Studies on Xanthine Oxidase from Bovine Thyroid Glands -[Part 1] Purification and Substrate Specificity-

소의 갑상선에 있는 크산친 옥시다아제에 관한 연구 -[제1보] 효소의 정제와 기질특이성-

Xanthine oxidase from bovine thyroid glands was purified to apparent homogeneity when judged by analytical disc gel electrophoresis. The purification procedures include pancreatin digestion, butanol extraction, ammonium sulfate precipitation, calcium phosphate gel adsorption, ultrafiltration, calcium phosphate gel-cellulose column chromatography, gel filtration, preparative Sephadex G-25 column electrophoresis, and preparative polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was enriched 1,000-fold. However, its specific activity was markedly low as compared with highly purified milk enzyme. Thyroidal xanthine oxidase exhibited a low specificity for substrates and electron acceptors. The kinetic properties of thyroid xanthine oxidase were found to be similar to those of the milk enzyme on the basis of Michaelis constants for common substrates.

소의 갑상선에서 추출한 Xanthine oxidase를 disc gel eleectrophoresis로서 정제도(Purity)를 측정하여 Xanthine oxidase 이외의 다른 불순 단백질이 나타나지 않을 때까지 정제하였다. 그 정제 과정은 Pancreatin digestion, butanol 추출, ammonium sulfate 단백질 침전, calcium phosphate gel-cellulose column chromatography, gel filtration, preparative Sephadex G-25 column electrophoresis와 Preparative polyacrylamide gel electrophoresis 등을 포함하고 있다. 이러한 과정을 통하여 갑상선 Xanthine oxidase는 1,000배 정도 정제되었다. 그러나 효소의 비활성도(Specific activity)는 우유에서 추출한 이 효소에 상응하는 정도로 정제된 효소의 비활성도와 비교 되었을 때 지극히 낮았다. 갑상선 Xanthine oxidase도 효소 반응에 필요한 기질과 electron acceptor의 특수성(Specificity)이 어느 특수한 한 기질에 한정되지 않았음을 보였고 Kinetic 성질도 우유에서 추출된 Xanthine oxidase와 비교하였을 때 가장 일반적인 Xanthine oxidase 기질에 대한 Michaelis 상수(Km)가 약간의 예외도 있었으나 상당히 비슷하였다.