Pemicillum chrysogenum의 건전균(PC)과 바이러스감염균(PCV)을 사용하여 cellulase의 존재여부와 그 활성 정도를 알아보기 위해 밀기울에 배양하여 효소액으로 만들어 균의 생장에 따른 배양액의 최적 pH와 최적 배양일 및 Na-CMC 기질액을 이용하여 효소액의 활성에 미치는 최적 pH, 온도, 및 효소농도를 알아보고자 본 실험에 착수하여 다음과 같은 결과를 얻었기에 이에 보고하는 바이다. 1) PC외 PCV균의 생장에 따른 배양액의 최적 pH는 균주 접종전 배지와 작은 pH6.4로 나타났다. 2) 최적 배양일은 최적 pH를 나타낸 배양6일이 가장 높은 활성을 나타냈고, PCV는 PC의 50%의 활성이었다. 3) PC균 배양 효소액이 기질과 반응시 효소활성이 가장 높은 최적 pH는 pH5.0으로 나타났고, PCV 균 배양 효소액에서는 pH 6.0으로 나타났다. 4) PC와 PCV균 배양효소액 모두 기질과 반응시 효소 활성이 가장 높은 최적 온도는 $50^{\circ}C$로나타났다. 이상의 결과에서 cellulase의 활성도는 PC건전균이 PCV감입균보다 높은 활성을 나타낸 것을 알 수 있었다.
표고속(Lentinula)에 속한 종들의 배양적 특성을 규명하고자 국내 미기록종인 L. aciculospora, L. boryana, L. raphanica 3균주와 대조군으로 국내 기록종인 L. edodes 1 균주를 실험에 사용하였다. 대조군인 L. edodes 균주는 ME1 배지에서 91.8 mm/7일로 최대 균사생장을 보였으며 균사배양 최적온도는 $24^{\circ}C$, 최적pH는 6으로 나타났고 최적 탄소원과 질소원은 Glucose와 Malt extract, 최적비타민은 Myoinosiol로 나타났다. 첫 번째 국내 미기록종인 L. aciculospora 균주는 PDA 배지에서 36.5 mm/7일로 최대 균사생장을 보였으며 균사배양 최적온도는 $22^{\circ}C$, 최적pH는 6으로 나타났고 최적 탄소원과 질소원은 Glucose와 Malt extract, 최적비타민은 Myo-inosiol로 나타났다. 두 번째 L. boryana 균주는 MCM 배지에서 55.0 mm/7일로 최대 균사생장을 보였으며 균사배양 최적온도는 $22^{\circ}C$, 최적pH는 7로 나타났고 최적 탄소원과 질소원은 Glucose와 Urea, 최적비타민은 Riboflabin으로 나타났다. 세 번째 L. raphanica 균주는 ME1 배지에서 70.0 mm/7일로 최대 균사생장을 보였으며 균사배양 최적온도는 $28^{\circ}C$, 최적pH는 5로 나타났고 최적 탄소원과 질소원은 Sucrose와 Potassium nitrate, 최적비타민은 Riboflabin으로 나타났다.
아질산화 반응을 통한 nitrite 축적은 단축질소제거 혹은 anammox 공정 수립을 위해 필수적이고 이 반응의 속도가 전체 질소제거공정의 효율에 큰 영향을 미칠 수 있다. 본 연구는 부유 미생물 연속류 반응기에서 pH 농도가 암모니아 폐수(2,000 mgN/L) 처리에 주는 복잡하고 다양한 영향 들을 modeling과 실험을 통해 종합적으로 분석하였다. modeling 연구 결과 반응의 안정성(stability)은 pH에 의해 지대한 영향을 받으며, free ammonia 저해가 심해지는 알칼리성 환경일수록 안정적 운전 영역(stable region)은 축소되었다. 기질과 pH의 좌표 상에서 stable region과 unstable region을 가르는 경계(stability ridge) 근처에서 안정적인 최대반응속도를 얻을 수 있고, 이 운전조건에서 아질산 축적 가능성도 최대가 되었다. stability ridge 근처의 조건에서 반응기를 운전한 결과 아질산화속도는 안정적으로 약 $6kgN/m^3-d$까지 얻을 수 있었고, 아질산축적율은 약 99% 이었다. 그러나 unstable region에서는 부하증가를 통한 반복된 교란 결과 유출수 암모니아 농도가 회복 불가능한 상태로 상승하였다. Modeling 결과 고유(intrinsic) 최적 pH 값을 고정하여도 실험에서 관찰되는 최적 운전 pH는 사용 기질의 농도가 높을수록 낮아지는 것으로 나타났으며, 이는 문헌에서 보고된 경향과 일치 하였다. 본 연구의 modeling 조건에서 95% 아질산화(5%는 암모니아로 잔존)를 위한 최적 운전 pH는 ~8.0인 것으로 예측되었으나, anammox 유입수 생산을 위해 55% 아질산화하려 할 때의 최적 운전 pH는 ~7.2로 낮아 졌다.
B. megaterium ATCC 13639와 E. aerogenges의 비타민 B$_{12}$ 생산을 위한 최적 pH는 각각 6.0과 5.0으로 pH의 영향을 크게 받았으나 두 세균에 의한 riboflavin 생산은 pH에 따른 변화가 거의 없었다. Sucrose를 첨가하면 두 비타민 생산량이 크게 증가되었고 최적pH도 변함을 알 순 있었다. 두 세균에 의한 두 비타민 생산에 미치는 온도의 영향은 pH에 비하여 아주 적었다. 이상의 결론은 장차 여러 가지 식품 폐기물을 이용한 비타민 B$_{12}$와 riboflavin의 생산이 가능함을 보여주었다.
항암 능력이 높다고 알려진 진흙버섯속(Phellinus)은 단 다년생인 백색부후균이며 여기에 속하는 10개 균주의 최적 배양조건을 조사하였다. 그 결과 진흙버섯속 균사체 배양에 적절한 영양원으로는 $25^{\circ}C$ 배양상에서 PDA 배지였으며, 최적 pH는 $6.0{\sim}8.0$로 조사되었고 pH 4.0에서는 모든 균주가 느린 생장속도를 나타냈다. 배양온도는 $25{\sim}30^{\circ}C$에서 대부분의 균주가 양호한 생장을 보여주었다. Phellinus biscuspidatus는 실험 균주 중 가장 빠른 생장속도를 나타냈으며 pH 5.0에서 최적의 성장속도를 보여주었으나 pH $6{\sim}8$에서도 양호한 생장을 한 것과 균사밀도를 고려했을 때 최적pH는 $6.0{\sim}7.0$이라 할 수 있겠다. P. biscuspidatus, P. johnsonianus와 P. lloydii는 $30^{\circ}C$와 $35^{\circ}C$ 사이에서 균사생장이 활발한 고온성 균임을 알 수 있다.
본 연구에서는 알칼리 사용에 따른 갈변을 최소화하고 영양적으로 우수한 천마 단백질을 보다 효율적으로 추출하기 위하여 용출 및 침전 pH에 따른 단백질의 갈변도와 함량을 측정함으로써 탈지 천마 단백질 알칼리 추출의 최적 pH 조건을 설정하고자 하였다. 천마의 수분은 약 15%로 측정되었으며, 대부분 탄수화물로 구성되어 있었고, 단백질의 함량이 높은 것으로 확인되었다. 이러한 단백질을 다양한 pH에서 용출시킨 결과 pH가 증가함에 따라 용출된 단백질의 양이 증가하였으며, 갈변도 또한 증가함을 보였다. 침전 pH에 따른 단백질 함량은 pH 4에서 침전된 pellet이 가장 많은 함량을 나타내었으며, 상등액의 단백질 함량 또한 대부분 pH 4로 침전시킨 경우 가장 적은 것으로 확인되었다. 뿐만 아니라 단백질의 회수율도 침전 pH가 4일 때 가장 높은 값을 나타내었다. 따라서 갈변도와 단백질 함량을 고려한 탈지 천마 단백질 추출을 위한 최적조건은 용출 pH 9와 침전 pH 4로 결정되었다.
Chitin을 35 mesh로 분쇄하여 강산과 강알카리로 처리하여 CHITA와 CHITB를 만들고 여기에 glutaraldehyde를 작용시켜 $\beta$-glucosidase를 고정하여 CHITA-Gase 및 CHITB-Gase를 제조하였다. 이 두 종류의 고정화 효소를 기질 p-nitropheol-$\beta$-D-gliucopyranoside(PNG)과 회분식 반응기, 연속 흐름 반응기 및 플러그 흐름 반응기에서 반응시켜 최적 온도, 최적 pH, 반응 속도 상수, 물질 전달 계수, 효율 인자 및 효소 불활성화 속도 등을 구하여 반응기별 효율을 검토하였다. 반응 최적 온도는 세가지의 반응기 모두 5$0^{\circ}C$였으며, 최적 pH는 플러그 흐름 반응기에서는 Nat-Gase와 같이 pH5.0이었고 회분식 반응기 및 연속 흐름 반응기에서는 최적 pH의 이동이 일어나 pH6.0으로 이었다. 반응기의 최적 조건에서 km값은 회분식 반응기에서 CHITB-Gase$1.725$\times$10^-^5M/1$가 CHITA-Gase($1.725$\times$10^-^5M/1$)보다 작았으며, 연속 흐름 반응기 및 플러그 흐름 반응기에서는 유속 증가에 따라 Km'치가 감소하는 경향을 보였고, CHITB-Gase가 CHITB-Gase보다 더 작았다. $V^m^a^x'$값은 회분식 반응기, 연속 흐름 반응기, 플러그 흐름 반응기에서 모두 CHITA-Gase가 CHITB-Gase보다 높은 것으로 나타났다. 그리고, 물질전달계수 및 효율인자, 효소 불활성화 속도등의 값은 환경은 CHITB-Gase의 것이 나은 것으로 나타났다. 이들의 결과에서 CHITA-Gase 및 CHITB-Gase는 기질과의 반응 환경이 좋으므로 chitind은 $\beta$-glucosidase의 좋은 지지체라고 판단되어 공업적 응용이 기대된다.
본 논문에서는 산화 환원 효소의 최적 pH를 예측해 보았다. Boltzman 분배를 이용하여 어떤 아미노산의 side chain이 물에서 발견될수 있는 상대적 확률이나 물에 대한 상대적 친화력을 구하였으며 p$K_R$을 이용해 protonated 아미노산의 양과 deprotonated 아미소산의 양을 계산하였다. 효소의 최적 pH는 아미노산의 side chain이 물에서 발견될수 있는 상대적 확률과 protonated 또는 deprotonated된 아미노산 양의 곱인 유효 protonated된 양과 유효 depotonated된 양이 같아지는 pH로 예측하였다. 문헌 값과 비교해 보았을 때 예측치는 상당히 일치하는 경향을 보였으며 이 결과 로 효소 자체의 전도도가 생물학적 기능에 있어 매우 중요한 역할을 하는 것을 알 수있다.
참깨박 단백질의 기능개선을 위한 가수분해 조건을 검토한 결과 분리된 참깨박단백질에 대한 각 효소의 최적작용조건은 papain의 경우 pH 6.0, $60^{\circ}C$,효소 대 기질의 비는 기질량에 대해 3%, 기질농도 1.5%에서 최적이었으며, pepsin은 pH 2.0, $50{\sim}60^{\circ}C$, 효소의 농도는 기질량에 대해 3%, 기질농도 1%에서 최적이었다. 그리고 trypsin은 pH 9.0, $60^{\circ}C$, 효소의 농도는 기질량에 대해 1%, 기질의 농도 1%에서 가장 높은 효소작용을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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