인 축적능이 우수한 균주를 자연계로부터 위노그라드스키 칼럼을 이용해 분리하여 Acinetobacter 속으로 동정하였고, Aci-netobacter CW3로 망명하였다. 인 축적균주의 배양초기조건은 $20^{\circ}C$. pH 7, 200rpm, 18.5mg $FO_4-P/\ell$가 최적임을 보였다. Acinetobacter CW3은 회분배양에서는 최적조건에서 12시간만에 인의 제거가 완료되었다. 이 균주는 호기조건에서는 인을 균주 내부에 과량 축적하고 첨가조건에서 인을 다시 방출함을 보였다.
Leuconostoc mesenteroides SY1, a strain isolated from cabbage Kimchi, was transformed with pCW4, a shuttle vector based on a cryptic plasmid from Lactobacillus paraplantarum C7. $\alpha-Amylase$ gene, amyL, from Bacillus licheniformis was cloned into pCW4, resulting in $pCW4T{\alpha},\;and\;pCW4T{\alpha}$ was introduced into SY1 by electroporation. Transformation efficiency was $10^2cells/{\mu}g$ plasmid DNA. L. mesenteroides cells harboring $pCW4T{\alpha}$ did not show amylase activity, although amyL transcript was synthesized as determined by slot blot experiment. $pCW4T{\alpha}$ was stably maintained in SY1 in the presence of erythromycin (Em, $5\;{\mu}g/ml$) but rapidly lost when Em was omitted. Less than $1\%$ of the cells maintained $pCW4T{\alpha}$ after 5 days at $30^{\circ}C$.
참깨박에 함유되어 있는 불용성 형태의 단백질을 가용성 형태의 단백질로 용출시키기 위하여 Bacillus sp. CW-1121이 생성하는 효소를 작용시켰다. 이때 참깨박의 단백질 용출을 위한 최적 pH는 7.5였으며, 최적 온도는 $40^{\circ}C$였고 최적 조건하에서 2시간의 소화로 약 60%의 용해도를 보였다. 단백질의 용해도는 참깨 단백질이 pH4.5에서 가장 낮아 등전점을 보였고, pH3.0과 pH6.0 이상에서는 크게 증가하였다. 효소처리 참깨박 단백질을 전기영동한 결과 수용성 단백질은 4개, 염용성 단백질은 2개의 밴드가 관찰되었다. 분리 단백의 아미노산 조성은 수용성 단백질의 경우 serine이 17.24 mg/g, 염용성 단백질은 glutamic acid가 10.77 mg/g, 유리아미노산은 glutamic acid가 6.55 mg/g으로 가장 많이 함유되어 있었으며 특히 필수아미노산의 조성도 상당히 좋은 편이었다.
Winogradsky column을 이용하여 10개의 탈질 박테리아를 분리하였다. 그 중 가장 성능이 우수한 탈질 박테리아를 Pseudomonas CW4로 명하였다. Pseudomonas CW4는 무산소 조건에서 배양하였고, Pseudomonas CW4의 최적 생육조건을 온도, pH. 교반속도, 탄소원 농도 및 질산성질소 농도에 변화를 주어 측정하였다. 최적 생육 온도 3$0^{\circ}C$, 최적 pH 범위는 6~8이었다. 교반속도와 탄소원 농도에 대한 영향은 아주 작았다. 그리고 질산성 질소의 초기농도 142.5 mg/L 에서 15 시간만에 100% 탈질을 나타내었다.
지자체에서 배양하여 보급되고 있는 농업미생물 활용을 증진할 목적으로 18개 농업기술센터에서 51종의 미생물을 수집하여 작물생장촉진 및 식물병 방제와 관련한 기능성인 항균활성, 인산가용화, IAA 및 siderophore 생성능력, 질소고정능력, 가수분해활성을 비교 조사하여 최종적으로 항균활성이 우수하고 다양한 농업적 기능을 보이는 Panenibacillus polymyxa CW균주를 선발하였다. P. polymyxa CW균주는 벼 도열병균, 고추 탄저병균, 채소류 시들음병균, Phomopsis sp., 양파 검은곰팡이병균, 잘록병균(Rhizoctonia solani) 및 고추 역병균에 대하여 높은 항균활성을 보였다. 시험 병원균 중 잘록병균을 제외한 모든 병원균에 대하여 P. polymyxa CW균주는 농과원에서 보유하고 있는 P. polymyxa AC-1보다 높은 항균활성을 보였다. P. polymyxa CW균주는 항균활성 외에도 siderophore 생성, IAA 생성 및 질소고정 능력이 우수한 것으로 나타났다. P. polymyxa CW균주의 siderophore 생성능력은 P. polymyxa AC-1과 비슷하였으나 IAA 생성이나 질소고정능력은 P. polymyxa AC-1보다 우수하였다. 그러나 가수분해능력에 있어서는 P. polymyxa CW균주와 P. polymyxa AC-1균주 모두 활성을 보이지 않았다. 고추 흰가루병을 대상으로 P. polymyxa CW균주를 농도별로 처리하고($10^8$, $10^7$. $10^6$ cfu/ml) 처리 후 10일에 병 억제효과를 조사하였을 때, 가장 높은 농도처리에서 병 발생을 68.3%까지 억제하였다. P. polymyxa CW균주의 처리농도가 감소됨에 따라 병 방제효과도 비례해서 감소되었다. 또한 토마토 흰가루병에 대하여 P. polymyxa CW균주 배양액을 $10^6$, $10^7$, $10^8$ 농도로 희석하여 처리하고 7일 후에 병 발생정도를 조사한 결과, 무처리의 병반면적율이 56.3%인데 비하여 0.03, 19.5, 45.7%로 병 발생을 현저히 억제하는 것으로 나타났다. 고추 흰가루병의 경우처럼 토마토 흰가루병에 대한 P. polymyxa CW균주의 방제효과도 처리농도에 비례하는 것으로 나타났다. P. polymyxa CW균주는 고추 및 토마토 흰가루병에 대하여 높은 방제효과를 보였으며, 방제효과가 밀도에 좌우되는 것으로 나타나 시험한 두가지 흰가루병 방제에 대한 작용기작은 항생작용으로 추측되며 효과적인 병 방제를 위해서는 $10^8$ cfu/ml 이상 농도로 처리해야 할 것으로 생각되었다. 이상의 결과를 근거로 P. polymyxa CW균주는 고추 및 토마토 흰가루병 방제를 위한 유망한 방제제로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
The $\alpha$-amylase gene, amyL, from Bacillus licheniformis was expressed in Lactobacillus brevis 2.14 and Escherichia coli $DH5{\alpha}$ using two different shuttle vectors, pCW4 and pSJE. E. coli transformants (TFs) harboring either $pCW4T{\alpha}$ or $pSJET{\alpha}$ produced active $\alpha$-amylase but L. brevis TFs did not, as determined by enzyme assays and zymography. But amyL transcripts were synthesized in L. brevis TFs. In terms of plasmid stability, pSJE, a theta-type replicon, was more stable than pCW4, an RCR (rolling circle replication) plasmid, in L. brevis without antibiotic selection.
DCF 성능 분석 모델에 사용되는 Bianchi의 2차원 Markov Chain 모델은 오류가 없는 이상적 채널에서 충돌 문제만을 다루므로 페이딩, 간섭, 잡음 등 실제 채널의 특성을 반영하지 못한다. 802.11 DCF는 전송실패가 충돌에 의한 것이든, 채널 전송오류에 의한 것이든 경쟁윈도우(CW) 크기를 두 배로 증가시키는 2진 지수후퇴 알고리즘을 작동시킨다. 이상적으로 경쟁윈도우 증가는 혼잡에 의한 충돌방지 때에만 사용되어져야 한다. 통신오류에 의한 경쟁윈도우 증가는 데이터 처리율을 떨어뜨리고 전송지연의 증가를 야기 시킨다. 오류 채널에서는 전송실패 증가가 과도한 이진 지수후퇴를 야기하므로 초기 경쟁윈도우(CW) 크기를 줄여줄 필요가 있다. 본 논문에서는 경쟁윈도우(CW), 타임슬롯에서 전송 확률(${\Im}$), 전송 실패 확률($p_f$) 등이 시스템 성능에 미치는 영향을 정량적, 정성적으로 분석을 하고 등가적으로 CW 값을 얼마큼 줄여야 할지를 제시한다.
비점오염원 저감을 위해 설치된 주암호 생태습지의 수질정화효율을 평가하기 위하여 시스템별 및 시기별 오염물질의 함량과 처리효율을 조사하였다. 유입원수의 BOD, COD, SS, T-N 및 T-P의 함량은 각각 0.20~0.91, 1.24~8.00, 0.6~8.6, 0.04~2.50 및 $0.001{\sim}0.685mg\;L^{-1}$ 범위로 나타났다. 주암호 생태습지 유입수의 대부분이 현행 오염물질 수질기준을 초과하지 않은 상태로 유입되었지만 비점오염원이 많이 유입되는 특정 시기 (장마철)에는 높은 오염물질 함량을 나타내었다. 시기별로는 전반적으로 여름철에 유입원수의 영양염류의 유입이 다른 시기에 비해 높은 경향이었다. 전반적으로 C 시스템이 오염물질의 처리효율이 가장 높은 경향이었다. A 시스템의 습지들은 대부분 겨풀이 우점하고 있었으며 B 시스템의 습지들은 겨풀과 연꽃이 우점하고 있었다. C 시스템의 습지들은 겨풀, 수련 및 부들이 우점하고 있었다. 주암호 생태습지는 오염물질의 처리능이 전반적으로 안정화 상태에 도달하지 못한 것으로 판단되며, 특히 겨풀 및 물 참새피 등 식물교란종의 습지 내 침투로 인하여 습지의 수질정화효율이 전반적으로 낮았다. 따라서 본 연구결과로부터 조성초기 인공습지는 식생의 발달 여부가 수질의 안정화와 습지의 수생태학적 역할을 증대시키는데 중요한 역할을 하는 것으로 판단된다.
PSP 분해 활성 세균을 이용한 마비성패류독의 생물학적 제독 방법을 확립하기 위하여 진주담치 및 해수에서 마비성패류독 분해능이 있는 균주를 분리하였으며, 분리 균주의 독소 분해 활성 및 세균학적 특성 시험을 실시한 결과는 다음과 같다. 남해안 패류양식장에서 채취한 진주담치 및 해수 중에서 마비성패류독 분해능이 있는 8균주를 분리하였으며, 분리균주 중 $GTX 1{\~}4$ 혼합물 전반에 대하여 폭넓은 분해 활성을 나타낸 CW-6를 시험 균주로 선발하였다. 선발 균주 CW-6는 배양 3일만에 18nmole/g의 GTX2를 완전히 분해하는 강한 독소 분해 활성을 나타내었다. 선발 균주 CW-6는 생화학적 특성 시험 결과, Enterobacter속으로 동정되어 Enterobacter sp. CW-6로 명명하였으며, 이 균주는 $20{\~}40^{\circ}C,\;pH 7{\~}9$에서 왕성하게 증식하는 전형적인 중온세균의 특징과 염분농도 $6{\%}$에서도 최적 증식의 $46.8{\%}$ 정도 증식 가능한 내염성을 나타내었다.
The enzymatic properties for NADPH-P450 reductase domain of a fusion protein between human cytochrome P450 1A1 and rat NADPH-P450 reductase expressed in Escherichia coli were investigated. The fusion plasmid pCW/1A1OR-expressed E. coli membrane showed high NADPH-cytochrome c reductase activity ($830.1\pm 85.8 nmol\cdot min^{-1}\cdot mg protein^{-1}$), while pCW control vector and P 450 1A1 expression vector pCW/1A1 showed relatively quite low activity ($4.35\pm 0.49, 3.27\pm 0.50 nmol\cdot min^{-1}\cdot mg protein^{-1}$, respectively). The kinetic curves for NADPH-cytochrome c reductase followed typical Michaelis-Menten kinetics. The $K_{max}$ and $V_{max}$ for NADPH-dependent reductase activity were $8.24\pm 2.61\mu $and $817.9\pm 60.8 nmol\cdot min^{-1}\cdot mg protein^{-1}$, respectively, whereas those for cytochrome c-dependent reductase activity were $19.97\pm 2.86\mu M$ and $1303.5\pm 67.1 nmol\cdot min^{-1}\cdot mg protein^{-1}$. The reductase activities were also compared with those of rat, porcine and human liver microsomes. The activity of pCW/ 1A1OR-expressed E. coli membrane was 15.2-fold higher than that of rat liver microsome. Treatment with benzo(a)pyrene, 7-ethoxyresorufin and $\alpha$-naphthofiavone which are known as specific substrates or inhibitor for human P450 1A1 increased NADPH-cytochrome c reductase activity of fusion protein in E. coli membrane dose-dependently. These results demonstrate that the membrane topology of fused enzyme may be important for activity of its NADPH-P450 reductase domain.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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