Sanghvi, Gaurav V.;Koyani, Rina D.;Rajput, Kishore S.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권5호
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pp.470-476
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2011
A potent fungus for amylase production, Chrysosporium asperatum, was isolated from among 30 different cultures obtained from wood samples collected in the Junagadh forest, India. All of the isolated cultures were screened for their ability to produce amylase by submerged fermentation. Among the selected cultures, C. asperatum (Class Euascomycetes; Onygenales; Onygenaceae) gave maximum amylase production. In all of the different media tested, potato starch was found to be a good substrate for production of amylase enzyme at $30^{\circ}C$ and pH 5.0. Production of enzyme reached the maximum when a combination of starch and 2% xylose, and organic nitrogen (1% yeast extract) and ammonium sulfate were used as carbon and nitrogen sources, respectively. There was no significant effect of metal ions on enzyme activity. The enzyme was relatively stable at $30^{\circ}C$ for 20 min, and no inhibitory effect of $Ca^{+2}$ ions on amylase production was observed.
The anti-complementary activity (immuno-stimulating activity) was tested for the exo-polymers (extra-cellular polymer) produced from submerged mycelial cultures of 21 types of higher fungi. Anti-complementary activity of the exo-polymer from Cordyceps militaris showed the highest (69.0%) followed by Pleurotus ostreatus (63.7%) and Trametes suaveolens (61.4%). The mycelial growth rate and biomass doubling time of C. militaris in a 5 I air-lift fermenter were 0.0255 $h^{-1}$ and 27.2 h, respectively. The yield of the exo-polymer produced from the culture broth of C. militaris was 2.95 mg of dry weight/ml of culture broth. Sugar and amino acid compositions of this exo-polymer were analyzed.
The anti-tumor effects of exo- (EX) and endo-biopolymers (EN) produced from submerged mycelial cultures of Ganoderma applanatum (GA), Collybia confluens (CC), and Pleurotus eryngii (PE) were studied using Sarcoma 180 bearing mice. Solid tumor growth was inhibited most effectively when 40 mg/kg body weight (BW) of GA-EX or PE-EN was administered to the intraperitoneal (i.p.) cavity of BALB/c mice. The spleen and liver indexes were increased in mice following i.p. administration of GA-EX and PE-EN fractions. GA-EX and PE-EN reduced the tumor formation by 30.7% and 29.4%, respectively. GA-EX and PE-EN increased the natural killer (NK) cell activity of splenocytes by 41.3% and 28.9%, respectively.
The effect of fermentation parameters and medium composition on the simultaneous mycelial growth and exo-polymer production from submerged cultures of Ganoderma applanatum was investigated in shake-flask cultures. The optimum initial pH for mycelial growth and exo-polymer production was 5.0 and 6.0, respectively. The optimum temperature was $25^{\circ}C$ and the optimum inoculum content was 3.0% (v/v). The optimal carbon and nitrogen sources were glucose and corn steep powder, respectively. After 12 days fermentation under these conditions, the highest mycelial growth was 18.0 g/l and the highest exo-polymer production was 3.9 g/l.
The behavior of Penicillium camembertii and Geotrichum candidum growing in submerged pure cultures on simple (glutamate) or complex (peptones) substrates as nitrogen and carbon sources and lactate as a second carbon source was examined. Similar to the behavior previously recorded on a simple substrate (glutamate), a clear differentiation between the carbon source and the energy source was also shown on peptones and lactate during P. camembertii growth, since throughout growth, lactate was only dissimilated, viz., used for energy supply by oxidation into $CO_2$, whereas peptides and amino acids from peptones were used for carbon (and nitrogen) assimilation. Because of its deaminating activity, G candidum preferred peptides and amino acids to lactate as energy sources, in addition to being assimilated as carbon and nitrogen sources. From this, on peptones and lactate, G candidum grew faster than P. camembertii (0.19 and 0.08 g/l/h, respectively) by assimilating the most readily utilizable peptides and amino acids; however, owing to its lower proteolytic activity, the maximum biomass was lower than that of P. camembertii (3.7 and 5.5 g/l, respectively), for which continuous proteolysis and assimilation of peptides were shown.
Submerged cultures of Ganoderma lucidum, a valuable mushroom in traditional Chinese medicine, were used for production of bioactive Banoderic acids and Ganoderma polysaccharides. The significant effects of oxygen supply were demonstrated in both shake flasks and bioreactors. By changing the medium loading volume in a shake flask, a different value of initial volumetric oxygen transfer coefficient ($K_L$a) was obtained, and a higher $K_L$a value led to a higher biomass density and a higher productivity of both intracellular polysaccharide and ganoderic acid. In a stirred bioreactor, at an initial $K_L$a of 78.2 $h^{-1}$, a maximal cell concentration of 15.6 g/L by dry weight was obtained, as well as a maximal intracellular polysarcharide (IPS) production of 2.2 g/L and its maximal productivity of 220 mg/(L.d). An increase of initial $K_L$a led to a higher production and productivity of GA, and the GA production and productivity at an initial $K_L$a of 96.0 $h^{-1}$ was 1.8-fold those at an initial $K_L$a of 16.4 $h^{-1}$. The fundamental information obtained in this study may be useful for efficient large-scale production of these valuable bioactive products by the submerged cultures.
뽕나무가루 첨가 배지에서 배양한 느타리버섯균사체 배양물의 조추출물이 자유라다칼로 유도한 linloeic acid의 산화를 대조구에 비해 75.9% 감소시켰고, mouse liver microsome산화에서도 NADPH/Fe$^{++}$ system에서 64.3% 감소시켰다. 이와 같은 효과는 조추출물로부터 용매분획한 분획물의 단독 효과보다 우수하였다. 상황 및 동충하초버섯균사체 배양물의 조추출물도 느타리 버섯균사체 배양물의 조추출물과 효과가 유사하였지만 다소 낮았다.
Methyl trans-cinnamate is a significant flavor compound of Tricholoma matsutake. Attempts were made to produce this compound by culturing the mycelium using submerged culture. No methyl trans-cinnamate could be detected when the mycelium was cultured in the basal liquid medium. However, the addition of Pinus desiflora extracts to the medium, methyl trans-cinnamate was largely produced. To find out compounds or fractions inducing methyl trans-cinnamate, dichloromethane fraction obtained from the wood extracts of P. densiflora was subjected to column chromatography. Three sub-fractions were obtained from the $CH_2CI_2$ fraction. Submerged cultured mycelium treated with sub-fraction 1 has the highest content of methyl trans-cinnamate. Maximum methyl trans-cinnamate $(470.2{\mu}g/g)$ was obtained when the first sub-fraction of dichloromethane fraction of the P. densiflora wood extracts was added to the medium. This indicates that wood extracts of P. densiflora contains inducer of the methyl trans-cinnamate production in the T. matsutake submerged culture.
Compounds from Lingzhi has been demonstrated the ability for inhibiting tyrosinase (a key enzyme in melanogenesis) activity. In this study, we investigated the anti-melanogenic activity from the submerged mycelial culture of Ganoderma weberianum and elucidated the skin lightening mechanism by B16-F10 murine melanoma cells. From the cellular context, several fractionated mycelium samples exhibited anti-melanogenic activity by reducing more than 40% extracellular melanin content of B16-F10 melanoma cells. In particular, the fractionated chloroform extract (CF-F3) inhibited both secreted and intracellular melanin with the lowest dosage (25 ppm). Further analysis demonstrated that CF-F3 inhibited cellular tyrosinase activity without altering its protein expression. Taken together, our study has demonstrated that the chemical extracts from submerged mycelial culture of G. weberianum have the potential to serve as an alternative anti-melanogenic agent.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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