layer chromatography on silica gel plates, and high performance liquid chromatography. Silica gel column chromatogrphy gave good separation of the four antibiotic substances. The pure antibiotics P1, P2, and P3 finally purified by preparative HPLC inhibited the mycelial growth of P. capsici, at concentrations from 7 to 10 $\mu g/ml$. Only P1 and P2 had antifungal activity against M. grisea at 8 $\mu g/ml$. P1 and P3 were highly inhibitory to the mycelial growth of Botryosphaeria dothidea and Botrytis cinerea at relatively low concentrations. However, the three antibiotics had no antifungal activity against Rhizoctonia solani. The chemical structures of these antibiotics are being identified.

• Applied Biological Chemistry
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• 제30권1호
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• pp.88-94
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• 1987

인삼 성분중 생리적 활성을 가지고 있는 oligopeptide를 검출하고 분리하기 위하여 물 추출액을 ultra-filtration 한 후 gel filtration, ion-exchange chromatography 및 thin layer chromatography 등을 행하였다. 인삼 물 추출액으로부터 고분자 물질을 제거한 ultra-filtrate는 epinephrine에 의해 유도된 fat cell의 lipolysis를 저해하는 antilipolytic activity를 보유하고 있었으며 Sephadex G-25 gel filtration에 의해 3개 fraction으로 나뉘어졌다. 이중 첫번째 fraction(S-FI)만이 peptide 성분을 함유하고 있었으며 saponin 및 당도 검출되었다. S-FI fraction은 $Dowex\;50{\times}2\;ion-exchange\;chromatography$에 의하여 6개의 $fraction(P-F1{\sim}P-F6)$으로 분리되었고 TLC검정 결과 P-F2 fraction이 peptide fraction으로 antilipolytic를 보유하고 있었으며 TLC로 분리한 6개 spot는 각각 가수 분해한 전후의 TLC pattern을 비교해 본 결과 모두 oligopeptide임이 밝혀졌다. S-FI fraction에 존재한 saponine과 당은 P-F1 fraction 에서 모두 용출되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제28권3호
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• pp.600-603
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• 1996

두릅나무(Aralia elata $S_{EEMANN}$) 껍질의 MeOH추출물이 세균과 호모, 곰팡이 등에 대한 항미생물 활성을 보여 solvent fractionation, Silica gel adsorption chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, silica gel partition chromatography, HPLC 등의 기법으로 활성물질을 순차 정제하여 얻어진 활성물질을 1% acetic acid-MeOH (60 : 40, v/v)용매계의 HPLC에 의해 분리하였다. 분리된 성분($t_r$ 17.1 min)의 활성본체를 구명하기 위하여 $MS,\;^1H-NMR\;and\;^13C-NMR$. 등을 이용하여 기기분석한 결과, trans-3,4-dihydroxycinnamic acid로 동정되었다. 3,4-dihydroxycinnamic acid가 두릅에서 항미생물 활성물질로서 분리, 동정된 것은 처음으로 생각된다.

• 미생물학회지
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• 제32권2호
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• pp.132-138
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• 1994

Neurospora crass에서 L-ascorbic acid 합성 효소는 mitochondria에 위치하며 배지에 D- glucono-${\gamma}$-lactone과 L-gluno-${\gamma}$-lactone을 첨가하였을 때 각각의 기질에 대한 효소 활성도가 증가함을 볼 수 있었다. 이 효소의 순수 분리에는 ammonium sulfate 분획, DEAE-Sepharose CL-6B 에 의한 이온 교환 크로마토그래피, Sephacryk S-200에 의한 gel filtrarion 크로마토그래피, Reactive yellow 3-agarose dye column 크로마토그래피 등의 방법들이 이용되었다. 그 결과 2.1%의 수율에 specific activity가 239.6배 증가되었다. Sephacryl S-200 gel filtration을 통해 본 이 효소의 분자량은 약 150,000 dalton 이었다. 그리고 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis를 실시하였을 때는 분자량이 약 75,000 dalton이었으므로 이 효소는 동일한 단위체로 구성된 이합체로 생각되었다. 이 효소의 최적 반은 pH는 9.0으로 나타났으며 D-glucono-${\gamma}$-lactone을 기질로 하였을때의 $K_m$값은 0.073이었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제21권2호
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• pp.112-118
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• 1978

소의 갑상선에서 추출한 Xanthine oxidase를 disc gel eleectrophoresis로서 정제도(Purity)를 측정하여 Xanthine oxidase 이외의 다른 불순 단백질이 나타나지 않을 때까지 정제하였다. 그 정제 과정은 Pancreatin digestion, butanol 추출, ammonium sulfate 단백질 침전, calcium phosphate gel-cellulose column chromatography, gel filtration, preparative Sephadex G-25 column electrophoresis와 Preparative polyacrylamide gel electrophoresis 등을 포함하고 있다. 이러한 과정을 통하여 갑상선 Xanthine oxidase는 1,000배 정도 정제되었다. 그러나 효소의 비활성도(Specific activity)는 우유에서 추출한 이 효소에 상응하는 정도로 정제된 효소의 비활성도와 비교 되었을 때 지극히 낮았다. 갑상선 Xanthine oxidase도 효소 반응에 필요한 기질과 electron acceptor의 특수성(Specificity)이 어느 특수한 한 기질에 한정되지 않았음을 보였고 Kinetic 성질도 우유에서 추출된 Xanthine oxidase와 비교하였을 때 가장 일반적인 Xanthine oxidase 기질에 대한 Michaelis 상수(Km)가 약간의 예외도 있었으나 상당히 비슷하였다.

• KSBB Journal
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• 제13권2호
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• pp.125-132
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• 1998

Protein affinity membrane was prepared via the coating of chitosan gel on the porous flat polysulfone membrane surface, followed by the immobilization f the reactive dye (Cibacron Blue 3GA) to the chitonsan gel. The maximum protein binding capacity of affinity membrane was about 70${\mu}g/cm^2$ determined by the batch adsorption experiments of human serum albumin (HSA). Using module of this membrane, the characteristics of protein chromatography were investigated through the experiments of elution and frontal chromatography of HSA. This membrane module promises as a chromatography column, since it represented a lower pressure drop and a greater reproducibility. The protein separation ratio was significantly influenced by the flow rate of mobile phase and the injection quantity of HSA. The dynamic protein binding capacity of module decreased from the equilibrium binding capacity with increasing flow rate and approached the value of 15 - 20 ${\mu}g/cm^2$ for flow rates above 6 mL/min.

• 미생물학회지
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• 제23권4호
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• pp.271-281
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• 1985

Bacillus thuringiensis var. thuringiensis produces an extracellular insecticidal thermostable .betha.-exotoxin, which was purified through microfiltering, barium precipitation, charcoal absorption chromatography, ion exchange column chromatography and gel filtration. The exotoxin in each purification step was detedted by thin layer chromatography, high pressure liquid chromatography and paper electrophoresis with efficient results. The exotoxin productivity on time course was checked by spectrophotometric absorbance at 258nm with the result that the exotoxin was initially produced in 6 hour culture and reached maximum value in 36 hour culture. Anti-bacterial effect test on Micrococcus flava was applied as toxicity test. The results showed that frowth inhibition of M. flava could be shown in plate assay of cell free filtered supernatant, alkaline eluant from charcoal and purified exotosin obtained from gel filtration column chromatography on Sephadex G-10 appeared to be 740. Heat stability of the exotoxin was confirmed through autoclaving twice.

• 미생물학회지
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• 제23권4호
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• pp.241-247
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• 1985

Pseudomonas fluorescens에 의해 세포외에 생산된 furfural의 furoic acid로의 생물학적 전환을 촉진시키는 ninhydrin 반응에 양성인 대사물 (Ninhydrin positive Substance=NPS)을 ion exchange chromatography와 gel permeation chromatography 그리고 cellulose columm chromatography에 의하여 분리, 정제하였다. IR spectrophotometry와 $^H$-NMR spectrometry 그리고 $^{13}C-NMR$ spectrometry에 의해 이 NPS는 -$^H$ and $-NH_2$와 그리고 $-CH_2-OH$group을 갖는 유기물질로 추정된다.

• KSBB Journal
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• 제17권4호
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• pp.365-369
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• 2002

수용성 형태로 존재하는 융합 페리틴을 정제함에 있어서 실리카 분말을 이용한 전처리 공정은 전체 정제 공정효율 증가에 기여하였다. 전처리 공정을 통해 정제된 융합 페리틴의 순도를 높이기 위해 젤 여과 크로마토그래피를 통해 보다 정제된 응합 페리틴을 얻을 수 있었다. 이렇게 정제된 융합 페리틴의 철분결합능력을 분석해본결과 320 moles $F_{H}+F_{L}$ mole로 활성이 우수함을 알 수 있었으며, 분자량 분석을 통해 융합페리틴(40 k dalton)은 trimer와 monomer형태로 존재함을 확인할 수 있었다

• 약학회지
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• 제25권4호
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• pp.137-143
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• 1981

In order to confirm the exact antipyretic component in the earthworm, etherial extract of American earthworm(Red Worm) was fractionated into five fractions by using silica gel column chromatography and thin layer chromatography. The fraction including free fatty acids was found to possess artipyretic response and standard arachidonic acid showed marked antipyretic response on typhoid vaccinated rabbits. Arachidonic acid was identified from the free fatty acid fraction of the earthworm by using gas liquid chromatography. Thus it was considered that the antipyretic activity of the free fatty acid may be due to the presence of arachidonic acid. Lipid-free earthworm powder was extracted with phosphate buffer (pH, 8.0, 0.1M) and all the proteins was salted out by ammonium sulfate. The crude precipitate was dialyzed and the impure proteins were eliminated at pH 5.4 and 4.6. The remaining protein solution was fractionated with various concentrations of acetone. The acetone fractions were identified by using S.D.S. polyacrylamide gel electrophoresis and disc gel electrophoresis. The precipitate at 85% acetone concentration and the remaining proteins in the supernatant did not exhibit the antipyretic activity.