우유 casein단백질을 trypsin, alcalase, neutrase, protamax, S. aureus type V8 등의 단백질분해효소를 이용하여 가수분해시키고 생성된 peptide의 철분가용화능을 측정하였을 때, trypsin과 alcalase에 의해 생성된 peptide들이 pH 6의 조건에서 각각 6.42와 $2.37\;{\mu}g/mL$를 가용화시키는 능력을 보였으며 그외의 protease들은 $1\;{\mu}g/mL$내외의 철분가용화능을 보였다. Trypsin과 alcalase에 의해 생성된 peptide를 역상 column으로 10개의 분획으로 나누어서 각각의 분획의 pH6에서의 철분가용화능을 측정한 결과, trypsin의 경우 분획 5에서 가장 높은 철분가용화능$(2.33\;{\mu}g/mL)$이 발견되었으며 alcalase의 경우에는 분획 7이 가장 높은 철분가용화능$(1.56\;{\mu}g/mL)$을 보였다. 이들 철분과 결합력이 있는 peptide를 분리하기 위하여 IMAC의 방법을 이용하여 철분을 chelating sepharose fast flow column에 고정화 시키고 이들 철분에 흡착하는 peptide의 분리를 시도한 결과, trypsin이나 alcalase에 의해 생성된 peptide중 철분을 가용화시키는 능력이 높은 peptide들이 IMAC에 의해 효과적으로 분리되었다.
참치 가공 부산물의 효율적 이용을 위한 일련의 연구로 상업적 효소 처리에 의해 맛 및 건강 기능성을 고려한 참치 자숙액 유래 조미 베이스의 제조를 시도하였고, 아울러 이의 특성에 대하여 살펴보았다. 참치 자숙액을 기질로 하여 효소의 종류(Alcalase, Flavourzyme, Neutrase 및 Protamex) 및 반응시간(30${\sim}$360분)을 달리하여 가수분해물을 제조한 다음 TCA soluble index, ACE 저해능 및 항산화능을 검토한 결과 Alcalase로 30분간 반응시키는 것이 가장 좋았고, 이때 ACE 저해능 및 항산화능은 각각 56.8% 및 3.80시간이었다. 1단 Alcalase 가수분해물로 제조한 2단 가수분해물과 이의 한외여과물은 1단 가수분해물에 비하여 ACE 저해능 및 항산화능의 개선효과가 인정되지 않았다. 또한, 1단 Alcalase 가수분해물의 경우 소화효소인 pepsin, trypsin 및 chymotrypsin 등에 의하여도 ACE 저해능 및 항산화능이 개선되거나 변화가 없었다. 이상의 결과로 미루어 보아 Alcalase로 30분 가수분해 처리한 가수분해물은 건강 기능성 조미 소스의 주원료로 사용 가능하리라 판단되었다.
붉은 대게 가공부산물로 이용도가 낮은 자숙액을 이용하여 효소 가수분해물의 제조를 시도하였고, 아울러 이의 맛, 영양 및 건강기능에 대한 특성을 조사하였다. 붉은 대게 자숙액은 일반성분 및 안전성면에서 식품가공소재로 이용하여도 아무런 문제가 없었다. 1단 가수분해물의 경우 TCA soluble index(TSI), ACE 저해능 및 항산화능을 고려하는 경우 Alcalase로 2.0시간 반응시켜 제조하는 것이 가장 적절하였다. 붉은 대게 자숙액 유래 Alcalase 1단 가수분해물을 기질로 하여 Flavourzyme, Neutrase 및 Protamex로 각각 2시간씩 연속적으로 가수분해시킨 2단 가수분해물의 ACE 저해능 및 항산화능은 1단 가수분해물에 비하여 유사하거나 약간 우수하여 2단 가수분해의 필요성이 인정되지 않았다. 붉은 대게 자숙액에 비하여 이를 Alcalase 처리한 가수분해물의 경우 일반성분 및 색조는 차이가 없었으나, glutamic acid 및 aspartic acid와 같은 맛에 관여하는 유리아미노산의 경우 증가하였다. 붉은 대게 유래 Alcalase 처리 가수분해물의 아미노산 함량은 11,859.6 mg/100 mL이었고, 주요 아미노산으로는 glutamic acid(10.2%), proline(10.1%) 및 glycine (10.7%) 등이었다.
제주지역에 서식하고 있는 블루베리 (Vaccinium corymbosum L.)로부터 수용성 추출물을 효과적으로 제조하기 위하여 5가지 종류의 탄수화물 분해효소 (AMG, Celluclast, Termamyl, Ultraflo, Viscozyme)와 또 다른 5종의 단백질 분해효소 (Alcalase, Flavourzyme, Kojizyme, Neutrase, Protamex)를 이용하여 효소적 추출을 시도하였다. 이들 효소를 이용하여 제조된 여러 가지 블루베리 효소 추출물에 대하여 1,1-diphenyl 2-picrylhydrazyl (DPPH), 활성산소종 (ROS), 일산화질소 $(NO{\cdot})$ 등의 소거 활성, 금속 킬레이트결합능, 그리고 지질 과산화 저해능과 같은 항산화 효과를 검토하였다. 모든 효소 추출물의 페놀함량은 $517.85\~597.96\;mg/100 g$ 건조시료이었으며, 항산화 효과에 대한 평가에서 특히 DPPH 및 $NO{\cdot}$ 소거활성, 그리고 금속 킬레이트 결합능 등이 우수한 것으로 나타났다. Viscozyme 추출물은 DPPH 소거활성 $(0.046{\pm}0.002\;mg/mL)$이, 그리고 AMG 추출물은 $NO{\cdot}$ 소거활성$(0.339{\pm}0.011\;mg/mL)$ 및 지질 과산화 억제활성 $(0.28{\pm}0.01\;mg/mL)$이 각각 우수하였다. 과산화 수소 소거활성에 있어서는 블루베리 효소 추출물들이 천연 항산화제인 a-토코페롤보다 상대적으로 높았다. 이러한 결과로 볼 때 블루베리는 항산화 효과가 우수한 화합물들을 함유하고 있을 것으로 판단되며, 향후 천연 항산화 자원으로서 이용이 가능할 것으로 사료된다.
본 연구에서는 우유 앨러지의 원인물질중의 하나인 casein단백질을 생체가 알르겐 물질로 인식할 수 없는 수준의 분자로까지 분해하여 항원성을 저감시키고 또한 풍미가 좋은casein분해물을 제조하기 위하여 분해특성이 다른 효소를 사용하여 만들어진 분해물의 특성과 항원성을 조사하였다. 박테리아 효소인 Neutrase, Alcalase, Protamex, Pescalase을 처리한 casein가수분해물의 평균분자량은 1,100~2,300 dalton이었고 곰팡이 효소인 MP, Flavourzyme, LP, Promod경우에는 거의 770 ~ 1,140 dalton범위였다. 항원성 저감정도를 측정하기 위하여 토끼항casein항혈청을 이용하여 ELISA억제시험을 실시한 결과 항체결합을 50%저해하는 미분해casein단백질의 농도는 $10^{3.6}$ng/ml였다. 박테리아 효소인 Neutrase, Alcalase, Protamex, Pescalase에 의한 Casein가수분해물의 값은 각각 $10^{4.8},\;10^{5.5},\;10^{5.9},\;10^{6.1}\;ng/ml$이었고, 곰팡이 효소인 MP, Flavourzyme, LP, Promod경우에는 각각 $10^{6.3},\;10^{6.3},\;10^{6.5},\;10^{6.8}\;ng/ml$로 나타났다. 박테리아와 곰팡이효소의 조합인 Fla+prota, Pro+prota처리구에서는 $10^{7.4},\;10^{7.3}ng/ml$로 나타났다. 따라서 미분해 casein의 항원성을 1로 하면, casein분해물의 항원성은 최고 1/8,000 이하로 저하되었다. 수신피부아나피랙시스반응(PCA)을 이용한 항원성시험에서 casein으로 피하 감작할 경우 푸른색 반점이 나타났으나 효소처리구에서는 이러한 반점이 나타나지 않아 충분히 항원성이 저감화 되었음을 확인하였다.
양식 굴을 효율적으로 이용할 목적으로 6가지의 상업적 효소(Alcalase, Flavourzyme, Neutrase, Protamex, pepsin, trypsin)를 이용하여 굴 효소 가수분해물을 제조하고, 그 특성에 대하여 살펴보았다. 상업적 효소 굴 가수분해물의 항산화능 및 ACE 저해능은 모두 Protamex로 1시간동안 가수분해시킨 것이 가장 우수하였고, 이 때 이들의 $IC_{50}$값은 각각 1.16 mg/mL 및 14 mg/mL이었다. 하지만 항균성은 모든 효소 가수분해물에서 인정되지 않았다. 또한, ACE 저해능 및 항산화능은 가수분해 시간에 따른 의존성이 인정되지 않았다. Protamex로 1시간동안 처리한 굴 가수분해물의 경우 가수분해 처리하지 않은 대조구에 비하여 $29{\sim}66\;kDa$ 획분과 6.5 kDa 부근의 획분이 모두 감소하여 저분자화 하는 경향을 나타내었다.
The objective of the current study was to evaluate the inhibitory and antioxidant activities of powdered katsuobushi (dried bonito) protein hydrolysates and their corresponding fractions. The powdered katsuobushi (dried bonito) hydrolysates were obtained by enzymatic hydrolysis using Alcalase, ${\alpha}$-chymotrypsin, Neutrase, pepsin, papain, and trypsin. The antioxidant efficacy of the respective hydrolysates were evaluated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl, superoxide, and alkyl radical-scavenging activities. Among the hydrolysates, the peptic-derived hydrolysate exhibited the highest antioxidant activity compared to other enzymatic hydrolysates. Therefore, the peptic-derived hydrolysate was further analyzed, and was found to contain an active peptide with an amino acid sequence identified as Pro-Met-Pro-Leu-Asn-Ser-Cys (756 Da). The purified peptides from powdered katsuobushi (dried bonito) had an $EC_{50}$ value of $105.82{\mu}M$, and exhibited an inhibitory effect against DNA oxidation induced by hydroxyl radicals. Taken together, these results suggests that powdered katsuobushi (dried bonito) could be used as a natural antioxidant in functional foods and prevent oxidation reactions in food processing.
Hizikia fusiformis hydroysates by five carbohydrases (Viscozyme, Celluclast, Termamyl and Ultraflo) and five proteases (Protamex, Kojizyme, Neutrase, Flavourzyme and Alcalase) were investigated for their extraction efficacy (yield and total total polyphenolic content) and antioxidative activity (DPPH radical and hydrogen peroxide scavenging activity). Termamyl and Ultraflo of the carbohydrases and Flavourzyme and Alcalase of proteases were selected by their high eficacy of extraction and antioxidative activity. Selected enzymes were used to investigate the optimum enzymatic reaction time and dosage (enzyme/substrate ratio) suitable for hydorolysis. Optimum reaction time for the enzymatic hydrolysis was 3 days and optimum dosage of hydrolysis was observed as 5%. Simultaneously, Ultraflo of the two carbohydrases and Alcalse of the two proteases were selected as the most effective enzymes. Combination of Ultraflo and Alcalase under optimum hydrolysis conditions could intensify the extraction efficacy of antioxidative materials form H. fusiformis. The hydrolysate obtained by combining the enzymes was separated into four different molecular weight fractions (<1kD, 1-10 kD, 10-30 kD and >30 kD) and recorded the polyphenolic content distribution and respective antioxidative ability. The fraction <1kD was identified as less effective and those fractions > 1kD indicated comparatively higher antioxidative activities related to their polyphenolic content.
생난황으로부터 시알산 함유 올리고당을 직접 생산하기 위한 biphasic system(water-immiscible hexane system)의 최적 조건을 조사하였다. Biphasic system I은 II보다 생산수율이 높았으며, 온도, 함수율 및 반응 시간의 최적조건은 각각 $30^{\circ}C$, 20%, 12시간이었다. Biphasic system I 에서, 난황을 가수분해하기 위한 3종류의 효소(protease A, corolase 7089, neutrase 0.5L)의 활성은 함수율과 온도에 강하게 영향을 받았으나, biphasic system II에서는 온도($30^{\circ}C$와 $50^{\circ}C$)의 영향을 거의 받지 않았다. 두 종류의 biphasic system에서 반응시간 12시간까지는 시알산 함유 올리고당의 생산량이 증가되었으나, 15시간 이후에는 거의 증가하지 않았다.
Bacteriocin을 생산하는 유산균을 김치에서 분리하였고 Lactococcus latis subsp. lactis로 확인 되었으며 bacteriocin의 최대생산조건은 $30^{\circ}C$, 6시간으로 다양한 유산균 및 Pseudomonas synsantha, Acetobacter aceti의 생육을 저해하였고 여러 peptidases에 의해 불활성화되었다. 또한 다양한 범위의 pH와 열처리에 안정하였고 SDS-PAGE결과 약 8 Kda으로 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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