본 연구에서는 역미셀을 이용한 단백질 추출공정에서 적극적으로 활용되지 못했던 양이온 계면활성제에 의한 단백질 추출 가능성을 제시하였으며 초유로부터 IgG의 분리를 위한 반응조건을 조사하였다. IgG의 분리에 적합한 조건은 반응 수용액상의 경우 pH 8, 50 mM KCl었으며 유기용매상의 계면활성제(CDAB) 농도는 100 mM로 나타났다. 위의 조건에서는 초기시료에 존재하는 IgG의 90%이상이 회수되었으며 회수된 단백질의 93%가 IgG로 나타났다. 또한 본 연구는 기존의 역미셀을 이용한 일반적인 단백질 추출공정인 정추출 및 역추출 공정을 이용하지 않고 정추출 공정만을 이용함으로써 추출과정을 단순화하였다.
이 연구에서는 살아있는 질편모충의 단백질녈해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 알아보고 질편모충에 의한 조직세포 독성에 있어서 단백질분해효소의 역할을 시험관내에서 관찰하였다 실험에 사용한 질편모충은 질염환자로년터 분리한 KT9 분리주이었으며 세포독성을 알아보기 위한 표적세포로는 HeLa 세포를 사용하였다 질편모충 단백질분해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 관찰하고자 인체의 분비 IP. 혈청 IgA 및 IgG를 살아있는 원충. 원충의 용출액 및 분비-배설 액과 DTT를 넣어 반응시켰다. 여러 계열의 단백질분해효소 저해제(aminopeptidase, serine, metallo, cystelrle계열)를 살아있는 질편모충과 미리 반응시킨 후 세척하고 면역글로불린의 분해 단백질분해효소 활성 및 조직세포독성에 미치는 영향을 관찰하였다 살아있는 질편모충은 인체의 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였는데 질편모충 수가 증가할수록 반응시간이 길수록 분해가 더 잘 이루어졌다 질푄모충의 용출액과 분비-배설액도 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였다. Cysteine, serine계 열의 단백질분해효소 저해제 (I-64 antipain, iodoacetic acid, iodoacetamide, TLCK)를 처리한 질편닐충은 분비 IgA의 분해를 저해하였으며. 단백질분해효소저해제로 처리한 경우 질편모충의 단백질븐해효소 활성은 감소하였고 HeLa세포에 대한 독성이 감소하였다. 이상의 성적을 종합하면 질편모충에서 분비되는 단백질분해효소는 시험관내에서 조직세포에 세포독성을 나타내며 또한 인체면역글로불린을 분해하여 숙주의 방어기전에 대한 도피물질로 작용하는 것으로 생각된다.
The performance values of available techniques used in serodiagnosis of toxoplasmosis are satisfactory but they raise problems of equivocal and discordant results for very low IgG titers. Recently marketed, LDBio-Toxo II IgG Western blot (IB) showed an excellent correlation with the dye test. We estimated the proportion of equivocal and discordant results between the enzyme immunoassay Platelia Toxo IgG (EIA-IgG) and fluorescent antibody test (FAT) and assessed the usefulness of the IB as a confirmatory test. Out of 2,136 sera collected from pregnant women, 1,644 (77.0%) tested unequivocally positive and 407 (19.0%) were negative in both EIA-IgG and FAT. The remaining 85 (4%) sera showed equivocal or discordant results. Among them, 73 (85.9%) were positive and 12 (14.1%) were negative in IB. Forty-one (89.1%) equivocal sera in EIA-IgG and 46 (86.8%) equivocal sera in FAT were positive in IB. Reducing the cut-off values of both screening techniques improved significantly their sensitivity in detecting very low IgG titers at the expense of their specificity. In conclusion, equivocal results in routine-used techniques and their discordance in determination of the immune status in pregnancy women were not uncommon. IB test appeard to be highly useful in these situations as a confirmatory technique.
$^{123}I$ has ideal half life of 13 hours, suitable 159 keV gamma energy for imaging, and easy labeling methods. In Korea Cancer Center Hospital, $^{123}I$ has been produced by MC-50 cyclotron. The purpose of this study is looking for good labeling condition of $^{123}I$ and $^{99m}Tc$ to nonspecific human polyclonal IgG, and comparing these with $^{67}Ga-citrate$ in the abscess bearing mice. Human polyclonal nonspecific IgG was labeled with 0.2 M phosphate buffer added $^{123}I$ by chloramine T method. Human polyclonat nonspecific IgG was labeled with $^{99m}Tc-gluconate$ after activation with $\beta-mercaptoethanol$. In the abscess bearing mice, the radioactivity in the abscess was higher in 24 hours than 6 hours after injection. In the abscess, $^{123}I$ nonspecific IgG had higher uptake than $^{99m}Tc-IgG\;or\;^{67}Ga-citrate$. There was no significant difference in absecess uptake of $^{123}I-IgG$ among 24, 72, 120 hours abscess age. Further clinical researches with $^{123}I-nonspecific$ IgG, and other immunoscintigraphies using $^{123}I$ are expected.
Identification of spermatogonial stem cell-specific surface molecules is important in understanding the molecular mechanisms underlying the maintenance and differentiation of these cells. We have found that spermatogonia from busulfan treated mice expressed an autoantigen that distinguishes between undifferentiated and differentiated spermatogonia. Four to six weeks after busulfan treatment, germ cells located in the basal compartment of seminiferous epithelium show isotype-specific IgG deposits that form due to autoimmunity. Before busulfan treatment, the level of testicular IgG was very low but IgG levels began to increase after week 4 and peaked at week 6. When cells from the busulfan treated testis were analyzed using laser scanning cytomeoy (LSC), the frequency of cells positive for IgG deposits, 6-integrin, and 1-integrin were 16.5${\pm}$3.8%, 11.8${\pm}$2.6%, and 9.0${\pm}$ 1.4%, respectively. Immunofluorescent staining suggested that most, if not all of the cells with IgG-deposits isolated from a laminin-coated dish, were also positive for a spermatogonial stem cell marker \ulcorner6-integrins as well as for a germ cell-specific marker TRA 98. We determined serum and intratesticular IgG levels and the soundness of seminiferous tubule basement membrane from busulfan treated mice using electron microscopy, in order to study the mechanism responsible for IgG deposits in spermatogonia. We found that the basement membranes of seminiferous tubules from busulfan treated mice were severely impaired when compared to those of normal adult, neonates and w/wv mice. Furthermore, new blood cells were observed in the surface of the damaged basement membrane along the seminiferous tubules. These results suggest that the IgG in spermatogonial stem cells accumulates from circulating blood through the impaired basement membranes induced by busulfan treatment. Taken together, our study suggests that IgG can be used as a new marker for undifferentiated spermatogonia cells.
요꼬가와홉충을 고양이 등에 실험적으로 감염시키면 그 기생부위인 소장의 점막에는 융모의 위축, 융합 등의 병적 변화가 일정기 간 나타나며 점막기 질(stroma)에는 심한 염증세포의 침윤이 일어난다. 이상의 병리학적 소견을 기초로 생각할 때 요꼬가와흡충 감염 경과중 특이 항체반응이 나타날 것으로 가정할 수 있다. 이 연구에서는 요꼬가와흡충의 피낭유충을 10,000개 및 80,000개씩 감염시킨 고양이 25마리에서의 혈청내 특이 IgG 항체가를 면역효소측정법 으로 조사하였다. 자연감염된 은어에서 분리한 피낭유충과 실험감염 개의 소장에서 4주일후 분리한 성충의 생리식염수 추출액을 항원으로 사용하였다. 그리고 감염된 충체의 수를 부검때에 세어 실제 감염략으로 하였다. 특이 IgG 항체가는 대조군 혈청에 비하여 감염 7일째부터 상승하기 시작하였으며 감염후 2∼4주일에 최고치에 도달하였다가 그 이후 일정한 수준을 유지하였다. 특이 IgG항체는 피낭유충 항원보다는 성충 항원에 대하여 더 높게 반응하였다. 그리고 감염충체수가 적은 고양이의 혈청내 IgG 항체가는 같은 감염기간의 대 량감염 고양이에 비하여 음았다.
목 적: 홍역, 유행성이하선염 및 풍진 예방접종 시행후 연령 증가에 따른 항체양성율의 변화를 조사한다. 방 법: 병원에 내원한 7-20세의 환아를 대상으로 잔여 혈청을 이용하여 IgG 항체를 검사하였다. 결 과: 총 408례 중 홍역은 275례로 67.4%, 유행성이하선염은 112례로 27.5%, 풍진은 367례로 90.0%의 양성율을 보였다. 양성자의 IgG 수치는 각각 $2.77{\pm}1.18$ Index, $2.08{\pm}1.29$ Index 및 $60.46{\pm}63.47$ IU/mL 이었다. 결 론: 홍역 67.4%, 유행성이하선염 27.5% 및 풍진 90.0%의 IgG 항체 양성율을 보였다. 홍역, 유행성이하선염 및 풍진의 유행을 막기 위해서는 높은 접종율의 유지가 중요하며, 또한 보호자에 대한 접종기록 등의 관리가 중요할 것으로 생각된다.
목 적 : 학령 전기 소아에서 연령에 따른 거대세포바이러스 항체 보유율의 조사를 통해 모체로부터 유래된 항체의 소실 시기와 후천적 감염에 의한 항체 양성률이 증가되는 시기를 알아 보기 위해 본 연구를 실시하였다. 방 법 : 2001년 3월부터 2004년 2월까지 가톨릭대학교 성가병원에 내원한 신생아부터 만 5세(60개월)까지 연령의 391명을 대상으로 하였다. 이 중에서 217명은 거대세포바이러스 IgG를 검사하였고, 358명은 거대세포바이러스 IgM를 검사하였다. 결 과 : 학령 전기 소아의 혈청내 거대세포바이러스 IgG 항체양성률은 전체 대상자 217명 중 182명이 양성을 보여 평균 83.9%의 양성률을 보였다. 전체적인 변동은 출생시부터 3개월까지 나이에서 92.9%를 보인 후 생후 4-6개월 사이에서 75.0%로 감소되었으며 생후 7-9개월 사이에서 20.0%로 최저치를 보인 후 차츰 증가하여 생후 22-24개월 사이에 전체 평균인 83.9%에 근접한 수치에 도달하였다. 25개월 이후부터는 전체 평균치보다 높은 양성률을 보였다. 생후 22개월 이후에는 총 114명 중 105명이 양성을 보여 92.1%의 양성률을 보였다. 거대세포바이러스 IgM 항체 양성률은 전체 대상자 358명 중에서 0-1개월의 150명 중 3명이 양성으로 3.3%, 1-2개월의 28명 중 1명이 양성으로 3.6%, 2-3개월의 19명 중 2명이 양성으로 10.5%, 3-4개월의 7명 중 1명이 양성으로 14.3%, 4-5개월의 7명 중 1명이 양성으로 14.3%였고, 이후에는 148명 중 5명만이 양성인데, 22-23개월에 1명, 25-26개월에 1명, 27-28개월에 1명, 28-29개월에 1명, 40-41개월에 1명씩 분포하여 출생 후부터 생후 5개월까지는 지속적으로 발견되었으나, 이후 연령에서는 간헐적으로 발견되었다. 결 론 : 거대세포바이러스 IgG 항체는 모체에서 유래된 IgG 항체는 출생 후부터 감소되어 생후 7-9개월경 급격히 감소되며 주산기 또는 출생 직후부터의 거대세포바이러스 감염에 의해 IgG가 증가되어 생후 22-24개월에 평균 IgG 양성률인 83.9%에 도달한다.
본 실험은 육용계 기초사료에 copper와 Vit. E+Se을 첨가급여시 육계의 혈청 IgG수준과 증체량 및 질병 발생율과의 상관관계를 조사함으로써 가금의 영양과 면역반응에 관한 기초적인 정보를 얻고자 실시하였다. 닭의 혈청중 IgG함량을 처리별, 시기별로 RID test에 의해 측정한 후 이를 증체량 및 건강상태와 비교한 결과는 다음과 같다. 1. 대조구의 혈청중 IgG함량은 부화 직후에 최고치 (4.26mg/$m\ell$)를 나타내었으며 2주령까지 급격히 감소하여 최소치 (0.87mg/$m\ell$)를 유지하다가 그후에 점차적으로 증가하여, 7주령에는 2.48mg/$m\ell$의 수준을 보였다. 2. 혈청 IgG의 농도와 증체량과의 상관성은 사육전기에는 고도의 유의적인 부의 상관관계를 보였으며 3주령에서 가장 높은 상관계수(r=-0.423)를 나타냈으며 사육후기에는 정의 상관관계를 나타내어 7주령시의 IgG농도와 3주령시 증체량간에는 r=+0.246의 상관계수를 보였다. (p<0.01) 3. Cul5, Cu25와 ES2O군의 혈청 IgG수준은 2주령에서 대조군에 비하여 낮은 수준을 보이다가 3주령에는 급속히 상승한 반면에 대조군에서는 이와 같은 현상이 1주일 늦게 나타났다. 이는 Cu나 Vit. E와 Se을 혼합 첨가 급여할 경우에는 능동면역의 발달이 대조군보다 1주일 조기에 일어나는 것으로 판단된다. 4. Cu15와 Cu25의 증체량은 대조군보다 높은 수준을 나타내었다. 특히 4주령시 증체율은 대조군에 비하여 4.8%와 4.5%높았다. ES2O군의 증체효과는 없었으며 ES 40군은 대조군보다 유의적으로 낮은 증체유을 보였다. 5. Cul5, Cu25, ES2O, ES4O군은 대조군에 비하여 높은 건강 수준을 유지하였으며 폐사율은 각각 1.9%, 1.9%, 2.9%와 1.0%로써 대조군의 4.8%에 비하여 낮은 수준을 보여 질병에 대한 저항능력이 향상되었다.
Spermatogonial stem cells은 sperrnatogenesis에서 중요한 역할을 하며, 곡세정관의 기저막에 위치하고 있는 것으로 알려져 있다. 그러나, 그 동안 이 세포에 특이하게 발현되는 marker가 거의 알려져 있지 않아 spermatogonial stem cell의 연구에 많은 어려움을 가져왔다. 최근 일반적인 stem cell이 갖는 특성 중, 기저막과 상호작용을 하는 surface protein으로 integrin이 존재한다는 사실을 이용하여, anti-$\alpha$$_{6}$/ 또는 anti-$\beta$$_1$ integrin항체로 germ cell을 선발하여 정소에 이식한 결과, 높은 효율로 이식세포유래의 정자발생이 가능하다는 결과가 보고되었다 (Shinohara et al., 1999). 한편, 항암제의 일종인 busulfan을 마우스에 투여(40mg/kg)한 후 4-5주가 경과하면 세정관의 기저막에 위치하는 spermatogonia를 제외하고 대부분의 생식세포는 소멸한다 본 실험의 목적은 이러한 사실들을 이용하여 spermatogonial stem cell의 특성을 밝히고, 이 생식세포를 보다 간편하고 손쉽게 선발할 수 있는 시스템을 확립하는데 있다. Busulfan처리 후 5주가 경과된 마우스와 정상적인 13주령의 마우스 testis로부터 세포를 분리한 후 FITC-conjugated anti-IgG를 이용한 면역형광법으로 측정.분석한 결과, 형광표식된 세포비율이 대조군과 비교하여 busulfan을 처리한 경우에서 유의적인 증가를 보였다.(17$\pm$3.8%. 0.7$\pm$0.3% busulfan vs control). 또한, IgG와 결합한 단백질이 존재하는 이들 세포들은 곡세정관의 기저막을 따라 위치하며, 단백질과 복합체를 형성한 IgG는 anti-Ig $G_{2a}$와 반응하지 않는다는 사실을 관찰했다. 이러한 IgG 복합체를 형성한 세포들의 특성을 이용하여, IgG와 반응을 하지 않는 것으로 확인된 이차 항체인 an1i-Ig $G_{2}$와 일차 항체인 anti-$\alpha$$_{6}$ 또는 anti-$\beta$$_1$ integrin항체를 이용하여 측정.분석하였다. Busulfan을 처리한 마우스 정소에서 분리한 세포를 다시 laminin으로 코팅된 dish에서 선발.회수해서, anti-lgG, anti-$\alpha$$_{6}$ 또는 anti-$\beta$$_1$ integrin항체로 각각 표식된 세포비율을 비교하였다. Laminin으로부터 선발.회수한 세포에서는 IgG복합체가 $\alpha$$_{6}$ 또 는 $\beta$$_1$integrin과 거의 같은 수준에서 높은 비율로 표식되었다. 결론적으로, busulfan에 의해 유도된 IgG와 결합가능한 단백질은 $\alpha$$_{6}$나 $\beta$$_1$ integrin과 마찬가지로 immunoglobulin G를 이용하여 spermatogonial stem cell의 선발을 가능하게 했다. 따라서, busulfan처리시 IgG는 미분화된 정조세포의 선발을 위한 하나의 marker로서 사용가능함을 시사한다.다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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