• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제16권5호
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• pp.361-365
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• 2012

Anti-tumor activity of the proteins from Gecko (GP) on cervical cancer cells, and its signaling mechanisms were assessed by viable cell counting, propidium iodide (PI) staining, and Western blot analysis. GP induced the cell death of HeLa cells in a dose-dependent manner while it did not affect the viability of normal cells. Western blot analysis showed that GP decreased the activation of Akt, and co-administration of GP and Akt inhibitors synergistically exerted anti-tumor activities on HeLa cells, suggesting the involvement of PI3-kinase/Akt pathway in GP-induced cell death of the cancer cells. Indeed, the cytotoxic effect of GP against HeLa cells was inhibited by overexpression of constituvely active form of Akt in HeLa cells. The candidates of the functional proteins in GP were analyzed by Mass-spectrum. Taken together, our results suggest that GP elicits anti-tumor activity against HeLa cells by inhibition of PI3-kinase/Akt pathway.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제21권3호
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• pp.171-180
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• 2006

Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma$(PPAR{\gamma})$ 는 DNA와 결합하기 위해 retinoid-X receptor(RXR)와 heterodimer를 형성해야만 한다. 그리고 전사에 대한 최대활성은 수용체에 대한 리간드 특이성에 의하는 것으로 생각되고 있다. 활성화된 $(PPAR{\gamma})$ 와 $(PPAR{\gamma})$ 리간드는 종양억제 PTEN의 조절을 통해 종양세포의 성장에 영향을 끼치게 된다. 본 연구의 목적은 $(PPAR{\gamma})$ ligand, ciglitazone그리고 RXR ligand로 동시에 자극하였을 때 급성전골수성백혈병(APL) 세포에 대해 이들이 함께 PTEN upregulate를 조절할 수 있는지를 결정하기 위함이다. 그리고 이들 세포의 성장과 분화주기에 대해 강력한 억제 능이 있는지를 결정하고자 하였다. 즉, 사람의 백혈병세포주인 HL-60세포에 all-trans-retinol과 ciglutazone을 노출시킨 뒤 PTEN 발현에 대한 측정을 위해 RT-PCR법으로 PTEN mRNA 발현 정도를 확인하고 western blot으로 분석하였다 세포주기의 분석은 propidium iodide(PI) 염색법과 FACScan으로 분석하였고, HL-60 cells에서 $(PPAR{\gamma})$ ligand, ciglitazone, 그리고 RXR ligand, retinoic acid 그리고 upregulated PTEN 발현에 대한 time- and dose-dependent방법으로 각각 확인하였던 바 ciglitazone과 retinoic acid를 동시 조합하여 처치하였을 때 유의적인 효과를 인정할 수 있었다. 더욱이 이들 혼합 물질은 세포의 성장과 G, phase를 동시 억제하는 능력이 있었다. 그러므로 $(PPAR{\gamma})$의 활성에 있어 RXR heterodimer가 사람의 백혈병세포에 대한 조절 경로로서 존재하며, PTEN의 upregulation을 통해 백혈병을 조절하기 때문에 백혈병의 예방 및 치료 접근에 $(PPAR{\gamma})$와 RXR ligands가 중요한 역할을 할 것이다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제57권2호
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• pp.113-122
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• 2014

A5E is complex of several medicinal herb ethanol extracts. The aim of this study is investigating the anticancer effect for non-small cell lung cancer. The antitumor effects of A5E on NCI-H460 were examined by regulation of cell proliferation, apoptosis, cell cycle arrest, mitochondrial membrane potential (${\Delta}{\Psi}_m$), and apoptosis-related protein. Cell proliferation was measured by MTS assay. Apoptosis induced by A5E was confirmed by Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC)/Propidium Iodide (PI) staining, and cell cycle arrest was measured by PI staining. NF-${\kappa}B$ translocation was detected by immunofluorescence and MMP (${\Delta}{\Psi}_m$) was measured by JC-1 staining. The expression of extrinsic pathway molecules such as FasL and FADD were elevated, and procaspase-8 was processed by A5E. In addition, intrinsic pathway related molecules were altered. The Bcl-2 and Bcl-xl levels decreased, Bax increased, and cytochrome C was released. In addition, the mitochondrial membrane potential collapsed, and caspase-3 and poly-(ADP-ribose) polymerase were processed by A5E. Moreover, A5E affected the cellular survival pathway involving phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt and NF-${\kappa}B$. PI3K and Akt were downregulated, also NF-${\kappa}B$ expression was decreased, and nuclear translocalization was inhibited by A5E. These results suggested that A5E delays proliferation, inhibit cell cycle progression and induce apoptosis in human lung cancer cell. We conclude that A5E is a potential anticancer agent for human lung carcinoma.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제51권10호
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• pp.1112-1117
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• 2008

목 적: 해마 절편 배양에서 산소-포도당 박탈(oxygen-glucose deprivation, OGD)에 의한 세포 사망과 신경 세포 사멸을 propidium iodide(PI) 섭취, Fluoro-Jade(FJ) 염색, TUNEL 염색, caspase-3 면역형광염색 방법으로 관찰하고자 하였다. 방 법: 생후 7일된 Sprague-Dawley 흰쥐의 해마를 MacIlwain chopper로 $350{\mu}m$ 두께의 절편으로 절단하였다. 해마 절편을 6-well plate의 insert 내의 반 유공(sem-porous) 막 위에서 membrane-interface technique으로 10일 동안 배양하였다. 배양된 해마 절편에 산소-포도당 박탈을 60분 동안 가한 후 재산소-재관류하에 기초 배양액에서 48시간 배양하였다. 재산소-재관류 동안 PI 섭취 형광 정도를 시간에 따라 형광 현미경으로 관찰하고 세포사망 백분율(percent cell death)을 측정하였다. 산소-포도당 박탈 직전과 24 시간 후에 해마 절편을 $15{\mu}m$ 두께로 냉동 절단 후 FJ 염색, TUNEL 염색, caspase-3 면역형광염색을 시행하여 세포 사망을 관찰하였다. 결과: OGD 후 PI 섭취 는 해마 절편의 CA1과 DG에 한정되어있었다. OGD 후 재산소-재관류 동안 6시간에서 48시간까지 PI 섭취 형광 강도는 시간이 증가함에 따라 증가하였다. 세포 사망 백분율은 CA1과 DG에서 모두 OGD 후 재산소-재관류 시간이 증가함에 따라 의미 있게 증가하였다(P<0.05). OGD 후 24시간에 세포 변성을 의미하는 많은 FJ 염색 양성 신경 세포 들이 CA1과 DG에서 관찰되었다. 고배율 confocal laser 현미경으로 관찰한 CA1에서의 신경 세포들 중 일부는 명확한 핵과 돌기를 가지고 있는 것을 보여 주었으며, 다른 신경 세포들은 핵의 분절화, 돌기의 손실 등을 보여 주었다. TUNEL 염색과 caspase-3 염색은 OGD 후 24시간에 CA1과 DA에서 TUNEL 양성 발현을 증가시키고 caspase-3 발현을 증가시켰다. 결 론: 해마 절편 배양에서 산소-포도당 박탈 에 의한 다수의 세포 사망을 관찰할 수 있었다. 사망한 세포 들은 주로 신경 세포의 caspase-3 활성화에 의해 매개된 사멸을 보였다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권3호
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• pp.167-172
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• 2004

Flow cytometry를 이용하여 개 정자의 생존율 평가를 수행하고자 2-4세의 수캐 5두가 이용되었고, 분석을 위해 PI염색을 실시하였다. Flow cytometry를 이용한 개 신선 정액의 생존율 평가는 생존 정자와 죽은 정자의 비율을 1:0, 1:1, 1:3으로 조성하여 이를 flow cytometry로 평가하고 광학현미경검사, CFDA/PI 염색검사, HOS test에 의한 생존율과 비교하여 flow cytometry와의 상관관계를 알아보았다. 또한 개 정액을 동결하여 응해 후의 개 정자의 생존율 평가에도 동일한 방법으로 상관관계를 조사하였다. 신선 정액에서 생존 정자와 죽은 정자의 비율이 1:0, 1:1, 1:3 모든 경우에서 flow cytometry를 이용한 생존율은 HOS test에 의한 생존율과 높은 상관관계를 나타내었다 (p<0.01). 신선 정액에서 생존 정자와 죽은 정자의 비율이 1:0과 1:3일 때 광학현미경적 검사에 의한 생존율은 flow cytometry 분석에 의한 생존율과 유의 적인 상관관계를 나타내었으나 (p<0.05), 1:1 비율의 경우 상관관계를 보이지 않았다. 신선 정액에 생존 정자와 죽은 정자의 비율이 1:0과 1:1일 때 CFDA/PI 염색 검사에 의한 생존율은 flow cytometry분석에 의한 생존율과 높은 상관관계를 보였으며(p<0.01), 1:3 비율에서는 유의적인 상관관계를 보였다 (p<0.05). 동결 및 응해 후의 개 정자의 생존율 평가에서 HOS test 결과는 flow cytometry분석에 의한 생존율과 높은 상관관계를 보였으며 (p<0.01), 광학현미경적 검사를 통한 생존율은 유의적인 상관관계를 보였으나 (p<0.05), CFDA/PI 염색 검사결과는 상관관계를 보이지 않았다. 이상의 결과 flow cytometry는 신선정액 및 동결 융해 후 개 정자에 대한 생존율 검사에 정확한 평가 방법 인 것으로 판단되었다.

• 대한한방내과학회지
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• 제25권4호
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• pp.227-241
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• 2004

Objective : This study was performed to investigate neuroprotective effects of Bupleuri Radix against oxidative and ischemic damages. Method : To observe the neuroprotective effects against ischemic damage, ischemic insult was induced by oxygen/glucose deprivation (OGD) on organotypic hippocampal slice cultures (OHSC) from 1 week-old Sprague-Dawley rats. Propidium iodide (PI) fluorescence-stained neuronal dead-cell areas, area percentages and TUNEL-positive apoptotic cells in CA1 and dentate gyrus, and LDH levels in culture media of the OHSC were measured following Bupleuri Radix extract treatment. Result : The following results were obtained: (1) The $5\;{\mu}g/ml$ of Bupleuri Radix treatment demonstrated a significant decrease in PI fluorescence-stained neuronal dead-cell areas and area percentage in CA1 region of the OHSC from 18 hrs to 48 hrs following the OGD. The $50\;{\mu}g/ml$ of Bupleuri Radix treatment was also significant from 6 hrs to 48 hrs following the OGD and was more effective. (2) The 5 and $50\;{\mu}g/ml$ of Bupleuri Radix treatment demonstrated a significant decrease in PI fluorescence-stained neuronal dead-cell areas and area percentage in DG region of the OHSC from 6 hrs to 48 hrs following the OGD. The $50\;{\mu}g/ml$ treatment was more effective than the $5\;{\mu}g/ml$ treatment. (3) Bupleuri Radix treatment demonstrated a significant decrease in TUNEL-positive apoptotic cells in CA1 region (with 5 and $50\;{\mu}g/ml$) and in DG region (with $50\;{\mu}g/ml$) of the OHSC damaged by the OGD. (4) Bupleuri Radix treatment demonstrated a significant decrease in LDH concentrations in culture media of the OHSC damaged by the OGD. Conclusion : These results suggest that Bupleuri Radix has neuroprotective and control effects on inflammatory and immune responses where there has been ischemic damage to the central nervous system.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제17권7호
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• pp.3289-3294
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• 2016

Naringin, a bioflavonoid found in Citrus seeds, inhibits proliferation of cancer cells. The objectives of this study were to investigate the mode and mechanism(s) of hepatocellular carcinoma HepG2 cell death induced by naringin. The cytotoxicity of naringin towards HepG2 cells proved dose-dependent, measured by MTT assay. Naringin-treated HepG2 cells underwent apoptosis also in a concentration related manner, determined by annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC) and propidium iodide (PI) employing flow cytometry. Mitochondrial transmembrane potential (MTP) measured using 3,3'-dihexyloxacarbocyanine iodide ($DiOC_6$) and flow cytometer was reduced concentration-dependently, which indicated influence on the mitochondrial signaling pathway. Caspase-3, -8 and -9 activities were enhanced as evidenced by colorimetric detection of para-nitroaniline tagged with a substrate for each caspase. Thus, the extrinsic and intrinsic pathways were linked in human naringin-treated HepG2 cell apoptosis. The expression levels of pro-apoptotic Bax and Bak proteins were increased whereas that of the anti-apoptotic Bcl-xL protein was decreased, confirming the involvement of the mitochondrial pathway by immunoblotting. There was an increased expression of truncated Bid (tBid), which indicated caspase-8 proteolysis activity in Bid cleavage as its substrate in the extrinsic pathway. In conclusion, naringin induces human hepatocellular carcinoma HepG2 cell apoptosis via mitochondria-mediated activation of caspase-9 and caspase-8-mediated proteolysis of Bid. Naringin anticancer activity warrants further investigation for application in medical treatment.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권5호
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• pp.1039-1046
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• 2005

The salt resistance of antibacterial activity and synergistic effect with clinically used antibiotic agents are critical factors in developing effective peptide antibiotic drugs. For this reason, we investigated the resistance of antibacterial activity to antagonism induced by NaCl and $MgCl_2$ and the synergistic effect of P20 with cefotaxime. P20 is a 20-residue synthetic peptide derived from a cecropin A (CA)-melittin(ME) hybrid peptide. In this study, P20 was found to have potent antibacterial activity against clinically isolated methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) strains without hemolytic activity against human erythrocytes. The combination study revealed that P20 in combination with cefotaxime showed synergistic antibacterial activity in an energy-dependent manner. We also confirmed the synergism between P20 and cefotaxime by fluorescence-activated flow cytometric analysis by staining bacterial cells with propidium iodide (PI) and bis-(1,3-dibutylbarbituric acid) trimethine oxonol (BOX). This study suggests that P20 may be useful as a therapeutic antibiotic peptide with synergistic effect in combination with conventional antibiotic agents.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
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• pp.37-37
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• 2001

포유동물의 정자형성과정 (spermatogenesis) 은 유사분열과 감수분열이 동시에 일어나는 매우 복잡하지만, 효율적으로 생식세포를 증식, 분화시키는 시스템이다 정상적인 spermatogenesis가 일어나는 testis에서는 haploid (IN), diploid (2N), 그리고 tetraploid(4N)과 같은 핵형을 갖는 세포들이 일정한 비율로 존재한다. DNA flow cytometry(DNA FCM) 는 세포의 핵형(ploidy)을 신속·정확하게 측정하여, 1N, 2N 그리고 4N에 대한 비율을 예측할 수 있어서, 생식세포를 포함한 다양한 유형의 세포주기를 분석하는데 적용되어져 왔다. 세포주기 분석법 중 이와 같은 FCM이외에, flow cytometer와 static image cytometer를 결합시켜 새롭게 고안된 laser scanning cytometer (LSC)가 있다. 그리고, 이제까지 LSC를 사용한 spermatogenesis에 관한 연구에 대해서는 보고된 바가 없다. 본 실험은 설치류에 있어 각기 다른 발달단계에 있는 정상적인 정소세포를 분리하여 PI (propidium iodide) 로 DNA를 염색한 후, DNA함량을 LSC로 분석하였다. 이것을 FCM에 의한 정소세포의 DNA분석과 비교·검토하였으며, 이 방법을 정상적인 spermatogenesis 가 일어나지 않는 동물시스템에 적용시켰다. 생식세포를 소멸시키기 위해 항암제인 busulfan과 비타민 A를 결핍시켜 이것이 세포주기의 어떤 시점에서 어떻게 작용하여, 생식세포를 소멸시키는지 알아보았다. 위의 실험·분석결과로부터 LSC를 사용한 DNA함량과 핵형의 결정은 FCM과 동일한 수준의 정확성을 제시하였다. busulfan 또는 비타민 A의 결손은 살아있는 세포의 80% 이상이 2N의 핵형에 해당하는 G0/G1 기에 있는 것으로 나타났다. 그리고 1N:2N 및 4N:2N의 핵형비율의 변화를 가져왔다. 이러한 자극은 생식세포주기제어에 관여하며, 생식세포가 증폭하고 분화로 들어가는 단계를 차단, G0/G1 기에서 정체(arrest)되는 것으로 시사된다.

• 수산해양교육연구
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• 제28권6호
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• pp.1822-1827
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• 2016

Consumption of Paralichthys olivaceus in raw fish have been reported as the cause of outbreaks of food-born illness, and Kudoa septempunctata in muscle of Paralichtys olivaceus was suggested with the causative agent. For this reason, distinguish of vital and dead spore is important to study survivability of Kudoa septempunctata in human intestinal condition and in vitro inactivation of Kudoa septempunctata. In this reports, we suggest NR & MB (Neutral red and Methylene blue) staining method that is easier and simpler than the previously described HO & PI (Hoechst33342 and Propidium iodide) method according to a experimental condition.