• 한국미생물·생명공학회지
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• 제32권3호
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• pp.218-223
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• 2004

용균성 야생 점액세균 204균주를 국내 토양으로부터 순수분리하였고, 분리균주의 16S rRNA 부분 염기서열을 결정하였다. Ribosomal Database Project(RDP) II를 이용하여 분리균주 각각의 16S rRNA 염기서열을 분석한 결과 전체 분리균주의 65%를 차지하는 132 균주들이 Myxococcus 속에 속할 것으로 예상되었으며, 29%를 차지하는 59 균주들이 Corallococcus 속, 4 균주가 Archangium 속, 그리고 4 균주가 Stigmatella 속에 속할 것으로 분석되었다. 그리고 나머지 5 균주는 알려진 균주와의 유연관계가 멀어 분류가 확실하지 않았다. 한편, 16S rRNA염기서열의 비교분석은 분리균주의 50%가 16S rRNA부분 염기서열상에 적어도 한 염기 이상의 차이를 지니고 있음을 보여주었다. 하지만 동일한 염기서열을 지니는 것으로 분석된 균주에서도 서로 다른 집락모서리를 형성하는 등 다른 균주로 판명되는 것으로 보아 전체 분리균주는 다양성이 81% 이상인 다양한 균주들인 것으로 사료되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권6호
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• pp.812-822
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• 2014

Metagenomic analysis of the human intestinal microbiota has extended our understanding of the role of these bacteria in improving human intestinal health; however, a number of reports have shown that current total fecal DNA extraction methods and 16S rRNA universal primer sets could affect the species coverage and resolution of these analyses. Here, we improved the extraction method for total DNA from human fecal samples by optimization of the lysis buffer, boiling time (10 min), and bead-beating time (0 min). In addition, we developed a new long-range 16S rRNA universal PCR primer set targeting the V6 to V9 regions with a 580 bp DNA product length. This new 16S rRNA primer set was evaluated by comparison with two previously developed 16S rRNA universal primer sets and showed high species coverage and resolution. The optimized total fecal DNA extraction method and newly designed long-range 16S rRNA universal primer set will be useful for the highly accurate metagenomic analysis of adult and infant intestinal microbiota with minimization of any bias.

• 대한의생명과학회지
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• 제18권3호
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• pp.299-306
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• 2012

Recently, the prevalence of 16S rRNA methylase conferring high-level resistance to aminoglycosides has been increasing in Gram-negative bacilli globally. We determined the prevalence and genotype of these methylase-producing bacteria, and characterized the co-resistance to ${\beta}$-lactam antibiotics and quinolone in Gram-negative clinical isolates collected in 2010 at a hospital in Korea. Among 65 amikacin-resistant isolates screened from 864 Gram-negative bacilli (GNB), 16S rRNA methylase genes were detected from 49 isolates, including Acinetobacter baumannii (43), Klebsiella pneumoniae (2), Proteus mirabilis (2) and Serratia marcescens (1), Empedobacter brevis (1). All of the 16S rRNA methylase genotype was armA and no variant sequences of amplified PCR products for armA were noted. The 16S rRNA methylase producing bacteria showed much higher resistance to aminoglycoside for Enterobacteriaceae and glucose non-fermenting (NF)-GNB and to imipenem for glucose NF-GNB, than the non-producing isolates. All of the 16S rRNA methylase producing Enterobacteriaceae had the extended-spectrum-${\beta}$-lactamase. In addition, two K. pneumoniae concurrently produced both plasmid-mediated AmpC ${\beta}$-lactamase and qnrB gene. All of the amikacin-resistant A. baumannii (43) co-harbored armA 16S rRNA methylase and $bla_{OXA-23}$ carbapenemase. In conclusion, 16S rRNA methylase producing bacteria were very prevalent among GNB in South Korea, and were commonly associated with co-resistance, including carbapenem and quinolone.

• 한국어병학회지
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• 제17권2호
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• pp.91-98
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• 2004

본 연구의 목적은 국내 어류 연쇄구균증 병원체 동정에 있어서 Streptococcus iniae에 대한 구체적인 국내 연구 보고가 없어, 기존에 수행되고 있는 동정방법을 근간으로 16S-23S intergenic spacer region (ISR)의 염기서열을 분석하여 보다 명확한 동정을 실시하고자 하였다. API 20 strep system에 의한 생화학적 성상을 분석해본 결과 정확한 종 동정은 이루어지지 않았지만 기존의 연구에서 보고된 API 20 strep system에 의한 S. iniae의 생화학적 성상과 높은 유사성을 보이는 10균주를 분리할 수 있었다. S. iniae 16S rRNA gene 서열 유래 종 특이적 primer Sin-1 5'-CTAGAGTACACATGTACT(AGCT)AAG-3'와 Sin-2 5'-GGATTTTC CACTCCCATTAC-3'에 의한 PCR-assay 결과 시험균주 10 균주 모두 동일하게 약 300bp의 증폭산물이 관찰되었고, 비 특이적인 반응은 관찰되지 않았다. 시험균주 모두 3개의 16S-23S ISR operon 구조가 관찰되었으나 S. iniae 표준균주 (KCTC 3657)의 경우 단일 구조가 관찰되었다. 16S-23S intergenic spacer region (ISR)의 염기서열을 분석해본 결과 기존에 보고된 S. iniae (Genbank accession number AF 048773)와 96%의 상동성을 보였으며 전체서열에서 상동성을 보이는 근연종이나 근연속은 검색되지 않아 최종적으로 S. iniae로 동정하였다.

• 한국수산과학회지
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• 제36권3호
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• pp.239-246
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• 2003

We have examined the 16S-23S rRNA intergenic spacer region (ISR) of Vibrio vulnificus KCTC 2959. ISRs were amplified by primers complementary to conserved regions of 16S and 23S rRNA genes. ISR amplicons were cloned and sequenced. Analysis of the ISR sequences showed that V. vulnificus KCTC 2959 contains five types of polymorphic ISRs. Size of ISRs ranged from 424 to 741 bp in length and the number of tRNA genes ranged from one to four. The ISRs were designated as ISR-E $(tRNA^{Glu}),\;ISR-IA\;(tRNA^{Ile}-tRNA^{Ala})$, ISR-EKV $(tRNA^{Glu}-tRNA^{Lys}-tRNA^{Val})$, ISR-IAV $(tRNA^{Ile}-tRNA^{Ala}-tRNA^{val})$ and ISR-EKAV $(tRNA^{Glu}-tRNA^{Lys}-tRNA^{Ala}-tRNA^{Val})$ based on their tRNA genes. Multiple alignment of representative sequences from different Vibrio species revealed several domains of high sequence variability. We used the sequences of variable domains to design species-specific primer for detection PCR. Specificity of the primers was examined using genomic DNA prepared from 18 different Vibrio species. The results showed that the PCR using primers designed in this study can be used to detect V. vulnificus from other Vibrio species.

• 한국자연치유학회지
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• 제8권2호
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• pp.71-77
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• 2019

목적: 특허 받은 황토 면 원단의 원적외선 방사율 및 면 원단을 20회까지 세탁을 하였을 때에 어떠한 미생물이 존재하는지를 조사하여 분리 동정하는 것이 목적이었다. 방법: 원적외선 방사능 측정기와 미생물을 영양배지에 배양하여 증식하는 단일 콜로니를 이용하여 16S rRNA법으로 동정하였다. 결과: 황토이불 면의 원적외선의 방사율은 40℃에서 5~20 ㎛에서 0.902(90.2%)이었고, 방사에너지는 3.63 × 10² w/m²로 높게 나타났다. 황토 이불 면 원단에서 2.0 × 10² cells/ml의 생균수가 존재하였고, 그리고 일반 면 원단에서는 생균이 발견되지 않았다. 단일 콜로니로 분리된 B-2 균주의 16S rRNA의 염기서열은 1,419 bases이었고, A-4균주의 염기서열은 1,284 bases이었다. 이 두 균주의 16S rRNA의 염기서열은 Bacillus 속 세균들과 높은 상동성을 보이었다. B-2 균주는 B. aryabhattai EF114313의 16S rRNA 염기서열과 99.0% 그리고 A-4균주는 B. bingmayongensis AKCS01000011의 16S rRNA 염기서열과 99.0%의 높은 상동성이 나타났다. 상기의 결과들을 활용하여 16S rRNA을 이용하여 유연관계를 조사하여 콜로니 균주 B-2를 B. aryabhattai BJ-2 균주로, A-4를 B. bingmayongensis BJ-4 균주로 최종 동정하였다. 결론: 황토 이불 면 원단에서 두 종류의 간균을 발견하였고, 이불 면 원단이 높은 량의 원적외선 및 원적외선 방사에너지가 발산하므로 유용하게 이용될 수 있다고 본다.

• 한국식품과학회지
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• 제35권3호
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• pp.470-474
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• 2003

식중독은 세균에 의한 발병이 대부분이다. 따라서 식품에서 식중독 원인균을 신속하게 탐색하게 식중독으로부터의 되면 피해를 줄일 수 있을 것이다. 고전적인 식중독 원인균 탐색은 증균, 선택적 배지를 이용한 isolation, 생화학적 특징을 활용하는 분석이 있으나 많은 시간이 소요되는 단점을 갖고 있었다. 본 연구는 16S rRNA gene(16S rDNA)로부터 얻은 DNA 염기 서열을 이용 식중독 원인균의 특이적 oligonucleotide probe을 제작 reverse dot blot hybridization과 PCR 방법을 이용하여 고전적인 방법보다 빠른 시간 내에 식품에서 원인균을 탐색 할 수 있었다. 우유를 인공적으로 본 연구에서 사용한 균주로 오염시킨 후 DNA를 추출하여 PCR 증폭산물과 oligonucleotide probe를 hybridization 시킨 결과 oligonucleotide probe를 hybridization 시킨 결과 oligonucleotide probe가 위치한 곳에서 발색 반응이 나타났다. 본 연구에서 본 연구를 통해 DNA microchip으로 활용 짧은 시간 내에 많은 종류의 식중독 원인균을 탐색 할 수 있는 가능성을 확인하였다.

• ALGAE
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• 제27권2호
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• pp.75-82
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• 2012

$Arthrospira$ $platensis$ and $Arthrospira$ $maxima$ are species of cyanobacteria used in health foods, animal feed, food additives, and fine chemicals. This study conducted a comparison of the 16S rRNA gene and $cpcBA$-intergenic spacer ($cpcBA$-IGS) sequences in $Arthrospira$ strains from culture collections around the world. A cluster analysis divided the 10 $Arthrospira$ strains into two main genotypic clusters, designated I and II, where Group I contained $A.$ $platensis$ SAG 86.79, UTEX 2340, $A.$ $maxima$ KCTC AG30054, and SAG 49.88, while Group II contained $A.$ $platensis$ PCC 9108, NIES 39, NIES 46, and SAG 257.80. However, although $A.$ $platensis$ PCC 9223 belonged to Group II-2 based on its $cpcBA$-IGS sequence, this strain also belonged to Group I based on its 16S rRNA gene sequence. Phylogenetic analyses based on the 16S rRNA gene and $cpcBA$-IGS sequences showed no division between $A.$ $platensis$ and $A.$ $maxima$, plus the 16S rRNA gene and $cpcBA$-IGS sequence clusters did not indicate any well-defined geographical distribution, instead overlapping in a rather interesting way. Therefore, the current study supports some previous conclusions based on 16S rRNA gene and $cpcBA$-IGS sequences, which found that $Arthrospira$ taxa are monophyletic. However, when compared with 16S rRNA sequences, $cpcBA$-IGS sequences may be better suited to resolve close relationships and intraspecies variability.

• ALGAE
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• 제17권3호
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• pp.153-159
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• 2002

Partial 16S rRNA gene sequences of seven cyanophycean strains from the National Instiute of Environmental Research of Korea - Microcystis aeruginosa, M. aeruginosa f. aeruginosa, M. ichthyoblade, M. viridis, Anabaena flos-aquae, and Oscillatoria sancta - were analyzed and the phylogenetic relationship of Microcystis among Cyanophyceae were evaluated. Based on sequence analysis results, Microcystis is monophyletic, the clade of which supported 100% bootstrap tress, and distinguished clearly from the other taxa. Therefore, the partial 16S rRNA gene sequences can be a useful and efficient tool for distinguishing Microcystis from other cyanophycean without axenic culture or cloning.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제16권12호
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• pp.1816-1821
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• 2003

Reliable PCR based identification of lactobacilli has been described utilizing the sequence of 16S-23S rRNA intergenic spacer region. Those sequence comparisons showed a high degree of difference in homology among the strains of L. rhamnosus, L. casei, L. acidophilus and L. helveticus whose 16S-23S rRNA intergenic small SR's sizes were 222 bp, 222 bp, 206 bp and 216 bp respectively. The sequence of 16S-23S rRNA intergenic spacer region of L. rhamnosus ATCC 53103 revealed the close relatedness to those of L. casei strains by the homology ranges from 95.4% to 97.2%. 16S-23S rRNA intergenic spacer region nucleotide sequence of L. acidophilus showed some distant relatedness with L. rhamnosus ATCC 53103 with the homology ranges from 40.3% to 41.8% and that with L. helveticus was shown to be 30% of homology, which exists at the most distant phylogenetic relatedness. The identification of species and strain of lactobacilli was possible on the basis of these results. The common sequences among the 17 strains were CTAAGGAA located in the initiating position of the DNA and some discrepancies were found between the same strains based on these results.