임상시험 guideline은 신약개발을 촉진하기 위하여 약사법 제 26조 제 6항 및 제 24조 제 8호의 규정에 의거하여 신약 임상시험의 안내서로 활용하게 하는데 있다. 임상시험은 특정약의 특정 질환에 대한 임상효과를 판정하기 위하여 시험약의 효과 및 부작용을 윤리적으로 타당한 과학적 시험을 통하여 시행하는 것이다. 특히 임상시험은 사람을 대상으로 하기 때문에 윤리적이고 과학적인 방법을 통하여 시행착오를 최소화하고, 피험자가 위험에 처할 가능성을 최소화하여야 한다.

잠재적으로 항감염 약제로 사용될 가능성이 있는 약제들의 초기 연구과정에서 주된 관심사는 이들이 미생물(세균, 바이러스, 기타 기생충)에 대한 작용들이 있는가 하는 점이다. 이러한 작용들이 실험적으로 충분히 연구가 된 후에야 실험동물에서 그 효과를 연구한다. 항 바이러스 제제의 경우에는 세포배양을 통한 연구가 그 약제의 독성과 효용성을 나타내는데 필수적인 것이 된다. 여러 종류의 동물을 이용한 생체실험에서 약제의 일반적인 흡수와 배설, 분포 등에 관한 정보와 약제 자체와 동물 내에서의 대사적 변화에 대한 정보가 제공된다. 여러 가지 미생물로 감염을 시킨 적합한 동물과 여러 가지 용량으로 치료하는 실험을 통하여 약제의 항 감염 능력이 알려지게 된다. 동물에서의 생체실험과 실험관내에서 실험을 하고 나서야 사람에서의 연구가 이루어지게 된다. 소위 전임상시험에서 대표적 병원성 미생물에 대한 생물학적효과, 약리학적 효과와 독성 그리고 동물실험모델에서의 가능한 효과가 결정된 후에 임상시험에 들어가기 마련이다. 항균제의 임상시험에는 각각의 감염질환에 대한 진단 및 치료기준을 반영하는 것이 기본이다. 새로운 항균제의 임상시험에서는 안전성과 효과가 반드시 밝혀져야 한다. 1상에서는 인체에서의 약리효과, 안전성이 주목적이며, 2상과 3상은 겹쳐지는 점도 있으나 하나 또는 그 이상의 적응증에 대한 항균제의 효과와 단기간의 부작용은 2상에서 관찰하여야하며, 다수의 환자에서 제안된 적응질환의 무작위임상시험과 다수에서의 안전성도 3상에서 관찰하여야 한다. 4상에서는 이상에서의 자료로 시판된 후에도 계속해서 감시하는 것으로 지속적으로 안전성을 관찰하는 것이다. 이러한 기본사항외에도 소아, 임산부, 고령자등에서의 임상시험도 넓은 의미에서 포함되어야 할 것이며 또한 질적인 면에서 조절하는 Quality Assurance도 중요하다.양상은 세 용량군 간 차이가 없었으나, 시험기에서 발열의 발현율이 낮았으며, 발열일 수와 항생제 사용일 수가 짧았다. 결론: 골수억제 조절 효과는 용량에 따른 혈액소견에 미치는 영향, 부작용, 감염의 빈도, 감염발생에 따른 항생제 사용기간 등을 고려하여 그 임상 유효성 평가시, 제 3상 시험에 사용할 권장량 (recommended dose) 은 250 ug/$m^2$/d $\times$ 10d 으로 관찰되었다.5주에 부검한 랫드의 간에서 c-myc 종양단백의 발현은 모든 처리군들이 대조군에 비하여 높게 발현되는. 것이 관찰되었으나 시험개시후 26주에 부검한 랫드의 간에서 c-myc 종양단백의 발현은 대조군에 비하여 차이가 거의 없었다. 따라서 랫드에서 화학적으로 유도한 간암발생 과정에서 NK 세포활성이 현저하게 억제되는 것으로 생각되며, c-myc 종양단백의 발현은 시험개시후 15주에 그 발현이 확실한 것으로 사료되어 진다.에 영향을 주는 성분이 있음을 제시하였다.1과 항우울약들의 항혈소판작용은 PKC-기질인 41-43 kD와 20 kD의 인산화를 억제함에 기인되는 것으로 사료된다.다. 것으로 사료된다.다.바와 같이 MCl에서 작은 Dv 값을 갖는데, 이것은 CdCl$_{4}$$^{2-}$ 착이온을 형성하거나 ZnCl$_{4}$$^{2-}$ , ZnCl$_{3}$$^{-}$같은 이온과 MgCl$^{+}$, MgCl$_{2}$같은 이온종을 형성하기 때문인것 같다. 한편 어떠한 용리액에서던지 NH$_{4}$$^{+}$의 경우 Dv값이 제일 작았다. 바. 본 연구의 목적중의 하나인 인체유

One fundamental problem in developing an AIDS vaccine is antigenic variation of HIV. Despite a substantial induced immune response in gp120-immunized monkeys and humans, high titers of V3-directed type specific neutralizing antibodies may not be sufficient to neutralize continuously emerging new isolates. Several studies analyzing anti-gp120 antibodies in HIV-infected individuals have clearly indicated that most broadly neutralizing antibodies are directed to conformation-dependent epitopes. Therefore, it seems important to evaluate the potential efficacy of candidate gp120 vaccines at inducing such antibodies, that might be potentially protective against multiple HIV strains. One concern in the development of any recombinant protein as a vaccine is its stability when mixed with an adjuvant. This could be a particularly important factor for recombinant gp120, given the conformational nature of its major, broadly neutralizing, epitopes. We hypothesized that gp120 complexed with recombinant CD4 could stabilize the conformation-dependent epitopes and effectively deliver these epitopes to the immune system. In this study, a soluble gp120-CD4 complex in Syntex Adjuvant Formulation was tested in mice to analyze the anti-gp120 antibody response. With the aim of defining the fine specificity and neutalizing activities of the immune response, 17Mabs were generated and characterized. The studies indicate that the gp120-CD4 complex elicits neutralizing anti-gp120 antibodies, most of which are directed to the conformation dependent epitopes.

Although ureases play important roles in microbial nitrogen metabolism and in the pathogenesis of several human diseases, little is known of the mechanism of metallocenter biosynthesis in this Ni-Containing enzyme. Klebsiella aerogenes urease apo-protein was purified from cells grown in the absence of Ni. The purified apo-enzyme showed the same native molecular weight, charge, and subunit stoichiometry as the holo-enzyme. Chemical modification studies were consistent with histidinyl ligation of Ni. Apo-enzyme could not be activated by simple addition of Ni ions suggesting a requirement for a cellular factor. Deletion analysis showed that four accessory genes (ureD, ureE, ureF, and ureG) are necessary for the functional incorporation of the urease metallocenter. Whereas the $\Delta$ureD, $\Delta$ureF, and $\Delta$ureG mutants are inactive and their ureases lack Ni, the $\Delta$ureE mutants retain partial activity and their ureases possess corresponding lower levels of Ni. UreE and UreG peptides were identified by SDS-polyacrylamide gel comparisons of mutant and wild type cells and by N-terminal sequencing. UreD and UreF peptides, which are synthesized at ve교 low levels, were identified by using in vitro transcription/translation methods. Cotransformation of E. coli cells with the complementing plasmids confirmed that ureD and ureF gene products act in trans. UreE was purified and characterized. immunogold electron microscopic studies were used to localize UreE to the cytoplasm. Equilibrium dialysis studies of purified UreE with $^{63}$ NiC1$_2$ showed that it binds ～6 Ni in a specific manner with a $K_{d}$ of 9.6 $\pm$1.3 $\mu$M. Results from spectroscopic studies demonstrated that Ni ions are ligated by 5 histidinyl residues and a sixth N or O atom, consistent with participation of the polyhistidine tail at the carboxyl termini of the dimeric UreE in Ni binding. With these results and other known features of the urease-related gene products, a model for urease metallocenter biosynthesis is proposed in which UreE binds Ni and acts as a Ni donor to the urease apo-protein while UreG binds ATP and couples its Hydrolysis to the Ni incorporation process.ouples its Hydrolysis to the Ni incorporation process.s.

리포좀은 1960년대 초 Bangham등에 의해 혈액응고시 인지질의 영향에 관한 연구 중 우연히 발견하게 되었다. 즉 인지질이 물에 분산되어 2 분자막 (Bilayer)을 형성함을 알았고, 이때 생긴 폐쇄소포체를 리포좀이라 하였다. 이러한 리포좀은 원형질 막이나 세포내의 소기관의 막과 유사한 구조를 갖고 있기 때문에 이것을 이용하여 생화학자나 생물리학자들은 생체막의 모델시스템으로 이용하여 생체막의 기능 연구에 널리 이용하여 왔다. 1970년 초반부터 리포좀을 이용한 약물의 생체내 공급(Drug Delivery System, DDS)에 대하여 많은 연구가 이루어져 왔고, 지금까지도 의약품외 전달매체로 이용할려고 많은 시도를 하고 있는 실정이다. 최근에는 리포좀을 이용하여 항원을 전달하는 면역보조제(Adjuvant System)로 이용하려는 시도를 하고 있다. 현재까지 리포좀을 이용한 상품들은 화장품과 임상용 진단시 약, DNA transfection system (Lipopectin)으로 활용되고 있다.

Most drug discovery has focused in recent years on the development of molecules that either interact with or block receptors, proteins that act as on-off switches for genetic activity, on the surfaces of human cells. Now, we have developed a technology that targets “receptors inside the cell” (intracellular receptors), opening a new and compelling avenue for drug discovery. Our receptor-based small molecule drugs can be catagorized in two ways: 1) receptor agonists, or molecules that activate a receptor; and 2) receptor antagonists, or drugs that inactivate a receptor.

Renin-Angiotensin계는 정상 및 질병시의 혈압조절에 매우 중요한 역할을 담당하고 있음이 밝혀지면서, 이 조절계의 특정단계를 간섭함으로써 새로운 고혈압치료제를 개발하려는 연구가 일찍부터 시도되었다. (그림 1). 그 중에서 내인성 생리활성물질인 Angiotensin II의 합성을 차단하는 ACE 저해제는 임상적으로 고혈압 및 심부전치료제로서 유용성이 인정되어 현재 널리 사용되고 있다. ACE 저해제는 종종 마른기침, 발적과 같은 부작용이 나타나므로 이러한 부작용을 극복하려는 연구가 많이 있었으나 이는 작용기전에서 기인되는 것으로 해결에 한계를 보여왔다. 그런데 1982년 일본의 Takeda사의 연구진은 S-8307, 8308이라는 효과가 매우 약하기는 하지만 Angiotensin II 수용체를 선택적으로 차단하는 비펩타이드성의 AII길항물질을 특허 출원하였다. 미국의 Du Pont사는 AII길항약물이 효능은 그대로 유지하면서 ACE 저해제들의 부작용을 해결할 수 있을 것으로 예상하고 Takeda 화합물을 모핵으로하여, 많은 유도체들을 합성하면서 구조-활성 연구를 수행한 결과 비펩타이드성길항제인 Dup 753(Losartan, Cozaar$^{R}$) (2-N-butyl-4-chloro-5-hydroxymethyl-1-(2'-(1H-tetrazole-5-yl)biphenyl-4-yl) imidazole, potassium salt)을 발견하게 되었다. 이 Dup 753은 특별히 AII수용체중 혈압조절과 관련이 있는 AT1 수용체를 선택적으로 차단하는데, 효력은 ACE 저해제인 captopril과 유사하며, 경구흡수가 잘되고 지속시간이 길어 하루에 한번 먹는 경구제제로 개발되고 있는 것으로 알려져 있다. 이 Dup 753의 지속시간이 긴 것은 그 대사물인 Exp 3174에 기인하는 것으로 알려져 있으며, 대사체가 Dup 753에 비해 효력도 훨씬 더 높고 지속시간도 길어서, Dup 753은 일종의 prodrug적 개념이 들어있는 약물이라 할 수 있다.

분자 모델링은 Molecular Mechanics 라는 empirical force field를 사용하여 여러 가지 분자들의 3차원적 구조를 구하고, 이로부터 이 분자들의 물리적, 화학적 성질들을 계산하고, Computer Graphics를 사용하여 형상화하는 전반적인 연구활동을 의미한다. 이러한 연구활동의 출발점은 실제의 분자와 가장 가까운 3차원적 분자구조를 얻는 것이다. 여러 가지 가능한 방법을 통하여(양자역학적 계산 혹은 X-ray Database 검색등) 최적의 구조를 얻은 후, 이 구조를 사용하여 관심 있는 여러가지 물리적, 화학적 성질들을 계산할 때, 비로소 실험결과를 설명할 수 있게 되고, 이를 토대로 하여 새로운 분자의 Design 이 가능할 수 있을 것이다.

Over past decades, numerous in vitro model has been developed to investigate drug metabolism. In the order of complexity we found the isolated perfused liver, hepatocytes in co-culture with epithelial cells, hepatocytes in suspension and in primary culture and subcellular hepatic microsomal fractions. Because they can be easily prepared from both animals (pharmacological and toxicological species) and humans (whole livers as well as biopsies obtained during surgery) hepatocytes in primary culture provide the most powerful model to better elucidate drug behavior at an early stage of preclinical development such as : 1. the characterization of main biotransformation reactions. 2. the identification of phase I and phase II isozymes involved in such reactions 3. the evaluation of interspecies differences allowing the selection of a second toxicological animal species more closely related to man on the basis of metabolic profiles 4. the detection of the inducing and/or inhibitory effects of a drug on metabolic enzymes, the prediction of drug interactions 5. the estimation of inter-individual variability in biotransformation reactions. The use of hepatocytes, and in particular those obstained from humans, at an early stage of drug development allows the obtention of more predictive preclinical data and a better knowledge of drug behavior in humans before the first administration of the drug in healthy volunteers.

Chimeric fusion proteins involving IgG have proven valuable in studying protein-protein interactions and may possess therapeutic applications as well. For example, three receptor subtypes for the natriuretic peptides, when fused to the Fc portion of human IgG ${\gamma}$ chain, were quantitatively and qualitatively indistinguishable from the native receptor, thus allowing detailed structure-function studies of the receptor. In an attempt to block human immunodeficiency virus infectivity with soluble derivatives of CD4, a CD4/IgG Fc chimeric molecule was shown to increase the plasma half life of soluble CD4 and possessed the added advantage of IgG Fc-mediated placental transfer. In the case of the KGFR, this approach provided a framework for dissection of its ligand binding domains and made it possible to demonstrate that high affinity binding sites for two ligands, aFGF and KGF, reside within different receptor Ig-like domains. Chimeric molecules fused to immunoglobulins would have the advantages of secretion from transfected cells as well as detection and purification from medium utilizing Staphylococcus aureus Protein A. In addition, where highly related receptors make their discrimination very hard due to the difficulties in generating specific immunochemical probes, IgG fusion protein with tailor-made specificities confers particular advantages to elucidate patterns of receptor distribution and expression. The approach described here may have general applications in defining ligand-receptor interactions as well as searching for specific agonists and antagonists of receptor function.

Aziridinylbenzoquinones such as 3, 6-diaziridinyl-1, 4-benzoquinone (DZQ) and its 2, 5-methyl analog (MeDZQ) require bioreductive activation in order to elicit their anticancer activities. To determine the involvement of DTD in the activation of these drugs, we have used a ligation-mediated polymerase chain reaction to map the intracellular alkylation sites in a sing1e copy gene at the nucleotide level. We have performed this analysis in two human colon carcinoma cells, one proficient (HT-29) and one deficient (BE) in DT-diaphorase (DTD) activity. In the DTD proficient HT-29 cell line, DZQ and MeDZQ were found to alkylate both 5'-(A/T)G(C)-3' and 5'-(A/T)A-3' sequences. This is consistent with the nucleotide preferences observed when DZQ and MeDZQ are activated by purified DTD to reactive metabolites capable of alkylating DNA in vitro [Lee, C. -S., Hartley, J. A., Berardini, M. D., Butler, J., Siegel., D., Ross, D., & Gibson, N. W. (1992) Biochemistry, 31: 3019-3025]. Surprisingly in the DTD-deficient BE cell line a pattern of alkylation induced by DZQ and MeDZQ similar to that observed in the DTD-proficient HT-29 cells was observed. This suggests that reductive enzymes other than DTD can be involved in activating DZQ and MeDZQ to DNA reactive species in vivo.