건시 저장 중 부패미생물을 분리동정하고, 유독성 곰팡이의 Aflatoxin 생성 여부를 검사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) 건시 저장 초기에는 곰팡이가, 저장기간이 길어짐에 따라 세균의 침해가 많았다. 2) 분리 동정한 부패 미생물의 균수는 Asp. sp.가 가장 많았고, Escherichia sp., Mucor sp., Alternaria sp., Penicillium sp. 순으로 많았다. 3) 분리 균주 중 Aspergillus flavus Group과 Penicillium citrimum Series도 동정된 균에서와 저장건시에서 분리한 형광물질은 TLC 상에서의 Rf 값으로 보아 Aflatoxin B$_1$, G$_1$유사물질로 추정하였다. 4) 유시시료 또는 분리균주에서 분리된 Aflatoxin 유사물질은 U. V. absorption spectra 측정 결과 Asp. flavus Group에서 Aflatoxin B$_1$, Pen. citrinum Series 에서 Aflatoxin G$_1$으로 확인되었다. 이것은 앞으로 계속 더 구명하여야 하겠다.
SeongEui Yoo;WooSoo Jeong;Soo-Hwan Yeo;So-Young Kim
한국식품저장유통학회지
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제30권1호
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pp.28-41
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2023
Non-aflatoxigenic Aspergillus oryzae and aflatoxigenic A. flavus cannot be clearly identified by partial sequencing of the internal transcribed spacer (ITS) and 18S ribosomal ribonucleic acid (18S rRNA) regions. This study aimed to compare the accuracy among three aflatoxin detection methods using ultra-performance liquid chromatography (UPLC), high-performance liquid chromatography (HPLC), and an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit and to select the non-aflatoxigenic Aspergillus sp. isolated from soybean paste. All analytical methods were suitable according to the international standards of Codex Alimentarius FAO-WHO (CODEX) or the Ministry of Food and Drug Safety (MFDS). UPLC exhibited the best of limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ). Based on UPLC, HPLC, and the ELISA kit assay, the P5 and P7 strains isolated from soybean paste had 1,663.49, 1,468.12, and >20 ㎍/kg and 1,470.08, 1,056.73, and >20 ㎍/kg, respectively, detected and re-identified as A. flavus. In contrast, the P3 and P4 strains (A. oryzae), which were detected below the MFDS standards in all assays, were confirmed as non-aflatoxigenic fungi. Among the methods evaluated for quantitative analysis of aflatoxin, UPLC and HPLC are superior in terms of accuracy, and the ELISA kit rapidly detects low concentrations of aflatoxin. Furthermore, this study demonstrates that any Aspergillus sp. isolated for use as a fermentation starter should be analyzed for potential aflatoxin production using UPLC and HPLC for accurate quantitative analysis or ELISA for the rapid detection of low-level concentrations of aflatoxin.
Aflatoxin B1 is known as the most potent mycotoxin produced by several fungi. It has been demonstrated to be not only carcinogenic but teratogenic and mutagenic as well in humans. To prevent or inactivate aflatoxins, several chemical of physical methods were tested for ammoniation, using insecticides as an wxample, but they were unsuitable for food products. On the contrary, biological control by antagonistic microorgani는 is and ideal method. In order to control aflatoxin B1 biologically, the antagonists #07, #63, #75, #74, and #61 were separated from various samples by using the antagonistic activity test. Among them, culture filtrate part A (non heat-treated) of #63 and #74 on aflatoxin B1 produced by Aspergillus fkavus were shown to be 95% and 75%, respectively. Based on the morphological characteristics, #63 was deduced as an Azospirillum sp.
Aflatoxin contamination in rice has been documented in a number of studies, and has a high incidence in Asian countries, and as such, there has been a growing interest in alternative biocontrol strategies to address this issue. In this study, 147 strains of yeasts and yeast-like fungi were screened for their potential to produce volatile organic compounds (VOCs) active against Aspergillus flavus strains that produce aflatoxin B1 (AFB1). Five strains within four different genera showed greater than 50% growth inhibition of some strains of A. flavus. These were Anthracocystis sp. DMKU-PAL124, Aureobasidium sp. DMKU-PAL120, Aureobasidium sp. DMKU-PAL144, Rhodotorula sp. DMKU-PAL99, and Solicococcus keelungensis DMKU-PAL84. VOCs produced by these microorganisms ranged from 4 to 14 compounds and included alcohols, alkenes, aromatics, esters and furans. The major VOCs produced by the closely related Aureobasidium strains were found to bedistinct. Moreover, 2-phenylethanol was the most abundant compound generated by Aureobasidium sp. DMKU-PAL120, while methyl benzeneacetate was the major compound emitted from Aureobasidium sp. DMKU-PAL144. On the other hand, 2-methyl-1-butanol and 3-methyl-1-butanol were significant compounds produced by the other three genera. These antagonists apparently inhibited A. flavus sporulation and mycelial development. Additionally, the reduction of the AFB1 in the fungal-contaminated rice grains was observed after co-incubation with these VOC-producing strains and ranged from 37.7 ± 8.3% to 60.3 ± 3.4%. Our findings suggest that these same microorganisms are promising biological control agents for use against aflatoxin-producing fungi in rice and other agricultural products.
Ochratoxin A와 aflatoxin은 곰팡이 독소 생산 균주가 자연 발효되는 식품에 오염되거나 발표식품의 종균을 분별없이 선택했을 때 검출 될 수 있다. 본 연구에서는 다양한 배양 환경이 ochratoxin A와 aflatoxin의 생산에 주는 영향에 대해 연구하였다. Aspergillus usamii KFRI 999와 A. awamori KFRI 983의 배양 온도, 배양 배지, 배양 시간을 달리하여 ochratoxin A생산 정도를 분석하였다. 또한 초기 pH, 온도, 배양 시간, 배양 배지를 다르게 하였을 때 A. flavus KACC 41403와 A. oryzae KACC 46471가 생산하는 aflatoxin의 양을 평가하였다. Ochratoxin A와 aflatoxin의 양은 HPLC로 분석하였다. 연구 결과, 곰팡이 독소는 배양 온도에 큰 영향을 받는 것으로 나타났다. A. oryzae KACC 46471는 aflatoxin을 생산하지 않았다. 곰팡이 독소를 생산하는 균주는 모두 $30^{\circ}C$에서 가장 높은 독소 생산량을 보였다. A. awamori KFRI 983은 PDA 배지에서 가장 적은 ochratoxin A 생산량을 보였다. 본 연구 결과는 다양한 식품의 ochratoxin A와 aflatoxin 저감화에 유용하게 활용 될 수 있다.
일반적으로 메주나 된장 등의 한국 전통발효식품에는 Aspergillus aryzae나 A. nigar 등과 같은 곰팡이독소를 생성하지 않는 균이 주로 서식하는 것으로 알려져 있다. 그러나 때로는 A. flavus나 A. paraciticus와 같은 유해곰팡이가 오염되어 발효나 저장 중에 aflatoxin이 축적될 수 도 있다. 따라서 이들 전통발효식품에서의 aflatoxin 생성균의 검색이 이들 식품의 안전성 확보를 위해 매우 중요하다고 생각된다. 본 연구에서는 면역분석기법을 이용하여 서부경남 시판메주 및 된장에서 aflatoxin 생성균을 검색하였다. 시료로는 서부경남 9개 지역으로부터 메주 10개와 된장 20개를 수집하였고, 수집된 시료로부터 메주에서는 24개 그리고 된장에서는 22개의 Aspergillus속 균을 분리하였다. 분리균들은 SLS 배지에 접종하여 $25^{\circ}C$에서 15일간 배양한 다음, 배양액을 ethyl acetate로 추출하고, DC-ELISA법으로 배양물중의 AFB$_1$을 측정하였다. 그 결과 메주로부터 분리된 균주 중에는 6균주가, 된장에서 분리된 균주에는 2균주가 AFB$_1$을 생산하는 것으로 확인되었다. 메주에서 분리된 6균주의 AFB1 생성량은 평균 54.6$\pm$38.7ng/ml 이었고, 된장에서 분리한 2균주는 평균 11.1 $\pm$ 8.6 ng/ml 의 AFB$_1$을 생산하였다. 그 중 분리균 No. M-5-4는 98.26 ng/ml의 AFB$_1$을 생산하여 가장 높은 생성능을 보였다. 아울러 TLC에 의해 aflatoxin생성능을 재확인 한 결과 DC-ELISA의 결과와 유사하였다. 이상의 결과로 미루어 보아 식품의 안전성과 한국에서의 전통발효식품산업에의 HACCP 시스템 도입을 위해 발효식품에서의 유해곰팡이독소 생성균의 검색은 필요하다고 사료되는 바이다.
Investigation on modification of aflatoxin structures by Pseudomonads was attempted as a biological detoxifiying process of mycotoxins. Firstly, when any variation of aflatoxin yield of Aspergillus parasiticus in a mixed culture with Pseudomonas aeruginosa was examined, there was no noticible effect by growth of Pseudomonads on aflatoxin yield of Asperillus sp. Secondly, when capacity of Pseudomonas aeruginosa utilizing aflatoxin as a carbon source for its growth was tested, there was some indication that aflatoxin might be used for growth of Pseudomonads. It was also noticed that the residual aflatoxin showed different migrating pattern compared with that of the intact aflatoxin by thin layer chromatography. Thirdly, the cell-free extract prepared from Pseudomonas aeruginosa grown in a glucose minimal medium supplemented with aflatoxin and the intact aflatoxins were incubated in the presence of $Mg^{++}$. After a certain length of incubation period, the reaction mixtures were applied on TLC plates. As a result, aflatoxins in the reaction mixture migrated differently as the control did. Such results may indicate that some changes of aflatoxin properties were induced by Pseudomonads.
한국독성학회 2001년도 International Symposium on Dietary and Medicinal Antimutgens and Anticarcinogens
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pp.13-14
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2001
Doenjang (Korean fermented soybean paste) is one of important fermented foods in Korea. Doenjang has been traditionally manufactured from meju which is fermented rectangular shape of crushed cooked soybeans. The main microorganisms involved for meju fermentation are Bacillus subtilis and molds such as Rizopus sp., Mucor sp. and Aspergillus sp. We have already reported that Doenjang is free from mycotoxin, especially, aflatoxin B$_1$contamination during the manufacturing process of the Deonjang.(omitted)
Aspergillus flavus를 포함한 수종의 곰팡이들은 사람과 가축에 독성이 있는 저분자의 2차대사산물을 생산하며 이를 mycotoxin이라고 부른다. 우리나라 여름과 같은 적당한 온도와 습도는 유해곰팡이의 성장이 가능하여 쌀, 보리, 옥수수, 메주, 된장, 간장 및 고추장과 같은 전통식품 및 그 재료와 같은 대부분의 유기물질에서 mycotoxin이 생산될 수 있다. 지금까지 여러 사람들은 Aspergillus속, Penicillium속, Fusarium속 곰팡이를 전통식품과 그 재료로부터 분리하였으며, 그 중에서 여러 mycotoxin을 생산하는 곰팡이를 검색하였다. 또한 상기와 비슷한 시료에서 aflatoxin, ochratoxin, deoxynivalenol(DON) 및 zearalenone 등의 mycotoxin오염을 확인하기도 했다. 그러나 이러한 자료들은 실험조건과 방법에서 서로 상이하며 일관성이 결여되어있고, 특히 대부분의 실험들이 일과성으로 끝났기 때문에 곰팡이독소를 중심으로 하여 전통식품을 객관적으로 평가하기 위해서는 보다 지속적이고 합리적인 실험방법과 재료가 요구된다. 이러한 목적을 위해서는 새로운 첨단기술을 응용하여 mycotoxin을 보다 간편하고 신속히 분석할 수 있는 방법을 개발해야하며, 또한 보다 지속적인 연구비 투자와 연구시설의 확충으로 연구의 활성화와 기술축적을 위한 노력을 해야할 것이다. 이 같은 합리적인 노력으로 전통식품의 mycotoxin 오염여부를 지속적으로 조사하고, 아울러 우리 전통식품의 안전성을 확보하는 것이 가능하며 그 결과 국제화 시대에 부응하는 보다나은 전통식품의 보존과 개발이 이루어지게 될 것이다.
본 연구는 아플라톡신 생성균의 생육을 억제시킬 수 있는 길항 미생물을 분리하고 그 길항미생물을 이용한 된장 제조시 아플라톡신 제어 효과와 된장의 품질에 미치는 영향을 조사하였다. 아플라톡신 생성균인 Asp. flavus와 Asp. parasiticus에 대해 길항력이 가장 강력한 균을 분리하였으며 그 균은 Bacillus 속의 특성을 보였다. 분리한 길항균과 아플라톡신 생성균을 처리하여 제조한 된장의 아플라톡신 함량은 Asp. flavus을 처리하였을 때 아플라톡신 $B_1$이 27.2 ppb에서 길항균과 함께 처리로 87.5% 감소한 3.4 ppb였으며 Asp. parasiticus을 처리하였을 때 아플라톡신 $B_1$이 30.3 ppb에서 길항균과 함께 처리로 87.8% 감소한 3.7 ppb였다. 길항균과 아플라톡신 생성균을 처리한 된장의 유리지방산, 유리당, 유기산함량은 대조구와 큰 차이 없이 비슷하였다. 유리아미노산 총 함량은 길항균과 아플라톡신 생성균 처리로 다소 낮아지는 경향을 보였으나 큰 영향을 미치지 못하였다. 주로 glutamic acid, aspartic acid, tryptophan이 감소하였다. 된장의 향기성분은 아플라톡신 생성균을 처리하였을때 대조구에 비하여 큰 변화가 없었다. 그러나 길항균 처리로 변향인 2-pentyl furan와 불쾌취인 butanoic acid류가 소멸되거나 감소하고 octadecene 화합물은 생성 되었다. 결국 분리된 길항균은 아플라톡신 생성을 억제시켰으며 된장의 품질에는 그다지 영향을 미치지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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