Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), including naphthalene, are widely distributed in nature. Naphthalene has been regarded as a model PAH compound for investigating the mechanisms of bacterial PAH biodegradation. Pseudomonas sp. AS1 isolated from an arseniccontaminated site is capable of growing on various aromatic compounds such as naphthalene, salicylate, and catechol, but not on gentisate. The genome of strain AS1 consists of a 6,126,864 bp circular chromosome and the 81,841 bp circular plasmid pAS1. Pseudomonas sp. AS1 has multiple dioxygenases and related enzymes involved in the degradation of aromatic compounds, which might contribute to the metabolic versatility of this isolate. The pAS1 plasmid exhibits extremely high similarity in size and sequences to the well-known naphthalene-degrading plasmid pDTG1 in Pseudomonas putida strain NCIB 9816-4. Two gene clusters involved in the naphthalene degradation pathway were identified on pAS1. The expression of several nah genes on the plasmid was upregulated by more than 2-fold when naphthalene was used as a sole carbon source. Strains have been isolated at different times and places with different characteristics, but similar genes involved in the degradation of aromatic compounds have been identified on their plasmids, which suggests that the transmissibility of the plasmids might play an important role in the adaptation of the microorganisms to mineralize the compounds.
Simultaneous removal of ternary gases of $NH_3$, $H_2S$ and toluene in a contaminated air stream was investigated over 180 days in a biofilter. A commercially available inorganic/polymeric composite chip with a large void volume (bed porosity > 0.80) was used as a microbial support. Multiple microorganisms including Nitrosomonas and Nitrobactor for nitrogen removal, Thiobacillus thioparus (ATCC 23645) for $H_2S$ removal and Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15692), Pseudomonas putida (ATCC 17484) and Pseudomonas putida (ATCC 23973) for toluene removal were used simultaneously. The empty bed residence time (EBRT) ranged from 60 - 120 seconds and the inlet feed concentration was $0.0325\;g/m^3-0.0651\;g/m^3$ for $NH_3$, $0.0636\;g/m^3-0.141\;g/m^3$ for $H_2S$, and $0.0918\;g/m^3-0.383\;g/m^3$ for toluene, respectively. The observed removal efficiency was 2% - 98% for $NH_3$, 2% - 100% for $H^2S$, and 2% - 80% for toluene, respectively. Maximum elimination capacity was about $2.7\;g/m^3$/hr for $NH_3$, > $6.4\;g/m^3$/hr for $H_2S$ and $4.0\;g/m^3$/hr for toluene, respectively. The inorganic/polymeric composite carrier required 40 - 80 days of wetting time for biofilm formation due to the hydrophobic nature of the carrier. Once the surface of the carrier was completely wetted, the microbial activity became stable. During the long-term operation, pressure drop was negligible because the void volume of the carrier was two times higher than the conventional packing materials.
The degradation efficiency and catabolism pathways of the different methylxanthines (MXs) in isolated caffeine-tolerant strain Pseudomonas putida CT25 were comprehensively studied. The results showed that the degradation efficiency of various MXs varied with the number and position of the methyl groups on the molecule (i.e., xanthine > 7-methylxanthine ${\approx}$ theobromine > caffeine > theophylline > 1-methylxanthine). Multiple MX catabolism pathways coexisted in strain CT25, and a different pathway would be triggered by various MXs. Demethylation dominated in the degradation of N-7-methylated MXs (such as 7-methylxanthine, theobromine, and caffeine), where C-8 oxidation was the major pathway in the catabolism of 1-methylxanthine, whereas demethylation and C-8 oxidation are likely both involved in the degradation of theophylline. Enzymes responsible for MX degradation were located inside the cell. Both cell culture and cell-free enzyme assays revealed that N-1 demethylation might be a rate-limiting step for the catabolism of the MXs. Surprisingly, accumulation of uric acid was observed in a cell-free reaction system, which might be attributed to the lack of activity of uricase, a cytochrome c-coupled membrane integral enzyme.
자연환경으로부터 분리한 DJ-12 균주는 4CBA 및 4CB를 비롯하여 그 대사산물인 4OHBA와 PCA를 분해하여 단일 탄소원으로 이용하였다. DJ-12 균주에서 4CBA 및 4CB분해유전자는 약 65kb 크기의 plasmid인 pDJ121에 존재하였으며, 이 pDJ121은 ExoRI, HindIII, SalI 그리고 PslI의 절단부위를 각각 9, 11, 10 그리고 19개씩 가지고 있었다. EcoRI으로 처리한 pDJ121 절편을 pKT230에 ligation 시켜 재조합 vector인 pDK450을 만들었으며, 이를 Pseudomonas putida KT2440에 transformation 시켜 얻은 cloned cell 에서는 4CBA 분해유전자가 잘 발현되었다.
Three of the genus Pseudomonas (P. aeruginosa, P. putida, P. syringae) show highly different phenotypic characteristics among them. Two of the three members are pathogenic and the other is non-pathogenic. Comparative analyses of the complete genomes can elucidate the genomic similarities and differences among them. We analyzed the three genomes and the genes of them to reveal the degree of conservation of chromosomes and similarity of the genes. The 2-dimensional dot plot between the pathogenic P. aeruginosa and non-pathogenic P. putida shared higher portion of the nucleotide sequences than other two combinations. Comparison of the nucleotide compositions by calculating the genome-scale plot of G+C contents and GC skew showed the variation of location. Comparison of the metabolic capabilities using the functional classification of KEGG orthology revealed that the differences in the number of genes for the specific functional categories resulted in the phenotypic differences. Finally combination of the analyses using the protein homologs supported the evolutionary distance of the P. putida obtained from other genome-scale comparisons.
Pseudomonns putida BCNU171 had the tolerant ability to several other organic solvents headed by toluene and xylene. Several mutants were made by mating of BCNUl71, pJFF350 to clarify the structure tolerance gene related. From this mutants the 7 of mutants related with toluene sensitive mutants were selected. pBCNUT-2, pBCNUT-4, pBCNUT-9 was transformed, and from this separated plasmid DNA sequences the gene having high homology was searched. In the case of toluene sensitive mutant it was todX gene (pBCNU4) related with cell membrane, ttgE gene (pBCNU2, pBCNU9) and ttgF gene (pBCNU2, pBCNU9).
Plant-growth-promoting rhizobacteria can affect plant growth by various direct and indirect mechanisms. This study was conducted to determine the ability of some rhizobacterial strains to enhance the seed germination of Lactuca sativa (lettuce) and Raphanus sativus (radish). Seeds were inoculated using a spore suspension ($1{\times}10^7cfumL^{-1}$) and incubated in a growth chamber at $28^{\circ}C$ under dark conditions and 65% RH. Azotobacter chroococcum and LAP mix inoculation increased the plumule length of L. sativa by 1.3, 0.8, and 0.7 cm, respectively, in comparison to the uninoculated control. Pseudomonas putida showed an increase of only 0.6 cm in plumule length when compared to the control. Inoculation of A. chroococcum, P. putida, and LAP mix enhanced the seed germination rate of R. sativus, by 10, 5, and 30%, respectively, in comparison with the uninoculated seeds. The results demonstrated that the inoculation of seeds by select rhizobacterial strains showed remarkable enhancement to the radicle length of lettuce and radish seedlings.
A new 4.87 kb Escherichia-Pseudomonas shuttle vector has been constructed by inserting a 1.27 kb DNA fragment with a replication origin of a Pseudomonas plasmid pRO1614 into the 3.6 kb E. coli plasmid pBGS18. This vector, designated pJH1, contains an aminogly-coside phosphotransferase gene (aph) from Tn903, a lacZ' gene for $\alpha$-complementation and a versatile multiple cloning site possessing unique restriction sites for EcoRI, SacI, KpnI, SmaI, BamHI, XbaI, SalI, BspMI, PstI, SphI, and HindIII. When pJH1 was transformed into E. coli DHS${\alpha}$ and into P. putida HK-6, it was episomally and stably maintained in both strains. In addition, the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene which was transcriptionally cloned into pJH1 rendered E. coli cells fluorescence when its transformants were illuminated at 488 nm.
Growth rates of the low temperature growing isolates, Pseudomonas fluorescens M45 and MC07, reached maximum stationary phase within 50 hrs at the low temperature, 4$^{\circ}C$. But an ordinary biocontrol agent P. putida Pf3 did not reach logarithmic growth phase until 80 hrs. The culture filtrates of M45 and MC07 significantly inhibited the mycelial growths of Pythium ultimum, Rhizoctonia solani and Phytophthora capsici. Detached cotyledons of cucumber grown on Murashige and Skoog agar medium were much enhanced in their growth, compared to those without the filtrates. Population densities of M45 and MC07 in the rhizosphere at 14$^{\circ}C$ were more stable than at 27$^{\circ}C$. When M45 and MC07 were treated into soil, the population density of MC07 continuously increased up to 9 days after treatment, and sustained the initial inoculum density up to 60 days. Cucumber damping-offs caused by P. ultimum and R. solani were significantly reduced by applying M45 as seed-inoculant and by soil treatment with MC07. The combined treatment of M45 and MC07 provided greater effect in reducing the disease incidence than that obtained by single treatments.
유단백질에서 유래된 아미노산은 주로 L-이성체의 형태로 존재하나 일부 미생물 세포벽의 구성성분과 일부 항생물질내 D-amnio acid(DAA)가 존재하고 있는 것으로 보고 되고 있으며 이는 유제품의 품질저하와 연관된다. 따라서 이 연구는 품질저하와 연관된다. 따라서 이 연구는 내냉성미생물 P. fluorescens와 P. putida에 의한 DAA 생성에 관해 실험하였다. 상업용 혼합 유산균주인 ABT-C를 접종하여 발효시간대별로 free D-amino acid를 분석하였으며, 실험결과 전체적인 DAA 함량은 매우 낮은 수준이고, 특히 발효시간대별 변화가 크게 없어 유산균의 증식에 의한 DAA의 생성은 매우 미미한 것으로 나타났고, 또한 일부 L-amino acid의 경우 유산균의 생육에 이용되는데 DAA의 경우 발효시간대별 함량이 큰 변화가 없는 것으로 보아 유산균의 이용성 역시매우 낮은 것으로 생각된다. 원유에서 분리한 P. fluorescens와 P. putida를 접종하여 배양시간대별로 free D-amino acid를 분석하였으며 실험결과 두 처리구 모두 배양시간에 따라 DAA의 생성이 증가되는 경향을 나타내었으며, P. putida의 경우 P. fluorescens에 비해 D-Pro의 증가량이 상대적으로 높게 나타났으나 나머지 4종은 P. fluorescens에 의한 생성량이 더욱 높게 나타났고, 특히 유해성이 높은 것으로 보고된 D-Asp 및 D-Ala의 함량이 매우 높게 나타났다. 따라서 DAA는 내냉성미생물에 의한 품질저하 지표로서 이용가능성과 더불어 인체의 유해성에 대한 위험성을 배제하는 차원에서도 매우 중요하게 인식되어야 할 것으로 사료된다
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[게시일 2004년 10월 1일]
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