In order to study the biological function of gapdh gene in yak, and prove whether the gapdh gene was a useful intra-reference gene that can be given an important role in molecular biology research of yak, the cDNA sequence encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from yak was cloned by the RT-PCR method using gene specific PCR primers. The sequence results indicated that the cloned cDNA fragment (1,008 bp) contained a 1,002 bp open reading frame, encoding 333 amino acids (AAs) with a molecular mass of 35.753 kDa. The deduced amino acids sequence showed a high level of sequence identity to Bos Taurus (99.70%), Xenopus laevis (94.29%), Homo sapiens (97.01%), Mus musculus (97.90%) and Sus scrofa (98.20%). The expression of yak's gapdh gene in heart, spleen, kidney and brain tissues was also detected; the results showed that the gapdh gene was expressed in all these tissues. Further analysis of yak GAPDH amino acid sequence implied that it contained a complete glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase active site (ASCTTNCL) which ranged from 148 to 155 amino acid residues. It also contained two conserved domains, a NAD binding domain in its N-terminal and a complete catalytic domain of sugar transport in its C-terminal. The phylogenetic analysis showed that yak and Bos taurus were the closest species. The prediction of secondary structures indicated that GAPDH of yak had a similar secondary structure to other isolated GAPDH. The results of this study suggested that the gapdh gene of yak was similar to other species and could be used as the intra-reference to analyze the expression of other genes in yak.
The hydrolysis products formed from birchwood xylan by the action of an alkaline xylanase (CX-III) from alkalophilic Cephaloxporium sp. RYM-202 were xylobiose and xylooligosaccharides polymerized with more than 4 sugar molecules. This enzyme was not active on xylobiose but readily attacked xylotriose accumulating xylobiose as a major product. The predominant end-products from xylotetraose by CX-III were xylobiose and xylotriose. These results indicate that the enzyme is typically endo-type xylanase possessing transglycosidase activity. Chemical modification of CX-III with N-bromosuccinimide revealed that two tryptophan residues per molecule of CX-III were essential for its catalytic activity on xylan. On the other hand, iodoacetamide and diethylpyrocarbonate did not influence the activity of the enzyme, suggesting that cysteine and histidine residues are not involved in the active site of this alkaline xylanase.
Jeong, Seon-Ju;Heo, Kyeong;Park, Ji Yeong;Lee, Kang Wook;Park, Jae-Yong;Joo, Sang Hoon;Kim, Jeong Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.25
no.1
/
pp.89-97
/
2015
Bacillus subtilis HK176 with high fibrinolytic activity was isolated from cheonggukjang, a Korean fermented soyfood. A gene, aprE176, encoding the major fibrinolytic enzyme was cloned from B. subtilis HK176 and overexpressed in E. coli BL21(DE3) using plasmid pET26b(+). The specific activity of purified AprE176 was 216.8 ± 5.4 plasmin unit/mg protein and the optimum pH and temperature were pH 8.0 and 40℃, respectively. Error-prone PCR was performed for aprE176, and the PCR products were introduced into E. coli BL21(DE3) after ligation with pET26b(+). Mutants showing enhanced fibrinolytic activities were screened first using skim-milk plates and then fibrin plates. Among the mutants, M179 showed the highest activity on a fibrin plate and it had one amino acid substitution (A176T). The specific activity of M179 was 2.2-fold higher than that of the wild-type enzyme, but the catalytic efficiency (kcat/Km) of M179 was not different from the wild-type enzyme owing to reduced substrate affinity. Interestingly, M179 showed increased thermostability. M179 retained 36% of activity after 5 h at 45℃, whereas AprE176 retained only 11%. Molecular modeling analysis suggested that the 176th residue of M179, threonine, was located near the cation-binding site compared with the wild type. This probably caused tight binding of M179 with Ca2+, whichincreased the thermostability of M179.
Glutathione S-transferase is known to play a crucial role in detoxification in many cases. To develop a herbicide detection biosensor, we in this study attempted to immobilize glutathione S-transferase enzyme on solid supports, polystyrene and agarose, and Na-alginate. These matrixes were attractive materials for the construction of biosensors and might also have utility for the production of immobilized enzyme bioreactors. We also compared the activities of glutathione-S-transferase immobilized OsGSTF3 and free OsGSTF3. The specific activity of the free enzyme in solution was 3.3 higher than the immobilized enzyme. These results suggest that 50% of the enzyme was bound with the catalytic site in polystyrene-alkylamine bead and immobilized enzymes showed 80% remaining activity until 3 times reuse.
Park, Nam-Cook;Kim, Jae-Seung;Seo, Seong-Gyu;Oh, Young-Yenl
Applied Chemistry for Engineering
/
v.4
no.1
/
pp.162-170
/
1993
Vapor-phase ETBE(ethyl tert-butyl ether) synthesis from TBA(tert-butyl alcohol) and ethanol was carried over solid acid catalysts such as heteropoly acids and proton type zeolites. Heteropoly acids were more active than proton type zeolites and $H_4SiW_{12}O_{40}$ catalyst showed about the same activity as Amberlyst-15 ion exchange resin catalyst used as an industrial catalyst in ETBE synthesis. The catalytic activity of transition metal exchanged heteropoly acids was greatly enhanced, because new acid site was generated with hydrogen reduction. This effect of hydrogen reduction was related to the reduction characteristics of catalysts and the order of reducibility was $Ag^+$>$Cu^{2+}$>$Fe^{2+}$.
Seo, Seong-Kon;Liu, Xi-Wen;Lee, Hyun-Jeong;Kim, Hye-Kyeong;Kim, Mee-Ree;Sok, Dai-Eun
Archives of Pharmacal Research
/
v.22
no.5
/
pp.464-473
/
1999
Regulation of phosphcholine-hydrolyzing phosphatase (phosphocholine-phosphatase) activity, purified from bovine brain, was examined under physiological conditions. Various endogenous phosphomonoesters, which were utilized as substrate, inhibited the phosphocoline-phosphatase activity competitively (Ki 5.5-$82.0 {\mu}M$); among phosphomonoesters tested, there was a similar order of capability between the binding affinity of substrate and the inhibitory potency. In addition, phosphate ions also inhibited the phosphatase activity competitively with a Ki value of approximately $16{\mu}M$. Although leucine or theophylline inhibited the phosphatase activity at pH 9.0, their inhibitory action decreased greatly at pH 7.4. The pH-Km and pH-Vm profiles indicate that ionizable amino acids are involved in substrate binding as well as catalysis, alluding that the phosphatase activity may be highly dependent on the intracellular pH. Amino acid modification study supports the existence of tyrosine, arginine or lysine residue in the active site, and the participation of tyrosine residue in the catalytic action may e suggested positively for the susceptibility to the action of tetranitromethane or HOl-generator. Separately, the oxidative inactivation of phosphocholine-phosphatase activity was investigated. Of oxidants tested, HOONO, HOCl, HOl and $ascorbate/Cu^{2+}$ system were effective to inactivate the phosphatase activity. Noteworthy, a remarkable inativation was accomplished by $30{\mu}M$ HOCl in combination with 1 mM Kl. Inaddition, $Cu^{2+}(3{\mu}M) $in combination with ascorbate at concentrations as low as 0.1-0.3 mM reduced the phosphatase activity to a great extent. From these results, it is proposed that the phosphocholine-phosphatase activity may be regulated endogenously and susceptible to the various oxidant system in vivo.
Kim, Oh Cheol;Kim, Sang-Yoon;Hwang, Dong Hyeon;Oh, Doo-Byoung;Kang, Hyun Ah;Kwon, Ohsuk
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.23
no.3
/
pp.304-312
/
2013
The thermotolerant methylotrophic yeast Hansenula polymorpha is attracting interest as a potential strain for the production of recombinant proteins and biofuels. However, only limited numbers of genome engineering tools are currently available for H. polymorpha. In the present study, we identified the HpPOL3 gene encoding the catalytic subunit of DNA polymerase ${\delta}$ of H. polymorpha and mutated the sequence encoding conserved amino acid residues that are important for its proofreading 3'${\rightarrow}$5' exonuclease activity. The resulting $HpPOL3^*$ gene encoding the error-prone proofreading-deficient DNA polymerase ${\delta}$ was cloned under a methanol oxidase promoter to construct the mutator plasmid pHIF8, which also contains additional elements for site-specific chromosomal integration, selection, and excision. In a H. polymorpha mutator strain chromosomally integrated with pHIF8, a $URA3^-$ mutant resistant to 5-fluoroorotic acid was generated at a 50-fold higher frequency than in the wild-type strain, due to the dominant negative expression of $HpPOL3^*$. Moreover, after obtaining the desired mutant, the mutator allele was readily removed from the chromosome by homologous recombination to avoid the uncontrolled accumulation of additional mutations. Our mutator system, which depends on the accumulation of random mutations that are incorporated during DNA replication, will be useful to generate strains with mutant phenotypes, especially those related to unknown or multiple genes on the chromosome.
Photosynthesis uses light energy to drive the oxidation of water at an oxygen-evolving catalytic site within photosystem II (PSII). Chlorophyll binding by the photosystem II subunit S protein, PsbS, was found to be necessary for energy-dependent quenching (qE), the major energy-dependent component of non-photochemical quenching (NPQ) in Arabidopsis thaliana. It is proposed that PsbS acts as a trigger of the conformational change that leads to the establishment of nonphotochemical quenching. However, the exact structure and function of PsbS in PSII are still unknown. Here, we clone and express the recombinant PsbS gene from Arabidopsis thaliana in E. coli and purify the resulting homogeneous protein. We used various biochemical and biophysical techniques to elucidate PsbS structure and function, including circular dichroism (CD), fluorescence, and DSC. The protein shows optimal stability at $4^{\circ}C$ and pH 7.5. The CD spectra of PsbS show that the conformational changes of the protein were strongly dependent on pH conditions. The CD curve for PsbS at pH 10.5 curve had the deepest negative peak and the peak of PsbS at pH 4.5 was the least negative. The fluorescence emission spectrum of the purified PsbS protein was also measured, and the ${\lambda}_{max}$ was found to be at 328 nm. PsbS revealed some structural changes under varying temperature and oxygen gas condition.
Transactions of the Korean hydrogen and new energy society
/
v.23
no.3
/
pp.236-242
/
2012
This study has been carried out the experiment for the possibility of biogas reforming using waste heat. The source of this waste heat is the exhaust gas from a small-sized gas engine generator. For recovering the waste heat, Two-stage heat exchanger is manufactured. The two-stage heat exchanger is composed of a heat exchanger for the exhaust gas and a heat exchanger for the water. This two-stage heat exchanger is used for reforming the biogas by means of on-site hydrogen production at the small-sized gas engine generator. The two-stage heat exchanger is coupled with the biogas reformer which is a kind of catalytic reformer. To confirm a heat recovery efficiency of the two-stage heat exchanger, temperature differences of inlet and outlet locations are measured. Also, the variations of syngas concentrations with various biogas flow rates are investigated. As a result using manufactured two-stage heat exchanger, the biogas can be reformed from waste heat recovery. This experiment suggests that the exhaust gas heat exchanger is available for reforming the biogas.
Sphingomonas chungbukensis DJ77 has the ability to produce large quantities of an extracellular polysaccharide that can be used as a gelling agent in the food and pharmaceutical industries. We identified, cloned and expressed the UDP-glucose dehydrogenase gene of S. chungbukensis DJ77, and characterized the resulting protein. The purified UDP-glucose dehydrogenase (UGDH), which catalyzes the reversible conversion of UDP-glucose to UDPglucuronic acid, formed a homodimer and the mass of the monomer was estimated to be 46 kDa. Kinetic analysis at the optimal pH of 8.5 indicated that the $K_m\;and\;V_{max}$ for UDP-glucose were 0.18 mM and 1.59 mM/min/mg, respectively. Inhibition assays showed that UDP-glucuronic acid strongly inhibits UGDH. Site-directed mutagenesis was performed on Gly9, Gly12 Thr127, Cys264, and Lys267. Substitutions of Cys264 with Ala and of Lys267 with Asp resulted in complete loss of enzymatic activity, suggesting that Cys264 and Lys267 are essential for the catalytic activity of UGDH.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.