한국에 야생하는 독버섯의 하나인 노란다발버섯을 물로 가열 추출한 후 추출액에 3배의 에탄올을 첨가하여 고분자 물질을 침전시켰으며 이를 다시 투석하여 정제 하였다. 이것을 냉동 건조하여 분말을 얻었으며 60mg/kg 용량을 백서의 복강내에 주사 하였던 바, 6일 후 부터 사망하기 시작하여 7일째에는 7마리중 4마리가 절명하였다. 이 유독 성분을 "네마톡신"이라 명명하고자 한다.
초석잠과 인삼 분말을 80% 에탄올로 추출하여 총페놀 함량(total phenol content, TPC)과 항산화 활성도를 조사한 결과 초석잠이 인삼보다 3.12배 많은 TPC를 함유하고, DPPH 라디칼 소거능은 16.83배, FRAP는 3.39배, TEAC는 3.18배 높게 나타났다. 초석잠과 인삼 추출물의 $H_2O$(Fr. I), 30% 에탄올(II), 50% 에탄올(III), 70% 에탄올(IV), 100% 에탄올(V) 분획물의 TPC와 항산화 활성도는 각 분획물에서 초석잠이 인삼보다 2.2~6.1배 많은 TPC를 함유하며 유의적으로 높은 DPPH 라디칼 소거능, FRAP value, TEAC value를 나타내었다. 또한, 초석잠 추출물의 TPC는 Fr. III>II> I> IV> V의 순으로, 인삼 추출물은 Fr. I~III> IV~V순의 경향을 나타내어 초석잠 추출물의 분획물은 극성이 높을수록 항산화능을 가진 페놀물질을 비교적 많이 함유하고, 인삼의 페놀물질은 초석잠보다 극성이 낮을 것으로 생각한다. 초석잠과 인삼 분말 5%와 10%를 첨가하여 쿠키를 제조한 후 퍼짐성, 경도, 색도 및 관능적인 특성을 대조군(밀가루 박력분)과 비교하여 평가한 결과, 초석잠과 인삼 분말 첨가시 쿠키의 퍼짐성은 증가하였으며, 경도는 초석잠 쿠키에서는 증가하고 인삼 쿠키에서는 감소하는 경향을 나타내었으며, 첨가량이 5%에서 10%로 증가할 경우 퍼짐성과 경도는 증가함을 보였다. 첨가군 쿠키는 낮은 명도와 강한 적색을 보였으며, 그중 초석잠 10% 첨가 쿠키는 유의적으로 가장 어둡고 진한 적색를 띠었으며 이는 육안으로도 확인할 수 있었다. 관능검사 결과 초석잠 쿠키는 색상면에서 기호도는 낮았지만 향은 대조군과는 유사하고 인삼 쿠키보다는 높은 기호도 점수를 받았으며, 맛과 전체적인 기호도에서 대조군과 인삼 쿠키보다 유의적으로 높은 평가를 받았다. 따라서 초석잠은 인삼보다 항산화력이 우수하고, 인삼 특유의 진한 향과 쓴맛과는 달리 구수한 맛과 향을 지니고 있어 베이커리 제품을 비롯한 가공식품의 제조 시 맛과 향이 우수한 건강 기능성 식품의 개발이 가능할 것으로 기대되며, 가공식품에서의 초석잠 이용도를 높이기 위해서는 분말형태뿐만 아니라 농축액을 비롯한 다양한 형태로 제조하여 가공식품 개발에 적용하고 조리에 응용하는 연구가 필요할 것으로 생각한다.
본 연구는 한방스킨의 원료로 널리 사용되고 있는 8가지 생약의 휘발성증류추출액 중 항산화 및 항염증활성이 가장 강한 정향의 증류추출액으로부터 주된 향기성분을 SDE법으로 추출한 후 GC-MS로 확인하였으며, 주된 향기성분인 eugenol과 그 유도체를 합성한 후 항산화 및 항염증활성을 측정하고 비교하였으며, 아울러 HPLC를 이용하여 정향의 eugenol 및 그 유도체를 정량분석 하였다. 8가지 생약의 휘발성증류추출액 중 정향의 증류추출액이 가장 강한 항산화활성($IC_{50}$=8.85 ${\mu}g/mL$) 및 COX-2 저해활성(10 ${\mu}g/mL$ 농도에서 저해율은 58.15%)을 나타내었으며, 반면 15-LOX 저해 활성(25 ${\mu}g/mL$ 농도에서 저해율은 86.15%)은 당귀 다음으로 가장 높았다. 정향 증류추출액의 휘발성 향기성분을 SDE법으로 추출한 후 GC-MS를 이용하여 분석한 결과, eugenol, trans-caryophyllene 및 acetyl eugenol을 확인하였다. 한편, eugenol 및 그 유도체(methyl eugenol 및 acetyl eugenol)의 항산화 및 항염증 활성을 측정한 결과, eugenol($IC_{50}$=5.99 ${\mu}g/mL$)이 가장 높은 항산화활성을 나타낸 반면, methyl eugenol 및 acetyl eugenol은 거의 활성을 나타내지 않았다. COX-2의 경우 20 ${\mu}g/mL$ 농도에서 eugenol(85.35%)이 가장 강한 저해활성을 나타낸 반면, 15-LOX는 20 ${\mu}g/mL$ 농도에서 methyl eugenol(83.29%)이 가장 높은 저해활성을 나타내었다. 정향 에탄올추출물의 eugenol 및 유도체의 함량을 HPLC로 분석한 결과, eugenol 및 acetyl eugenol이 각각 6.95%, 1.85% 함유되어 있었으며 methyl eugenol은 검출되지 않았다. 이와 같이 정향 유래의 eugenol 및 그 유도체는 안전성이 문제시되고 있는 합성항산화제 및 항염증제를 대체할 수 있는 천연 유래의 항산화 및 항염증물질로서 잠재적 가치가 있어 향후 기능성식품, 화장품 및 의약품 소재로 널리 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
본 연구에서는 한방에서 약용으로 사용하고 있는 미나리과에 속하는 천궁을 에탄올 추출을 사용하여 고지방식 이에 의해 유발된 고지혈 및 비만 흰쥐에서의 항산화 활성과 간 보호 효과에 미치는 영향을 관찰하였다. 고지방 식이에 의해 유도된 고지혈 및 비만 흰쥐에 있어서의 간 손상에 대한 천궁 추출물의 보호효과를 연구한 결과 고지방 식이를 먹인 흰쥐의 혈청 aspartate aminotransferase (AST)와 alanine aminotransferase (ALT)는 증가 되었고, 간조직의 균질액에서 과산화지질의 최종 산물인 MDA도 높게 나타났다. 이와 반대로 천궁 추출물을 처치한 군에서는 간 기능 지표효소의 증가를 억제시켰다. 간조직의 항산화 효소인 SOD, catalase와 GPx의 활성은 고지방식이 의해 감소되었고, 천궁 추출물의 투여로 인해 효소 활성도 가증가됨을 볼 수 있었다. 본 연구를 통해 천연물을 이용한 기반연구로서 향후 천궁의 지질개선 효과와 항산화 효과에 대한 분자생물학적 조직병리학적 후속연구가 필요하다고 사료되며 이 연구의 결과를 바탕으로 천궁의 항산화 식품이나 지질개선 기능성 식품소재로의 활용이 기대되어진다.
유색미 쌀겨가 화학적 변이원에 의한 유전독성을 억제하는 작용기작을 유색미 품종인 수원415호 쌀겨의 유기용매추출물과 변이원인 mitomycin C를 이용하여 조사하였다. 70%에탄올 분획 및 클로로포름분획에서 수원 415호는 대조구로 사용된 추청에 비하여 변이원에 대한 억제활성이 월등히 높았음에도 불구하고 항산화활성은 추청보다 다소 낮은 결과로 보아 항산화작용과는 다른 억제기작이 존재함을 추정할 수 있었다. E. coli를 지시세포로 유색미 쌀겨 추출물의 mitomycin C에 대한 변이원성 억제기작을 조사한 결과, desmutagen으로 작용할 가능성이 크다는 사실을 알았고, 쌀겨 추출물과 mitomycin C를 반응시킨 후 반응액 중에 존재하는 유리상태의 mitomycin C를 정량한 결과, 유색미의 쌀겨 추출물이 mitomycin C에 직접 결합하여 변이원을 흡착함으로써 세포에 대한 유전독성을 억제할 것으로 생각되었다.
엔도톡신 시험은 투구게의 혈구세포 추출성분인 라이세이트(Limulus Amebocyte Lysate, LAL)가 그람음성균의 지질다당체와 반응하여 응고하는 원리를 이용한 in vitro 시험법이다. 엔도톡신이 혈액 내 노출될 경우 환자에게 심각한 부작용을 발생시킬 수 있으므로 진단용 방사성의약품은 제조 후 반드시 엔도톡신 시험을 통해 의약품 내 오염여부를 확인해야 한다. 진단용 방사성의약품은 유기용매와 완충용액 등을 사용하여 화학반응을 통해 제조되므로 다양한 반응간섭물질이 의약품 내 존재할 수 있다. 이에 본 연구에서는 방사성의약품에 존재하는 엔도톡신 시험의 반응간섭인자를 분석하고 이들의 허용범위를 평가하고자 하였다. 방사성의약품의 엔도톡신 시험을 위해 겔 응고 LAL시험과 비색 LAL시험을 실시하였고, 비색 LAL시험에서는 혈액 성분으로 만든 EndosafeⓇ LAL cartridge와 재조합 단백질로 만든 EndosafeⓇ rCR cartridge의 성능을 비교하였다. 방사성의약품 68Ga-DOTATOC 주사액의 엔토톡신 시험 반응간섭인자 평가 시 pH, 유기용매, 완충용액이 있었으며, 그 중 유기용매인 에탄올이 엔도톡신 시험에 간섭현상을 일으켰다. 하지만 68Ga-DOTATOC 주사액을 10배 희석할 경우 간섭현상을 극복할 수 있었다. 진단용 방사성의약품 내 존재할 수 있는 반응간섭인자들의 허용범위를 평가하였으며, pH의 경우 pH 4~8에서는 간섭현상이 없었고, 유기용매의 경우 에탄올 1% 이하에서는 간섭현상이 발생되지 않았다. 완충용액 HEPES는 2,000 ㎍/mL까지는 간섭현상이 발생되지 않았다. 본 연구를 통해 진단용 방사성의약품의 엔도톡신 시험에서 유기용매인 에탄올의 농도가 가장 중요한 반응간섭인자임을 확인하였고, 적절한 희석을 통해 1% 미만의 농도로 낮출 경우 엔도톡신 시험을 시행할 경우 간섭을 극복할 수 있음을 알 수 있었다. 또한 EndosafeⓇ LAL cartridge와 EndosafeⓇ rCR cartridge의 회수율도 비슷하게 측정되어 성능에 큰 차이가 없음을 확인할 수 있었다. 본 연구결과는 향후 새로운 진단용 방사성의약품의 엔도톡신 시험 시 반응간섭인자를 평가하는데 큰 도움이 될 것으로 기대한다.
대추 추출물로부터 식초를 생산하기 위한 발효공정의 최적 조건을 연구하였다. 아세트산 세균을 이용한 발효 공정의 조절 변수로 초기 세균수, 에탄올의 농도, 대추 추출물의 농도, 온도, pH를 고려하여 반응 표면 분석법을 통해 분석하였다. FCD 기반의 통계 분석을 통해, 영향이 낮은 것으로 나타난 초기 세균수와 대추 추출물의 농도는 고려요소에서 제거한 다음, 아세트산 생성과 최대 산도를 얻을 수 있는 발효 공정 최적 조건을 탐색하였다. 최대 산도와 최대 아세트산 생성 조건에 대해 각각 $R^2$값이 0.71, 0.78로 나타난 반응 표면 회기식 분석을 통해 7.69% 에탄올을 함유한 25%의 대추 추출물로부터 $21.75^{\circ}C$에서의 아세트산 발효를 통해 52.76 mg/mL의 아세트산을 생산하는 것이 최대 효율 공정으로 예측되었으며 이를 실험을 통해 검증하였다.
양파의 냄새를 줄이고 기능성을 살린 식초의 제조를 위한 기초 연구의 일부로서 양파즙에 보당하여 알콜 발효하는 대신에 알콜 발효 없이 양파즙에 에탄올을 첨가한 양파식초의 제조에서 flavonoid 물질의 함량변화, flavonoids를 강화한 양파식초의 제조방법 및 이들 물질의 초산에 대한 안정성을 조사하였다. 양파즙의 식초발효에서 $80^{\circ}C$, 10분 열처리하여 착즙한 양파액에 $4\%$ 에탄올을 첨가한 양파식초에서 초산생성량이 높았다. Flavonoids의 함량은 생양파즙을 사용한 식초에서 가장 많았다. 양파껍질의 flavonoid성분 추출을 위해 $6\%$ 초산액에서 $20^{\circ}C$, 140 rpm으로 교반추출시에 90분 처리가 적절하였고, 이것을 양파식초에 첨가한 결과 quercetin monoglucoside와 quercetin의 함량이 증가하였다. 양파식초에서 flavonoids의 안정성은 quercetin diglucoside가 quercetin monoglucoside에 비해 안정하였고 quercetin 배당체마다 산에 의한 영향이 차이가 있음을 알 수 있었다.
인삼주성분 사포닌 및 미량성분 사포닌의 단리법에 대하여 HPLC의 응용을 검토하여 이미 보고한 바 있다. 따라서 인삼미량성분인 $Ginsenoside-Rh_1$ 및 미지성분인 $Ginsenoside-Rh_2$의 단리법을 검토하였다. 저자등의 방법에 따라 홍삼의 70% 에탄올추출액(4 kg)에서 부탄올추출액을 얻어 에틸 아세테이트로 처리 (실온에서 3시간 및 $60^{\circ}C$에서 3 시간)하여 에틸 아세테이트 획분(29g)을 preparative HPLC인 prep LC/System-500을 사용하여 부분분획하여 각 획분을 analtical HPLC/ALC-201로 동정, ginsenoside-Rh group을 다시 에테르, 에틸 아세테이트 및 물로 정제한 후, semipreparative HPLC/ALC-201로 $ginsenoside-Rh_1$ 및 $-Rh_2$를 단리했다. 미지성분단리에 HPLC의 응용이 효과적임이 판명되었다.
한국산 인삼 (Panax ginseng C. A. Meyer) 뿌리에서 추출한 사포닌 분획이 쥐의 간에 미치는 에탄올 독성을 예방하는 효력이 있음을 생화학적 및 현미경적으로 관찰하였다. 본 연구실의 연구 결과에 의하면 적당량(반응액에서의 농도 : $10^{-5}\%$내외)의 인삼 사포닌은 여러가지 효소를 비 특이적으로 활성화하며 1mg의 사포닌 분획을 쥐에게 경구 투여하면 2시간후의 간에서의 인삼 사포닌 분획의 농도가 약 $10^{-5}\%$ 수준이고 간에서의 사포닌 분획의 반감기는 약 5시간으로 추정되었다. 본 연구에서도 인삼 사포닌 분획이 에탄올 대사에 관여하는 alcohol dehydrogenase, aldehyde dehydrogenase 그리고 microsomal ethanol oxilizing system을 시험관 내에서나 생체에서 다같이 촉진한다는 것을 알게 되었고 인삼 사포닌 분획이 에탄올 산화 과정에서 생성되는 유독한 acetadizing를 체내에서 신속히 제거하고 과량의 수소를 생합성에 효과적으로 이용함으로서 에탄올 독성으로부터 간을 보호하는 것으로 생각되었다. 전자현미경적 관찰도 물대신 $12{\%}$ ethanol만을 6일간 투여한 쥐의 간세포가 크게 손상되었는데 비하여 인삼 사포닌을 $12{\%}$ethanol과 함께 같은 기간 투여한 쥐의 간세포는 손상되지 않았음을 나타내고 있으며, 인삼 사포닌 분획이 에탄올 특성에 예방적 효력이 있음을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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