To develop low endotoxic and multi-immunogenic outer membrane vesicles (OMVs), a deletion mutant of the msbB gene in Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium) was used as a source of low endotoxic OMV, and an expression vector of the canine parvovirus (CPV) VP2 epitope fused to the bacterial OmpA protein was constructed and transformed into the Salmonella ${\Delta}msbB$ mutant. In a lethality test, BALB/c mice injected intraperitoneally with the Salmonella ${\Delta}msbB$ mutant survived for 7 days, whereas mice injected intraperitoneally with the wild type survived for 3 days. Moreover, all mice inoculated orally with the ${\Delta}msbB$ mutant survived for 30 days, but 80% of mice inoculated orally with the wild type survived. The OmpA::CPV VP2 epitope fusion protein was expressed successfully and associated with the outer membrane and OMV fractions from the mutant S. Typhimurium transformed with the fusion protein-expressing vector. In immunogenicity tests, sera obtained from the mice immunized with either the Salmonella msbB mutant or its OMVs containing the OmpA::CPV VP2 epitope showed bactericidal activities against wild-type S. Typhimurium and contained specific antibodies to the CPV VP2 epitope. In the hemagglutination inhibition (HI) assay as a measurement of CPV-neutralizing activity in the immune sera, there was an 8-fold increase of HI titer in the OMV-immunized group compared with the control. These results suggested that the CPV-neutralizing antibody response was raised by immunization with OMV containing the OmpA::CPV VP2 epitope, as well as the protective immune response against S. Typhimurium in BALB/c mice.
Immunoprophylatic effect of IgY against B. bronchispetica was proven with 100% preventive rate in mice administrated with IgY with antibody titer 1:640~1:2,560. Intramuscular administration was more efficient than oral administration. This phenomenon was also observed in the therapeutic effects of IgY after challenge with B. bronchseptica in mice. In the field trials with the egg yolk antibodies from hens immunized with combined antigens with B. bronchiseptica and parvovirus, curing rates in dogs with severe clnical signs such as bloody diarrhea were 81.6% and 86.7% by intramuscular or subcutaneous administration of IgY, respectively. Safety of the antibodies in dogs was proven without any side effects such as vomiting, edema, fever, etc. by adminstration of double doses for 7 days. These results indicated that the egg yolk antibodies could be used as effective prevention and treatment of alimentary and respiratory diseases in dogs.
Rabid raccoon dogs (Nyctereutes procyonoides koreensis) have been responsible for animal rabies in South Korea since the 1990s. A recombinant rabies vaccine strain, designated as ERAGS, was constructed for use as a bait vaccine. Therefore, new means of differentiating ERAGS from other rabies virus (RABV) strains will be required in biological manufacturing and diagnostic service centers. In this study, we designed two specific primer sets for differentiation between ERAGS and other RABVs based on mutation in the RABV glycoprotein gene. Polymerase chain reaction analysis of the glycoprotein gene revealed two DNA bands of 383 bp and 583 bp in the ERAGS strain but a single DNA band of 383 bp in the field strains. The detection limits of multiplex reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) were 80 and 8 FAID50/reaction for the ERAGS and Evelyn-Rokitnicki-Abelseth strains, respectively. No cross-reactions were detected in the non-RABV reference viruses, including canine distemper virus, parvovirus, canine adenovirus type 1 and 2, and parainfluenza virus. The results of multiplex RT-PCR were 100% consistent with those of the fluorescent antibody test. Therefore, one-step multiplex RT-PCR is likely useful for differentiation between RABVs with and those without mutation at position 333 of the RABV glycoprotein gene.
The disease syndrome characterized by the acute vomiting and diarrhea with high mortality had been greatly epidemic in Kyungbuk West Area since March 1990 and it was followed serologically for the classification of the agent. The agent present in feces of dogs associated with this syndrome had characteristic feature in agglutinating pig red blood cells that was specifically inhibited by anti-CPV reference dog serum. This also showed the serological identity with the reference CPV antigen in Hemagglutinating inhibition test. The result obtained were summarized as follows : 1. During 5 years(March. 1990∼September. 1994), 1,470 dogs were investigated on the actual condition of CPV infections. The Infection rate of CPV from dogs was 62.5% and mortality rate was 59.8%. 2. Among 24 fecal samples collected from the dogs with enteric disease, all showed the hemagglutinating activity to porcine erythrocyte ranging from 40 to 5,120 of HA titers. 3. Among 12 sera samples collected from the dogs with enteric disease, all showed the serological identity with the reference CPV antigen from 5 to 5,120 of HI titers. 4. Bacteriologic examination of fecal specimens resulted in the isolation of pathogeric bacteria such as Staphylococcus sp, Streptococcus sp, Escherichia coli and Bacillus. Cultures for salmonella sp and Clostridium remaind negative. 5. The prevalence and identification of internal parasites were determined by fecal examination using the floatation methods. From 20 fecal samples 12(60.0%) were isolated and their species were Toxacara canis, Toxascaris leonina, and coccidium.
We evaluated the patterns of serology and fecal viral shedding for any differences by hemagglutination inhibition (HI) and real-time PCR on Korean CPV-2 isolates (CPV-2a-I, CPV-2a-V and CPV-2b). We successfully detected fecal viral shedding from samples extracted 2-3 d.p.i., regardless of the onset of clinical signs. In addition, the pattern of viral shedding differed depending on the CPV-2 isolates used for inoculation. We also observed differences in the serological pattern that was also depended on the CPV-2 isolates inoculated. The onset and amount of fecal viral shedding were not correlated with the level of antibody titers in this study. Our study is a valuable resource for understanding the different pathobiology of the CPV-2 isolates and the correlation between the patterns of serum antibody titer and fecal viral shedding.
An eight-month-old, outdoor, intact male English Pointer dog weighing 23.5 kg presented to the hospital with signs of hematochezia, soft stools, and weight-loss. There were no remarkable findings on physical examination, complete blood count, serum biochemistry, electrolyte and gas analysis, and radiography. The serologic and Polymerase Chain Reaction (PCR) tests for canine parvovirus were negative. A fecal smear examination showed rod-shaped, sporeforming bacteria. Additionally, a fecal flotation test showed ova of Ancylostoma spp. The size of ova was 60 × 40 ㎛, and it was identified as Ancylostoma caninum using light microscopy. The PCR test indicated a Clostridial perfringens infection and the presence of C. perfringens alpha toxin. The diagnosis given was C. perfringens enterotoxicosis with ancylostomiasis. Treatment included antibiotics (metronidazole, trimethoprim-sulfamethoxazole) and anthelmintics (afoxolaner, milbemycin oxime). After two weeks, the clostridial infection resolved, but ancylostomiasis persisted for six weeks. The anthelmintic was changed to Drontalâ plus (praziquantel/pyrantel pamoate/febantel). After four weeks, there were no remarkable findings in the fecal samples, but the patient still presented with watery stools and hematochezia. Survey of abdominal ultrasound had performed, and a target-like sign with multiple rings was seen in the cecocolic region. The patient was diagnosed with A. caninum-induced cecocolic intussusception from the history and clinical signs. After a surgery, he recovered fully. This is the first clinical case report of Ancylostoma caninum parasitizing from the small intestine and causing an intussusception in the large intestine.
The aim of this study was to determine if vaccines containing CPV-2 or CPV-2b provided protection against challenge with a recent Korean CPV-2a isolate. Twenty mongrel pups aged 9 weeks old were used. The commercial CPV-2 or CPV-2b vaccines were administered to each of the 8 pups thrice every 3 weeks, respectively. Two weeks after the last vaccination, all pups were challenged with CPV-2a (VR00174 strain) $1{\times}10^6\;TCID_{50}$. Clinical signs, fecal excretion of challenged CPV, and serological response of pups were observed for 2 weeks after challenge. All vaccinated pups did not display any clinical signs of disease after challenge with Korean CPV-2a isolate, whereas all non-vaccinated pups exhibited mucoid or hemorrhagic diarrhea, vomiting and anorexia. In all non-vaccinated pups, the virus could be detected in feces from 4 days after challenge, whereas in vaccinated pups, no evidence of viral excretion could be detected. Two of 4 non-vaccinated pups died 6 days after the challenge. This study showed that the two commercial CPV-2 and CPV-2b vaccines were effective in preventing infection and/or disease caused by the Korean CPV-2a isolate.
We evaluated the PCR assay and two commercialized PCR kits for the detection of mycoplasma in veterinary via live vaccines. The PCR assay could specifically detect all the tested Mycoplasma spp. and Acholeplasma spp., whereas two commercialized PCR kits did not. Also, the specificity of the PCR assay showed that 4 reference strains and 7 field isolates belonging to avian mycoplasma species could be all detected. The sensitivity of the PCR assay was determined using pure cultured Mycoplasma spp. and Acholeplasma spp. with a range of 1 to 100 colony forming units/ml in 9 CFR Mycoplasma broth. To test the availability of the PCR assay for veterinary live viral vaccines, A. laidlawii was artificially inoculated into the swine transmissible gastroenteritis-rota virus combined vaccine and canine parvovirus vaccine, respectively and the sensitivity of the PCR assay was similar with the result of cultured samples. In this study, the PCR assays could be used as rapid and sensitive methods for the detection of mycoplasma in veterinary live viral vaccines.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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