Kim, Hyun-Jin;Kim, Ji-Hyun;Son, Jeong-Hwa;Seo, Hyo-Jin;Park, So-Jin;Paek, Nam-Soo;Kim, Sung-Koo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권3호
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pp.503-508
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2004
The antimicrobial substance produced by Lactobacillus bulgaricus was inactivated by protease. It showed inhibitory activity against Staphylococcus aureus ATCC6538, Streptococcus agalactiae ATCC14364, some Gram-positive and Gram-negative bacteria, and characteristics of a bacteriocin. The optimal temperature and culture time for the production of bacteriocin were $30^{\circ}C$ and 10 h, respectively, in the culture of L. bulgaricus. The bacteriocin production started in the exponential phase and reached a maximum at the early stationary phase. Using Staph. aureus ATCC6538 and Strep. agalactiae ATCC14364, known as common bovine mastitis pathogens, as indicator strains for determination of the bacteriocin activity, the antimicrobial activity of the bacteriocin was found to be stable in acidic and neutral pH's (2- 7) even at lOOT, whereas it was lost at high pH (10- 11) and $100^{\circ}C$. The mode of action for the antimicrobial activity was bacteriocidal, and the molecular weight determined by SDS-PAGE and overlay method was 14 kDa.
키토산을 첨가한 저식염 기능성 고추장을 제조하여 숙성 기간별로 이화학적 성분 변화 및 미생물 변화를 조사하였다. 속성 기간 중 회분, 조지방, 조단백질은 젖산 및 키토산의 농도에 따라 별 차이를 보이지 않았으나 수분 함량은 전체적으로 증가하였고, 특히 6% 식염첨가구에서 가장 높은 4.23% 증가를 나타내었다. pH와 적정산도는 키토산 농도에 따라 유의성 있는 변화는 없었다. 알코올 농도는 숙성기간 중 계속 증가하여 4주째에는 0.35~2.19%까지 증가하였으나, 환원당은 숙성 2주까지 증가하여 26.1~27.3%에 이른 후 다시 감소하였고 키토산 농도가 높을수록 알코올 생성과 환원당 감소는 억제하는 것으로 나타났다. 키토산의 첨가가 $\alpha$-amylase의 활성은 약간 저해하였으나, $\beta$-amylase, 산성 protease, 중성 protease의 활성에는 큰 영향을 미치지 않았다. 산성 protease의 경우 9% 식염첨가구에 비하여 6% 식염첨가구 및 6% 식염+젖산, 키토산 첨가구의 효소 활성이 높게 나타났다. 아미노태 질소는 키토산 농도에 관계없이 6% 식염 첨가구들이 9% 식염첨가구에 비하여 전체적으로 높았으며, 암모니아태 질소는 키토산 농도가 높을수록 억제하는 것으로 나타났고, 특히 6% 식염 첨가구의 경우 숙성 4주째에는 170.2mg%까지 증가하였다. 세균수는 숙성 초기 급격히 감소한 후 1주 이후부터는 일정 수준을 유지하였고, 효모수는 숙성 2주까지 증가하다가 감소하는 경향이었다. 키토산 농도가 증가할수록 세균 및 효모의 수도 약간 감소하였다. 이상의 결과에서 키토산 첨가의 최적 농도는 0.25%이었다.
In this study we purified a fibrinolytic enzyme from Cordyceps militaris using a combination of ion-exchange chromatography on a DEAE Sephadex A-50 column, gel filtration chromatography on a Sephadex G-75 column, and FPLC on a HiLoad 16/60 Superdex 75 column. This purification protocol resulted in a 191.8-fold purification of the enzyme and a final yield of 12.9 %. The molecular mass of the purified enzyme was estimated to be 52 kDa by SDS-PAGE, fibrin-zymography, and gel filtration chromatography. The first 19 amino acid residues of the N-terminal sequence were ALTTQSNV THGLATISLRQ, which is similar to the subtilisin-like serine protease PR1J from Metarhizium anisopliae var. anisopliase. This enzyme is a neutral protease with an optimal reaction pH and temperature of 7.4 and $37^{\circ}C$, respectively. Results for the fibrinolysis pattern showed that the enzyme rapidly hydrolyzed the fibrin $\alpha$-chain followed by the $\gamma$-$\gamma$ chains. It also hydrolyzed the $\beta$-chain, but more slowly. The A$\alpha$, B$\beta$, and $\gamma$ chains of fibrinogen were also cleaved very rapidly. We found that enzyme activity was inhibited by $Cu^{2+}$ and $Co^{2+}$, but enhanced by the additions of $Ca^{2+}$ and $Mg^{2+}$ ions. Furthermore, fibrinolytic enzyme activity was potently inhibited by PMSF and APMSF. This enzyme exhibited a high specificity for the chymotrypsin substrate S-2586 indicating it's a chymotrypsin-like serine protease. The data we present suggest that the fibrinolytic enzyme derived from the edible and medicinal mushroom Cordyceps militaris has fibrin binding activity, which allows for the local activation of the fibrin degradation pathway.
저식염 고추장 제조시 알콜 또는 알콜에 겨자나 키토산을 혼합 첨가한 고추장을 1년간 숙성시켜, $30^{\circ}C$에서 12주간 저장하면서 미생물상과 이화학적 특성 변화를 비교하였다. 고추장의 amylase 활성은 저장 중에 급격히 감소하였고, 저온살균 처리구에서 낮았다. 산성 protease 활성은 저장 중에 증가하였으나 중성 protease는 저장 4주 이후에 서서히 감소하였다. 고추장 중의 효모수는 저장 중에 조금 증가하였으나 세균수는 감소하는 경향이었고, 시험구간의 차이는 없었다. 고추장의 색은 저장 중에 a값은 감소하였으나 L-과 b-값은 저장 4주에 증가한 후에 감소하였고, ${\Delta}E$값의 변화는 4주에 제일 심하였다. 고추장의 수분과 수분활성도는 저장 중에 감소하였으며 수분활성도는 부원료 첨가구들에서 높았다. 고추장의 pH는 저장 중에 저하하였으나, 적정산도는 저장 4주 이후에는 감소하였으며 알콜에 겨자나 키토산을 혼합 첨가한 고추장에서 높았다. 산화환원전위는 저장 4주에 증가하였으나 그 이후에는 감소하였고 부원료 첨가구에서 낮았다. 총당과 환원당은 저장 중에 감소하였으나 부원료 첨가구에서 높았다. 알콜은 저장 중에 증가하나 알콜 첨가구들은 감소하였다. 아미노태 질소와 암모니아태 질소 함량은 저장 중에 감소하였으며 부원료 첨가 고추장에서 아미노태 질소 함량이 낮았다. 따라서 부원료를 첨가한 저식염 고추장을 장기간 숙성시키면 저장 중에 가스 발생이 없어 유통 중에 포장용기의 파열이나 변색이 적고, 환원당과 아미노태 질소의 감소가 적어 품질저하 요인이 상대적으로 적은 것으로 판단되었다.
Enzyme activities, production of killer toxin and some functionality of forty seven yeasts isolated from traditional Meju were investigated in culture broth and cell free extracts. Activities of $\alpha$-galactosidase, invertase and inulinase were detected in cell free extracts of 38 strains, 43 strains and 45 strains, respectively and acidic and neutral protease activities also were detected in culture broth of all the strains, $\beta$-Galactosidase activity was detected in cell free extracts of OE-20 and S-14 strains. Killer toxins were produced by OE-12, S-8 (Candida spp.), OE-19 (Zygosaccharomyces spp.) and S-3 (Saccharomyces spp.). Culture broth of OE-23 and S-9 showed 61.3% and 59.2% of antioxidant activity to $\alpha$, $\alpha$-diphenyl-$\beta$-picrylhydrazyl(DPPH), but nitrite-scavenging ability as well as inhibition of tyrosinase and polyphenol oxidase were not appeared in all the strains.
In this study, investigated the effects of four strains belonging to Aspergillus oryzae on the quality of Kochujang. In the Koji and Kochujang making, investigated the difference of enzyme production of each strain, the change of each component and color during the aging, and tested the sensory taste. The results obtained were as follows; 1. Protease activity (acid, neutral) in wheat flour Koji was high in the case of Aspergillus $oryzae-S_1$ and Aspergillus oryzae - M of short stalked type. The strain Aspergillus $oryzae-S_1$ showed maximum activity after two days of Koji making, while the strain Aspergillus oryzae - M showed low activity till two days, but showed maximum activity after three days-four days of Koji making. 2. In $\alpha$-amylase activity, strain Aspergillus $oryzae-S_1$, Aspergillus $oryzae-S_2$ and Aspergillus oryzae - M showed high activity after two days of Koji making. Aspergillus oryzae-NB strain showed slower ${\alpha}$ - amylase activity than that strains. 3. In glucoamylase activity, all strain tested showed high activity after three days of Koji making, but st rain Aspergillus oryzae - NB showed slower activity than ot - hers. 4. In protease activity (acid, neutral) during the aging of Kochujang, strain Aspergillus $oryzae-S_1$ and Aspergillus oryzae - M of short stalked type showed higher activity than that of long stalked type. 5. Amino type nitrogen contents during the aging of Kochujang was very higher in the case of strains Aspergillus $oryzae-S_1$ and Aspergillus oryzae - M of short stalked type than other strains, and each contents was 315mg% and 337mg% after aged for ninty days. 6. The results that analysed free sugar of Kochujang aged for ninty days with HPLC were; glucose 5.84~7.13%, fructose 4.13~5.00%, rhamnose 0.91~1.04%, maltose 0.72~0.92% and presence of xylose was recognized. 7. The results that analysed alcohols of Kochujang aged for ninty days with gas chromatography were; ethanol 1.51~1.78%, n-propyl alcohol 1.13~1.20mg%, iso-amyl alcohol 3.5~4.4mg%. 8. In the sensory test of Kochujang aged for sixty days and for ninty days, the case of strains Aspergillus oryzae-M and Aspergillus $oryzae-S_1$ of short stalked type showed good taste, while the case of strains Aspergillus $oryzae-S_2$ and Aspergillus oryzae-NB of long stalked type showed good flavor and color.
우수균주를 접종한 고추장에 항균성 물질을 함유하고 있는 양고추냉이와 겨자 분말을 첨가하여 $25^{\circ}C$에서 발효시키면서 미생물과 성분의 변화를 비교하였다. 향신료 첨가로 인해 고추장 효모의 증식이 억제됨으로서 유통중 문제가 되는 가스가 발생되지 않았고 세균수에는 큰 차이가 없었다. 아미노산성 질소는 발효가 진행되면서 계속하여 증가하였으며 발효 120일째 P-2 코지와 겨자 분말을 함께 첨가한 실험구의 함량이 유의적으로 높았다. 효소 역가의 경우 ${\alpha}-amylase$활성은 매우 낮았으나 ${\beta}-amylase$는 향신료 첨가구의 활성이 높았고, protease(산성, 중성)는 발효가 진행되면서 계속 증가하였으나 실험구간의 뚜렷한 차이는 보이지 않았다. 고추장의 색과 향기는 실험구간의 유의적 차이를 보이지 않았고 맛과 전체적 기호도의 경우 양고추냉이 첨가구와 P-2 코지만을 첨가한 실험구가 우수하였다. 양고추냉이 및 겨자를 첨가하고 선발된 균주를 이용하여 발효시킨 고추장은 저장 중 가스발생이 완전히 억제되었고 품질 또한 우수하였다.
본 연구에서는 발효과정 중 누룩의 일반성분 및 효소 활성변화를 측정하고, 단백질의 분해정도와 밀 단백질에 민감한 환자의 혈청과 반응성을 관찰하였다. 누룩의 수분함량은 발효 1일 24.20%였으며 발효가 진행됨에 따라 미생물의 이용과 증발로 인해 감소되어 발효 15일에는 13.60%를 나타내었다. 누룩 발효 중 총당과 환원당의 함량은 발효시간이 경과함에 따라 증가하는 경향을 나타내었다. 누룩의 발효 초기 조단백질 함량은 1.58%였으나 발효가 진행됨에 따라 다소증가하여 발효 15일에는 2.05%로 나타났다. 또한 누룩의 조지방 함량은 발효 초기 1.32%였으며 발효 15일에는 2.24%로 다소 증가함을 나타내었다. ${\alpha}$-Amylase 활성은 발효 초기 1,416.67 U/g에서 발효 15일에는 2,833.00 U/g으로 급격히 증가하였으며, glucoamylase 활성은 발효 초기 497.90 U/g에서 발효 10일 경과 후 705.40 U/g으로 최대 활성을 보였으나 그 후 완만한 감소를 나타내었다. 누룩의 산성 protease 활성은 발효 초기에는 검출되지 않았으나 발효 10일에 75.00 U/g으로 급격히 증가하기 시작하여 발효 15일에는 327.00 U/g에 도달하였으며 중성 protease 활성도 발효 10일에 90.00 U/g으로 급격히 증가하기 시작하여 15일에는 354.00 U/g로 검출되었으며 이후에도 계속 증가하였다. 반면에 알칼리성 protease 활성은 검출되지 않았다. 발효가 진행됨에 따라 누룩 중 고분자 단백질이 각종 미생물에 의해 분해되어 저분자의 펩타이드 밴드가 생성되었으며 밀 민감성 환자의 혈청과 반응하는 밴드도 점차 감소하여 발효 15일에는 거의 검출되지 않았으므로 누룩 중 밀 단백질의 항원성이 감소하였음을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구를 통해 누룩은 영양학적 측면뿐만 아니라 효소학적 측면의 장점까지 겸비한 효율적인 한국 고유의 발효 식품용 스타터(starter)로써 전통주 제조에 필수적이며, 누룩의 고분자 단백질이 발효에 의해 저분자 펩타이드로 분해됨을 확인함으로써 밀 민감성 환자들을 위한 다양한 가공식품용 소재로 활용이 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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