• 제목/요약/키워드: proteinase K

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비스테로이드성 항염증제와 효소 억제제에 의한 사람 중성구 Elastase의 활성도 억제 및 분자약리학적 기전 (Inhibition of Human Neutrophil Elastase by NSAIDs and Inhibitors, and Molecular Pharmacological Mechanism of the Inhibition)

  • 강구일;김우미;홍인식;이무상
    • 대한약리학회지
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    • 제32권3호
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    • pp.425-431
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    • 1996
  • 염증 질환의 원인이 되는 사람 중성구 elastases는 혈액에 존재하는 ${\alpha}_1-PI$${\alpha}_2-macroglobulin$과 같은 단백질 분해효소 억제제에 의하여 조절되어진다. 그러나 특수한 병리적 상황에서 과다하게 분비되는 효소나 또는 단백질 분해효소 억제제의 비정상적 작용으로 말미암아 다양한 염증질환이 유발된다. 비스테로이드성 항염증제는 염증 질환을 치료하기 위하여 이미 임상에 적용 하고 있으며, prostaglandin 합성하는 효소인 cyclooxygenases의 활성도를 억제하는 것이 그 작용 기전으로 잘 알려져 왔다. 사람 중성구 elastase의 활성도는 naproxen, phenylbutazone, oxyphenbutazone 등에 의하여 억제되었으나, ibuprofen, ketoprofen, aspirin, salicylic acid, tolmetin 등에 의하여서는 억제되지 않았다. 또한 사람 중성구 elastase의 활성도는 EDTA, EGTA, tetracycline 등에 의하여서도 억제되었다. EDTA에 의하여 2가 이온 $Ca^{++}$$Zn^{++}$등을 elastase 분자로부터 일부 제거함으로 효소 활성도가 억제되었고 Raman spectra의 변화도 강하게 일어났으며, 금속이온 $Zn^{++}$를 새로 충진함으로 그 활성도는 원래대로 회복되고 Raman spectrum도 원래 상태와 유사한 상태로 회복되었다. 이런 현상은 chelator나 chelator-like agents가 효소분자안에 존재하는 $Zn^{++}$ 이온을 제거하거나 chelation함으로 활성 부위나 그 인접 부위의 4차원 구조의 변화를 일으켰음에 기인하며 특히 -C=O나 -COOH기의 관여에 의한 것으로 생각된다.

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비단백질성 항균물질을 생산하는 김치발효용 내산성 Hetero 발효형 유산균주 선발 (Selection of Acid-tolerant and Hetero-fermentative Lactic Acid Bacteria Producing Non-proteinaceous Anti-bacterial Substances for Kimchi Fermentation)

  • 김혜림;이종훈
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제41권1호
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    • pp.119-127
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    • 2013
  • 선행연구에서 김치발효 후기의 우점종으로 알려진 Lactobacillus sakei의 생육을 저해하는 Leuconostoc 속 23균주와 Weissella 속 45 균주를 김치로부터 분리, 동정하였다. 발효 후기까지 생존할 수 있는 김치발효용 hetero 발효형 종균 선발을 위하여 이들 균주에 대한 내산성을 평가한 결과, Lc. mesenteroides CK0128, W. cibaria CK0633, W. cibaria KK0797 균주가 acetic acid와 lactic acid 혼합용액을 이용하여 pH를 4.3으로 조정한 MRS broth에서 상대적으로 높은 생존율을 보였고, 다량의 세포 외 다당류를 생산하였다. 세균주가 생산하는 항균물질의 분자량은 3,000 Da 이하로 추정되며 Staphylococcus aureus와 Lb. sakei에 대한 생육저해를 나타내었다. 분획한 3,000 Da 이하의 조항균물질 모두가 $121^{\circ}C$, 15분의 열처리에도 항균활성을 유지함으로써 항균물질의 열에 대한 높은 안정성이 확인되었다. pH의 감소에 따른 항균활성의 증가가 pH 5 이하의 산성조건에서 확인되어, 이들 항균물질은 pH 5 이하의 산성조건에서 활성을 갖는 것으로 추정된다. ${\alpha}$-amylase, lipase, pepsin, proteinase K 처리가 항균활성에 아무런 영향을 미치지 않는 것으로 보아 이들 균주가 생산하는 항균물질은 탄수화물, 지질을 포함하지 않으며, 비단백질성 물질로 추정된다. 또한, 선발균주가 생산하는 비단백질성 항균물질은 식중독균의 생육을 효과적으로 저해하였다.

한국의 임상과 자연환경에서 분리된 Cryptococcus neoformans의 혈청형과 효소생성능 (Serotype and Enzymatic Profile of Crypfococcus neoformans Isolates from Clinical and Environmental Sources in Korea)

  • 황수명;오광석;이경원
    • 미생물학회지
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    • 제42권4호
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    • pp.257-264
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    • 2006
  • 한국의 임상검체와 자연환경에서 분리된 Cryptococcus neoformans 58주에 대한 혈청형과 세포외효소 생성능에 관한 셍물학적 특성을 조사하였다. 환자로부터 분리된 임상균주 51주 중 48주는 혈청형 A (94.1%) 였으며 2주는 혈청형 B (3.92%),그리고 나머지 1주는 혈청형 D (1.96%)였다. 자연환경에서 분리된 7주는 비둘기 분변에서 분리된 것들이며 모두 혈정형 A였다. 모든 균주는 proteinase와 phnospholipase를 생성하였고, 또한 API-ZYM system을 이용한 19종류의 효소생성능 시험에서는 alkaline phosphatase, esterase (C4), esterase lipase (C8), leucine arylamidase, acid phosphatase, naphthol-AS-BI-phosphohydrolase, $\alpha$-glucosidase, 그리고 $\beta$-glucosidase를 생성하였으나, N-acetyl-$\beta$-glucosarninidase는 39주 (67.2%)에서만 생성하였다. 혈청형 B로 동정된 2주와 혈청형 A로 동정된 균주중 1주는$\beta$-glucuronidase를 생성하였다. 본 연구에 사용된 총21종류의 효소 생성능 시험을 기초로 하여 생물형을 구분하였는데, 모두 4가지의 유형을 나타내었고, 또한 임상과 환경균주에서 혈정형과 생물형 특성간의 유의한 상관성를 나타내었다.

Meat Tenderizer 제조에 관한 연구 -(제1보) 시판(市販) meat tenderizer의 연육효과- (Study on Meat Tenderizer -Part 1. Tenderizing ability of commercial meat tenderizer-)

  • 양융;김건화;이정희;윤정의;유주현
    • 한국식품과학회지
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    • 제7권4호
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    • pp.221-228
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    • 1975
  • 고기는 그 품질은 논할 때 tenderness가 주요 항목이 된다. 따라서 외국에서는 일찍부터 meat tenderizer의 개발이 활발하게 이루어져 plant origin proteolytic enzyme이 많이 이용되어 왔다. 우리나라에서는 오랫동안 역우(役牛)로써 사용되어온 소를 도살하여 우육(牛肉)을 공급하는 비율이 크므로 질이 낮은 우육(牛肉)을 이용할 때는 특히 meat tenderizer의 이용이 바람직하다고 생각된다. 이러한 관점에서 보다 효과적이고 가격이 저렴한 meat tenderizer의 제조가 요청되므로 본 연구실에서는 그 제조연구를 위한 조사연구로 시판(市販) meat tenderizer의 연육효과에 대하여 검토하여 보았다. 1. Commercial meat tenderizer의 protein함량은 4.9%(Kjeldahl법(法))로 $E^{1%}_{1cm}\;basis$로 계산하면 $1{\sim}2%$에 지나지 않았다. 2. 기질과 연육소의 비율이 4 : 1, 온도가 $40^{\circ}C$ 이상에서 연육효과를 인정할 수 있었다. 3. 시판(市販) meat tenderizer의 substrate-selectivity는 $casein{\gg}$ water-soluble muscle protein> myofibrillar protein의 순으로 보다 개량된 meat tenderizer의 제조가 요구된다고 생각되었다.

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Effects of Nutritional Level on Digestive Enzyme Activities in the Pancreas and Small Intestine of Calves Slaughtered at Same Body Weight

  • Wang, X.B.;Ogawa, T.;Suda, S.;Taniguchi, K.;Uike, H.;Kumagai, H.;Mitani, K.
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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    • 제11권4호
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    • pp.375-380
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    • 1998
  • Six Holstein heifer calves weaned at 45 days-of-age were randomly allocated into high daily gain (1.1 kg/d, HDG) and low daily gain (0.56 kg/d, LDG) groups, and were slaughtered at 170 kg of live weight. Energy intake level in the feeding period was 2.4 $\times$ maintenance in 105 days for HDG and 1.4 $\times$ maintenance in 216 days for LDG calves. Total length of the small intestine was identical between groups, but both weights of the pancreas and of the small intestinal mucosa were greater (p < 0.01) for HDG calves. Alpha-amylase, lipase, proteinase, and trypsin activities of the whole pancreas were higher (p < 0.05) in HDG calves. Disaccharidase activity of the whole small intestinal mucosa was also higher (p < 0.10) for HDG than for LDG calves. However, the enzymatic activities, expressed as per gram or per protein of the pancreas and the small intestinal mucosa, were not affected (p > 0.10) by the plane of nutrition. These results suggest that the digestive enzyme activity in the small intestine varies primarily with the weight of tissues synthesizing the enzyme.

Isolation and Characterization of an Anti-listerial Bacteriocin from Leuconostoc lactis SD501

  • Hwang, In-Chan;Oh, Ju Kyoung;Kim, Sang Hoon;Oh, Sejong;Kang, Dae-Kyung
    • 한국축산식품학회지
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    • 제38권5호
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    • pp.1008-1018
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    • 2018
  • Although bacteriocins with anti-listerial activity have been isolated from a wide variety of lactic acid bacteria, little is known about those from Leuconostoc lactis, a heterofermentative bacterium that produces diacetyl and exopolysaccharides in dairy foods. In this study, an anti-listerial bacteriocin was isolated from Leuc. lactis SD501 and characterized. It was particularly potent against Listeria monocytogenes and also inhibited Enterococcus faecalis. Anti-listerial activity reached a maximum during the early stationary phase and then decreased gradually. The anti-listerial substance was sensitive to proteinase K and ${\alpha}$-chymotrypsin, confirming its proteinaceous nature. Its activity remained stable at pH values ranging from 1 to 10. In addition, it was strongly resistant to high temperatures, retaining its activity even after incubation for 15 min at $121^{\circ}C$. The apparent molecular mass of the partially purified anti-listerial bacteriocin was approximately 7 kDa. The characteristics of the SD501 bacteriocin, including its small molecular size (<10 kDa), strong anti-listerial activity, wide pH stability and good thermostability, indicate its classification as a Class IIa bacteriocin.

Two- Dimensional Electrophoresis Analysis of Proteins; Bacillus subtilis LTD and Its Antifungal Activity Deficient Mutant

  • Lee, Young-Keun;Dinh, Le Thi;Jang, Yu-Sin;Chung, Hye-Young;Chang, Hwa-Hyoung
    • 환경생물
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    • 제22권4호
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    • pp.487-493
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    • 2004
  • To investigate the antifungal activity related protein in pesticidal bacteria, a bacterial strain LTD was isolated from soil collected at Gimje in Jeonbuk province, Korea, and identified as Bacillus subtilis LTD based on a API50 CHB kit and 168 rDNA sequencing. It has an antifungal activity against 9 plant pathogenic fungi in a paper disc assay. The antifungal activity- deficient mutant, B. subtilis mLTD was induced at a 5 kGy dose of $^{60}Co$ gamma radiation. Using the two-dimensional electrophoresis and the matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, the comparison analysis of proteins between the wild and mutant were performed. A major intracellular serine proteinase IspA (MW: 32.5 kDa), a NAD (P) H dehydrogenase (MW: 20.0 kDa), and a stage II sporulation protein AA, SpoIIAA (MW: 14.3kDa) were detected only in the B. subtilis LTD. These results suggested that the functions of these proteins found only in the B. subtilis LTD could. be closely related to the antifungal activity against plant pathogenic fungi.

Intestinal Absorption of Fibrinolytic and Proteolytic Lumbrokinase Extracted from Earthworm, Eisenia andrei

  • Yan, Xiang Mei;Kim, Chung-Hyo;Lee, Chul-Kyu;Shin, Jang-Sik;Cho, Il-Hwan;Sohn, Uy-Dong
    • The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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    • 제14권2호
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    • pp.71-75
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    • 2010
  • To investigate the intestinal absorption of a fibrinolytic and proteolytic lumbrokinase extracted from Eisenia andrei, we used rat everted gut sacs and an in situ closed-loop recirculation method. We extracted lumbrokinase from Eisenia andrei, and then raised polyclonal antibody against lumbrokinase. Fibrinolytic activity and proteolytic activity in the serosal side of rat everted gut sacs incubated with lumbrokinase showed dose- and time-dependent patterns. Immunological results obtained by western blotting serosal side solution using rat everted gut sacs method showed that lumbrokinase proteins between 33.6 and 54.7 kDa are absorbed mostly by the intestinal epithelium. Furthermore, MALDI- TOF mass spectrometric analysis of plasma fractions obtained by in situ recirculation method confirmed that lumbrokinase F1 is absorbed into blood. These results support the notion that lumbrokinase can be absorbed from mucosal lumen into blood by oral administration.

Identification and Partial Characterization of Cerein BS229, a Bacteriocin Produced by Bacillus cereus BS229

  • Paik, Hyun-Dong;Lee, Na-Kyoung;Lee, Kwang-Ho;Hwang, Yong-Il;Pan, Jae-Gu
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제10권2호
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    • pp.195-200
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    • 2000
  • Bacillus cereus BS229 was identified as a bacteriocin producer with a bactericidal activity against Bacillus thuringiensis subsp. Thomsoni BR-40. Bacillus cereus BS229 and cerein BS229, named tentatively as the bacteriocin produced by Bacillus cereus BS229, showed a narrow spectrum of actibity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, along with yeast and molds. Production of cerein BS229 in a 5-1 fermenter followed typical kinetics of primary metabolite synthesis. The antibacterial activity of cerein BS229 on sensitive indicator cells disappeared completely by ${\alpha}-chmotrypsin$ or proteinase K, which indicates its proteinaceous nature. Cerein BS229 seemed to be very stable throughout the pH range of 2.0 of 9.0 and it was relatively heat labile, despite the fact that bacteriocin activity was still detected after being boied for 30min. Cerein BS229 actibity has been changed with some of the organic solvents such as toluene, ethanol, and chloroform. Direct detection of cerein BS229 actibity on SDS-PAGE suggested that it had an apparent molecular mass of about 8.2 kDa.

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혈합육어의 조직중에 분포하는 단백질분해효소 1. 고등어와 정어리 육조직중의 단백질분해효소의 활성비교 (Proteolytic Enzymes Distributed in the Tissues of Dark Fleshed Fish 1. Comparison of the Proteolytic Activity of the Tissue Extracts from the Meat of Mackerel and Sardine)

  • 변재형;김형낙;조진건
    • 한국수산과학회지
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    • 제19권5호
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    • pp.469-476
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    • 1986
  • 고등어와 정어리의 보통육과 혈합육의 각 조직에 분포하는 단백질분해효소의 최적활성조건을 구명하고 열안정성과 저온저장중의 활성변화 등을 비교${\cdot}$검토한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 고등어와 정어리의 보통육 및 혈합육에서 단백질분해효소를 추출하여 pH에 따른 단백질분해능을 분석한 결과, 산성, 약산성 및 알칼성에서 활성을 보이는 세 종류의 단백질분해효소가 분포하고 있음을 알았다. 그리고 이들 각 분포효소중에서 산성단백질분해효소가 가장 활성이 강하였으며, 고등어에 있어서는 보통육에서 추출한 것이 pH 3.0, $50^{\circ}C$의 활성최적조건에서 고유활성은 0.12였으며, 혈합육에서 추출한 것은 pH3.0, $45^{\circ}C$의 활성최적조건에서 고유활성은 0.36이었다. 정어리의 보통육과 혈합육에서 추출한 단백질분해효소의 활성최적조건은 모두 pH 2.4, $45^{\circ}C$였으며, 그때의 고유활성은 각각 0.45 및 0.24였다. 2. 고등어와 정어리의 보통육과 혈합육에 분포하는 단백질분해효소액을 $30^{\circ}C$부터 $70^{\circ}C$까지의 온도에서 5분간 가열처리한 결과, 고등어의 혈합육에서 추출한 효조소는 $55^{\circ}C$에서 실활하기 시작하였으나, 그 밖의 조직에서 추출한 조효소는 $50^{\circ}C$에서 실활이 일어났다. 3. 추출된 조효소액을 $5^{\circ}C$$-15^{\circ}C$에서 저장하는 중에 활성의 변화를 검토한 결과, 육에서 추출한 조효소액은 시일의 경과와 더불어 실활이 일어나 저장 28일까지 대부분의 효소활성이 소실되었으며 방부제의 첨가효과는 나타나지 않았다.

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