당근 검은잎마름병을 일으키는 Alternaria dauci의 병원성 검정을 위해서는 양과 질이 우수한 포자를 형성할 수 있는 조건의 표준화가 필요하다. 따라서 본 실험에서는 배지의 종류, 통기 처리, UV 처리 등이 A. dauci KACC42997의 포자 형성에 미치는 효과를 조사하였다. A. dauci KACC42997은 25℃, 암 상태의 PDA 배지에서 7일간 전배양하였다. 배지 상에 나타난 병원균의 공중 균사를 제거하고, 20℃에서 통기 처리와 12시간 주기의 UV 처리를 동시에 실시하며 5일간 배양하였을 때, 가장 많은 포자를 형성하였다. 확립 포자 형성 조건에서 평창, 구미, 제주 등 당근의 주요 재배지역에서 분리한 170개의 다양한 A. dauci 균주가 포자를 형성하는지의 여부를 확인한 결과, 20개 균주가 포자를 형성하지 못하였고, 88.2%의 균주는 포자를 형성하였다. 또한 지역 균주 집단 간의 포자 형성량에는 차이가 있었지만, 당근에 대한 병원성에는 차이가 없었다.
This study characterizes the growth of white rot fungi Phanerochaete chrysosporium IFO 31249) and lignin peroxidase(LiP) activity in different submerged culture media. P. chrysosporium was grown in the form of pellet of various sizes from a spore inoculum under shaking liquid culture condition. While the growth of mycelia was higher under the nitrogen-sufficient culture than under the nitrogen-limited culture, ligninase activity was relatively lower. The lignin peroxidase appeared in nitrogen-limited culture and was suppressed by excess nitrogen. High level(40U/l) of lignin peroxidase activity was obtained in the growth medium containing 1.5mM veratryl alcohol, a secondary metabolite of P. chrysosporium. Lignin peroxidase production was not observed under conditions of nitrogen sufficiency or in balanced media, suggesting that control parameters could increase the activity by manipulating the secondary metabolism.
Mycobiota including Alternaria alternata, Fusarium verticillioides and Aspergillus pulverulents were tested for their ability to uptake radiocobalt(Co-60) and radiocesium(Cs-137) from radionuclide containing medium. A. alternata was the most efficient fungal species for uptake of radioisotopes, followed by A. pulverulents, whereas F. verticilliodies came in the last rank. The conditions of radioisotope uptake were optimized such as the form of the fungal organism either spores or mycelium, inoculum age and pH of growing medium. Furthermore the total pigments of the tested fungi were extracted and tested for their ability to bind with radioisotope, where melanin of A. alternata produced about 60% for radioisotope uptake out of total added radioisotope radioactivity. Moreover, transmission electron microscopic examination of radioisotope exposed spores showed high precipitation of melanin granules in the spore wall and within the cell as comparing to untreated spores.
본 실험에서는 microtiter plate를 이용하는 실내 검정법을 이용하여 고추 탄저병균의 기주체 침입 초기에 볼 수 있는 형태 변화인 포자 발아 및 부착과 균사 생장에 미치는 다양한 화합물의 활성을 대량으로 검정할 수 있는 방법을 확립하였고, 기존의 몇 가지 살균제가 가지는 고추 탄저병균의 초기 형태 분화 에 대한 억제 효과를 조사하였다. 본 실내 검정법을 표준화하기 위하여 MTT와 propanol 처리, 접종하는 포자의 농도, 배양 시간들이 병원균의 흡광도에 미치는 영향을 조사하였다. MTT를 12 시간, propanol을 1 시간 처리하였을 때, 그리고 JC24 의 포자를 $1\times10^5$개/mL의 농도로 접종하고 36 시간 배양하였을 때, 병원균의 흡광도가 일관성 있고 높게 나타났다. 살균제의 작용 특성을 알아보기 위해서 6종의 보호용 살균제, 6종의 스테롤 생합성 저해 살균제, 1종의 호흡저해제를 선발하여 microtiter plate 대량 검정 방법에서 효과를 조사하였다. 보호용 살균제 중에서 mancozeb, chlorothalonil, dithianone 등은 $6.25{\mu}g/mL$ 처리구에서도 포자의 발아, 부착과 균사의 생장을 모두 80% 이상 억제하였으나, propineb, iminoctadine, fluazinam 등은 $100{\mu}g/mL$의 처리를 2 시간만에 세척하였을 때 흡광도가 감소하는 것으로 보아 포자 부착 억제 효과는 적었다. 6종의 스테롤 생합성 저해제 중에서 hexaconazole, tebuconazole, myclobutanil 등은 포자의 발아와 균사 생육을 억제하고, 세척할 경우 JC24의 생육 억제 효과가 떨어지는 것을 보아 부착 억제 효과는 기대할 수 없었다. Nuarimol 은 $100{\mu}g/mL$로 처리한 고농도에서만 부착에 대한 억제 효과가 54.7%로 다른 억제 효과보다 우수하였으나, $6.25{\mu}g/mL$의 저농도로 처리하였을 때는 부착 억제 효과가 나타나지 않았다. Kresoxim-methyl은 6.25와 $100{\mu}g/mL$의 농도에서 포자 부착에 대한 억제율이 27.3%와 54.4%로 나타났는데, 처리하는 농도가 높아짐에 따라서 효과도 증가하였다. 이상의 결과와 같이 때 microtiter plate를 사용하여 병원균이 식물체를 침입하는 초기에 나타나는 포자 발아와 부착, 그리고 균사 생장을 검정할 수 있었으며, 본 실험 방법을 통하여 Kresoxim-methyl은 탄저병균의 포자 부착을 특이적으로 억제하는 효과가 있음을 알 수 있었다.
Fusarium oxysporum f. sp. conglutinans에 의해 발생하는 양배추 시들음병에 대한 효율적인 저항성 검정법을 확립하기 위하여, 시판 중인 9종 양배추 품종의 시들음병에 대한 저항성을 실험하고 이로부터 저항성 정도가 다른 5종 품종(YR호남, 오가네, 그린핫, 레드마트, 꼬꼬마)을 선발하여 뿌리 상처 유무, 포자현탁액에 침지하는 시간, 접종원 농도 및 재배 온도에 따라 이들 품종의 시들음병에 대한 저항성 반응의 변화를 조사하였다. YR호남과 오가네와 같은 고도의 저항성 품종들은 뿌리 상처 유무, 접종원 농도 및 포자현탁액 침지 시간에 따라 시들음병 발생에 큰 차이를 보이지 않았다. 그러나 이들은 재배 온도에 따라 시들음병 발병도에 큰 변화를 나타냈으며, $25^{\circ}C$에서 재배하였을 때 저항성과 감수성의 차이가 가장 컸다. 따라서 양배추 시들음병에 대한 저항성을 효과적으로 검정하는 방법으로 양배추 종자를 파종하여 14일 동안 재배한 양배추 유묘의 뿌리로부터 흙을 제거하고, 이들을 F. oxysporum f. sp. conglutinans의 포자가 ml 당 $1{\times}10^7$개 농도의 포자현탁액에 30분 동안 침지한 후 원예용 상토에 이식하고, $25^{\circ}C$ 생육상에서 3주 동안 재배하는 방법을 제안한다.
본 연구는 분무경 방식을 이용한 arbuscular 균근균 접종원의 대량배양증식을 위하여 기주식물의 종류와 분무양액의 P 농도 등에 따른 균근감염율 및 감염양상 변화 등을 비교하였다. 기주식물 선발에서는 고구마와 토마토가 수단그라스와 질경이에 비해 우수하였다. 또한 인산농도가 5 또는 $10{\mu}M$ 보다 $20{\mu}M$의 수준으로 높아질수록 뿌리의 생성량이 많아진 반면, 뿌리의 균근감염은 인산농도가 낮을수록 높고, 하부 뿌리로 갈수록 arbuscular 균근균 감염율이 낮아지는 경향을 보였으며 감염율은 18.6~26.0% 범위였다. 16주후의 포자형성을 조사한 결과 신선중 1 g 당 500개의 포자가 형성되었고, 분무생육상당 생산된 포자는 총830.479개였다.
2009년 전남 해남 지역의 논에서 벼 키다리병과 유사한 병징을 나타내는 피를 채집하여 병원균을 분리하였다. 이병 식물체는 줄기가 고사하여 하얗게 말라 죽고, 줄기 표면에 흰가루 모양의 포자가 형성되었다. 분리균은 균학적 특성과 분자생물학적 특성에 따라 Fusarium fujikuroi로 동정되었다. Translation elongation factor 1-alpha 유전자의 염기서열 분석 결과, GenBank에 등록된 F. fujikuroi와 상동성을 나타내었다. 벼와 피를 대상으로 침지접종에 의해 병원성을 확인하였으며, 이는 피가 벼 키다리병의 전염원으로서의 역할을 할 수 있음을 의미한다. 따라서 벼 키다리병의 방제와 건전종자의 채종을 위해서는 논에 발생한 이병식물체뿐 아니라 전염원으로 작용할 수 있는 피를 제거해야 할 것으로 생각된다.
피부사상균증의 접종방법을 표준화하기 위하여 N. gypsea "+"와 A. benhamiae "+"를 가토, 기니픽, rat, mouse에 정량적으로 접종하여 다음의 결과를 얻었다. 1. 포자의 농도가 높을수록 감염률이 높았고 입상양상이 심하고 일찍 나타나서 오래 지속되었다. 2. 난전, 소피, 강제발모, 단순빈도의 순으로 감염이 잘되어 피부손상의 정도에 비례함을 알 수 있었다. 3. 피부사상균에 대한 감수성은 기니픽, 가토, rat의 순으로 높았고 mouse는 전혀 감염되지 않았다. 4. N. gypsea "+"에 비해 A. benhamiae "+"는 감염률이 높고 입상양상이 더 심하고 빨리 진행되어 조기에 조절되었다.
Plasmodiophora brassicae에 의한 배추 뿌리혹병은 전 세계적으로 발생하여 큰 피해를 주고 있다. 본 연구에서는 관주 접종을 이용한 효율적인 배추 뿌리혹병 저항성 검정법을 확립하기 위하여, 레이스 9인 GN-1 균주를 사용하여 토양 종류, 접종원 농도, 배추 생육시기, 접종 후 배양 기간 등의 발병 조건에 따른 뿌리혹병 발생을 조사하였다. 혼합토양(원예용 상토:밭 토양=1:1, v/v)과 달리, 원예용 상토에서는 P. brassicae 접종농도가 증가함에 따라 배추 뿌리혹병 발생도 증가하였다. 접종원 농도는 폿트 당 $4.0{\times}10^8$개의 포자로 접종하였을 때 그리고 접종을 위한 배추는 파종 후 10일 유묘가 적합하였다. 안정적인 발병을 위해서, 접종한 배추 유묘는 3일 동안 $20^{\circ}C$ 생육상에서 하루에 12시간 광을 처리하며 배양한 후 온실($25{\pm}5^{\circ}C$)에서 5주 동안 재배한 후에 병조사하는 것이 요구되었다. 확립한 배추 뿌리혹병 저항성 검정법을 이용하여, 시판 중인 뿌리혹병 저항성 품종 25종과 감수성 품종3종의 P. brassicae GN-1 균주에 대한 저항성 정도를 실험한 결과, 모든 저항성 품종들은 뿌리혹병에 대하여 뚜렷한 저항성을 나타내었고, 감수성 품종들은 발병도 3.5 이상의 높은 감수성을 보였다. 따라서 이 방법은 배추의 뿌리혹병 저항성을 검정하기 위한 효율적인 검정법임을 알 수 있었다.
배추 뿌리혹병에 대한 효율적인 살균 활성 검정법을 확립하기 위하여, 배추 품종, 기주 식물의 생육 시기, 접종원 농도, 토양 종류 등의 발병 조건에 따른 살균제 fluazinam, ethaboxam 및 cyazofamid의 배추 뿌리혹병에 대한 방제 효과를 온실에서 실험하였다. 배추의 생육 시기에 따른 살균제들의 방제효과는 파종 7일 및 14일 유묘에서는 21일 유묘보다 더 높은 방제효과를 보였다. 그리고 토양종류에 따른 살균제의 방제효과는 원예용 상토보다 혼합토양에서 더 높은 방제효과를 나타냈다. 무처리구의 뿌리혹병 발생은 배추가 커질수록 증가하였으며, 혼합토양보다 원예용 상토에서 병 발생이 더 많았다. 그러나 배추품종에 따른 살균제들의 방제효과 차이는 거의 없었다. 한편 P. brassicae 포자 농도가 100배 증가하여도 무처리구의 뿌리혹병 발생은 거의 차이가 없었으나, 살균제들의 배추 뿌리혹병 방제효과는 크게 감소하였다. 이상의 결과로부터 살균제 fluazinam, ethaboxam 및 cyazofamid는 토양 종류, 배추 생육시기 및 접종원 농도 등의 발병 조건에 따라 배추 뿌리혹병에 대하여 다양한 방제효과를 보였으며, 이들 중 포자 농도가 살균제의 방제효과에 가장 큰 영향을 미친다고 생각되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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