Here, we investigated the role of zerumbone, a natural cyclic sesquiterpene of Zingiber zerumbet Smith, on angiogenesis using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Zerumbone inhibited HUVECs proliferation, migration and tubule formation, as well as angiogenic activity by rat aorta explants. In particular, zerumbone inhibited phosphorylation of vascular endothelial growth factor receptor-2 and fibroblast growth factor receptor-1, which are key regulators of endothelial cell function and angiogenesis. In vivo matrigel plug assay in mice demonstrated significant decrease in vascularization and hemoglobin content in the plugs from zerumbone-treated mice, compared with control mice. Overall, these results suggest that zerumbone inhibits various attributes of angiogenesis, which might contribute to its reported antitumor effects.
Park, Hyen-Joo;Hwang, Hye-Jin;Kim, Won-Bae;Kim, Soon-Hoe;Lee, Sang-Kook
대한약학회:학술대회논문집
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대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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pp.68.3-69
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2003
Matrix metalloproteinases (MMPs) play an important role in tumor invasion and metastasis by extracellular matrix degradation. To analyze the effect of DA-125, a anthracyclin derivative, on the invasion or metastasis of cancer cells the expression of matrix metalloproteases (MMPs) was investigated in human fibrosarcoma HTl080 cells by RT-PCR or gelatin zymographic methods. As result, DA-125 suppressed the expression of MMP-2 and 9 as well as tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) TIMP-2 and MT1-MMP with a time- and dose-dependent manner. Inaddition, DA-125 inhibited cancer cell migration and colony formation, and also exhibited the inhibitory activities of invasion and motility with a matrigel and type I collagen assay. (omitted)
유선에 존재하는 유선 상피 모세포(mammary epithelial stem cells)의 존재 증거, 정상 조직에서 이들의역할, flow cytometry 및 면역 염색법에 의한 세포 분리, 세포 기질 단백질을 이용한 삼차원적 세포 배양에서의 증식 등을 요약한다. 유선의 실질 조직에 상피 모세포가 존재한다는 것은 여러 형태의 이식 실험에서 설명되었고 또 모세포의 표현형적 특징들은 여러 가지의 monoclonal antibodies에 의해 논증되었다. 이들 연구의 결과들은 유선의 모세포군이 end bud와 유선의 기저층(basal layer)에 존재한다고 제시하고 있다. 이들을 분리, 동정하기 위해 FITC-PNA와 PE-Thy-1.1 항체와 같은 세포 표지자를 이용하여 유선 상피 세포를 4군으로 나눌 수 있었다. FITC-PNA에만 양성 반응을 보인 PNA+ 세포군, PE-Thy-1.1에만 양성 반응을 보인 Thy-1.1+ 세포군, 이들 두 표지자에 양성 반응을 보인 B+ 세포군, 그리고 양쪽에 음성 반응을 보인 B- 세포군이었는데 이들을 flow cytometry로 분리하고 생체에 이식 실험을 하였을 때 PNA+ 세포군이 유선 모세포들을 가장 많이 가진 것으로 확인되었다. 그리고 유선 상피세포로 이루어진 유선 조직 절편(organoids) 이들 상피세포군을 세포외기질 단백질체인 Matrigel 내에서 배양한 결과 a) stellate, b) duct, c) web, d)squamous, e) lobuloduct 등 5종류의 다세포 구조물이 생성됨을 확인하였다. 이들 중 편평상피화생의 구조물은 정상적인 유선 조직에서는 나타나지 않는 구조물인데 all-trans retinoic acid를 처리하였을 때 배지의 조정에 따라 다소 차이는 있으나 대부분 이들 편평상피화생의 생성이 억제됨을 확인하였다. 이상의 결과로 보아 본 연구에 이용된 생체 이식법 및 삼차원적 세포외기질 세포 배양법이 상피세포의 성장, 분화 및 모세포 연구에 유용하게 이용될 수 있으리라 사료된다.
목 적 : 교모세포종은 흔한 원발성 뇌종양이며 생물학적 특성상 빠른 성장률을 보이는 것 외에 침습성이 강하여 종양과 인접한 부분을 파괴 시킬 뿐 아니라 직접접촉하지 않는 부분의 파괴도 일어나게 되어 치료 예후가 매우 불량한 것으로 되어 있다. 광역학치료는 광감각제를 이용하며 광감각제는 적절한 파장의 광원에 노출되면 세포 내에서 산소독성 물질을 생성하여 세포괴사를 유도하는 것이 주 살해작용의 기전이다. 본 실험에서는 사람의 신경교종 세포주인 U87 세포를 이용하여 실험관 내에서 광감각제 photofrin을 이용한 광역학치료가 종양의 침습성에 미치는 영향을 알아보고 동시에 이를 뇌종양치료의 새로운 방법으로 사용될 수 있는지의 여부를 알아보고자 하였다. 재료 및 방법 : 교모세포종 세포주인 U87 세포를 여러 농도의 photofrin으로 처리한 후 632nm $100mJ/cm^2$의 고정된 광선조건에서 본 실험을 시행 하였으며 Microculture tetrazolium(MTT) assay를 이용하여 세포 살해능력을 측정하고 침습성은 matrigel artificial basement membrane assay 및 tumor spheroid fetal rat brain aggregate(FRBA) confrontation assay를 이용하여 측정하였다. 결 과 : MTT assay를 이용하여 측정한 광역학 치료의 세포살해능력은 $100mJ/cm^2$의 광선 세기에서 광감각제인 photofrin의 농도에 비례하여 세포 살해 능력을 보였다. Matrigel artificial basement membrane assay 를 이용한 종양 침습성 검사에서 광역학치료가 종양침습의 억제효과를 나타냄을 알 수 있었으며 특히 세포 살해능력을 별로 보이지 않았던 photofrin 농도 2.5ug/ml에서 뚜렷한 침습억제효과를 나타내고 있었다(p<0.05). tumor spheroid fetal rat brain aggregate(FRBA) confrontation assay에서는 brain aggregate의 파괴와 종양의 침습을 관찰할 수 있었는데 파괴의 모양은 생체내에서 보이는 것과 비슷 하였다. 또한 그 정도와 범위는 처리된 Photofrin의 농도에 비례하여 종양침습이 억제됨을 알 수 있었다. 결 론 : 이러한 결과를 종합해 보았을 때 PDT는 종양세포의 침습성에 중요한 역할을 함을 알 수 있었으며 PDT 는 세포 살해능력뿐 아니라 침습성에도 영향을 미침으로써 종양 치료에 유용한 방법으로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
Genistein은 대두 및 그들의 부산물에 풍부하게 존재하는 isoflavone의 일종으로 정상세포에서는 독성을 나타내지 않는 범위에서 다양한 in vitro 및 in vivo 모델에서 암세포의 증식을 효과적으로 억제할 수 있는 천연물로 알려져 있다. 본 연구에서는 MCF-7 및MDA-MB-231 유방암세포에서 matrix metalloproteinases (MMPs)의 활성 및 발현과 침윤성에 미치는 genistein의 영향을 조사하였다. 본 연구의 결과에 의하면 genistein은 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate (TPA) 처리에 의하여 활성화된 MMP-2 및 -9의 활성을 유의적으로 차단하였으며, 이는 전사 및 번역 수준에서 MMP-2 및 -9의 발현 억제와 연관성이 있었다. 또한 matrigel invasion assay를 통하여 genistein은 두 유방암세포의 침윤성을 완벽하게 차단하였음을 관찰하였으며, 이러한 효과는 genistein의 세포독성 효과에 의한 것이 아니었음을 알 수 있었다. 비록 in vivo 동물 실험을 통한 부가적인 연구의 필요성이 있으나, 본 연구의 결과는 genistein이 암의 전이를 억제할 수 있는 효과적인 식이 소재임을 보여주는 것이다.
Kim, Ji-Hye;Kim, Gee-Hye;Kim, Jae-Won;Pyeon, Hee Jang;Lee, Jae Cheoun;Lee, Gene;Nam, Hyun
Molecules and Cells
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제39권11호
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pp.790-796
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2016
Dental pulp is a highly vascularized tissue requiring adequate blood supply for successful regeneration. In this study, we investigated the functional role of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) as a perivascular source for in vivo formation of vessel-like structures. Primarily isolated SHEDs showed mesenchymal stem cell (MSC)-like characteristics including the expression of surface antigens and in vitro osteogenic and adipogenic differentiation potentials. Moreover, SHEDs were positive for NG2, ${\alpha}$-smooth muscle actin (SMA), platelet-derived growth factor receptor beta ($PDGFR{\beta}$), and CD146 as pericyte markers. To prove feasibility of SHEDs as perivascular source, SHEDs were transplanted into immunodeficient mouse using Matrigel with or without human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Transplantation of SHEDs alone or HUVECs alone resulted in no formation of vessel-like structures with enough red blood cells. However, when SHEDs and HUVECs were transplanted together, extensive vessel-like structures were formed. The presence of murine erythrocytes within lumens suggested the formation of anastomoses between newly formed vessel-like structures in Matrigel plug and the host circulatory system. To understand underlying mechanisms of in vivo angiogenesis, the expression of angiogenic cytokine and chemokine, their receptors, and MMPs was compared between SHEDs and HUVECs. SHEDs showed higher expression of1VEGF, SDF-$1{\alpha}$, and $PDGFR{\beta}$ than HUVECs. On the contrary, HUVECs showed higher expression of VEGF receptors, CXCR4, and PDGF-BB than SHEDs. This differential expression pattern suggested reciprocal interactions between SHEDs and HUVECs and their involvement during in vivo angiogenesis. In conclusion, SHEDs could be a feasible source of perivascular cells for in vivo angiogenesis.
Background: Platelet-activating factor (PAF) induces nuclear factor $(NF)-{\kappa}B$ activation and angiogenesis and increases tumor growth and pulmonary tumor metastasis in vivo. The role of $NF-{\kappa}B$ activation in PAF-induced angiogenesis in a mouse model of Matrigel implantation, and in PAF-mediated pulmonary tumor metastasis were investigated. Methods: Angiogenesis using Matrigel and experimental pulmonary tumor metastasis were tested in a mouse model. Electrophoretic mobility shift assay was done for the assessment of $NF-{\kappa}B$ translocation to the nucleus. Expression of angiogenic factors, such as tumor necrosis factor $(TNF)-{\alpha}$, interleukin $(IL)-1{\alpha}$, basic fibroblast growth factor (bFGF), and vascular endothelial growth factor (VEGF) were tested by RT-PCR and ELISA. Results: PAF induced a dose- and time-dependent angiogenic response. PAF-induced angiogenesis was significantly blocked by PAF antagonist, CV6209, and inhibitors of $NF-{\kappa}B$ expression or action, including antisense oligonucleotides to p65 subunit of $NF-{\kappa}B$ (p65 AS) and antioxidants such as ${\alpha}$-tocopherol and N-acetyl-L-cysteine. In vitro, PAF activated the transcription factor, $NF-{\kappa}B$ and induced mRNA expression of $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\alpha}$, bFGF, VEGF, and its receptor, KDR. The PAF-induced expression of the above mentioned factors was inhibited by p65 AS or antioxidants. Also, protein synthesis of VEGF was increased by PAF and inhibited by p65 AS or antioxidants. The angiogenic effect of PAF was blocked when anti-VEGF antibodies was treated or antibodies against $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\alpha}$, and bFGF was co-administrated, but not by antibodies against $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\alpha}$, and bFGF each alone. PAF-augmented pulmonary tumor metastasis was inhibited by p65 AS or antioxidants. Conclusion: These data indicate that PAF increases angiogenesis and pulmonary tumor metastasis through $NF-{\kappa}B$ activation and expression of $NF-{\kappa}B$-dependent angiogenic factors.
Purpose: This study was to examine the proliferation and function of the adipose tissue-derived endothelial cells according to different culture medium conditions. Materials and Methods: Adipose tissue-derived CD146 positive endothelial cells were cultured in according to different culture mediums (DMEM culture medium with or without osteogenic inductive agents and EBM-2 culture medium with or without osteogenic inductive agents). The proliferation and function of the adipose tissue-derived endothelial cells was examined in different culture medium conditions. Results: Adipose tissue-derived endothelial cells formed tube-like structures on Matrigel in EBM-2 culture medium with or without osteogenic inductive agents. However, the cells did not form tube-like structures on Matrigel in DMEM medium with or without osteogenic inductive agents. After 24 hours of culture, among the culture medium using EBM-2, the proliferation of the cells were promoted in EBM-2 medium without osteogenic inductive agents than in EBM-2 medium with osteogenic inductive agents. However, 72 hours of culture, the proliferation of the cells were promoted in EBM-2 medium with osteogenic inductive agents than in EBM-2 medium without osteogenic inductive agents. Conclusion: These results suggest that the proliferation and function of the adipose tissue-derived CD146 positive endothelial cells could be maintained in EBM-2 with osteogenic inductive agents.
Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) are multipotent stem cells derived from periodontium and have mesenchymal stem cell (MSC)-like characteristics. Recently, the perivascular region was recognized as the developmental origin of MSCs, which suggests the in vivo angiogenic potential of PDLSCs. In this study, we investigated whether PDLSCs could be a potential source of perivascular cells, which could contribute to in vivo angiogenesis. PDLSCs exhibited typical MSC-like characteristics such as the expression pattern of surface markers (CD29, CD44, CD73, and CD105) and differentiation potentials (osteogenic and adipogenic differentiation). Moreover, PDLSCs expressed perivascular cell markers such as NG2, ${\alpha}-smooth$ muscle actin, platelet-derived growth factor receptor ${\beta}$, and CD146. We conducted an in vivo Matrigel plug assay to confirm the in vivo angiogenic potential of PDLSCs. We could not observe significant vessel-like structures with PDLSCs alone or human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) alone at day 7 after injection. However, when PDLSCs and HUVECs were co-injected, there were vessel-like structures containing red blood cells in the lumens, which suggested that anastomosis occurred between newly formed vessels and host circulatory system. To block the $SDF-1{\alpha}$ and CXCR4 axis between PDLSCs and HUVECs, AMD3100, a CXCR4 antagonist, was added into the Matrigel plug. After day 3 and day 7 after injection, there were no significant vessel-like structures. In conclusion, we demonstrated the perivascular characteristics of PDLSCs and their contribution to in vivo angiogenesis, which might imply potential application of PDLSCs into the neovascularization of tissue engineering and vascular diseases.
서론 : Laminin의 수용기로 알려진 Integrin $\alpha6\beta4$의 세포내 표현 정도는 편평상피암을 위시한 여러 악성종양의 전이능력 및 예후와 밀접한 상관관계가 없다고 알려져 있다. 이 Integrin은 Laminin과 같은 세포와 리간드와 결합하면 상피세포의 기저막 지주 구조물인 hemidesmosome의 세포체질 요소(cytoskeletal element)와 연관되어 그 결과 세포의 기저막과 세포내 케라틴을 연결하는 역할을 한다. Integrin $\alpha6\beta4$는 구조적으로 다른 많은 integrin들과 달리 $\beta$4의 세포질내 영역(cytoplasmic domain)이 특징적으로 크다. 이 세포질내 영역 $\beta$4 integrin의 기능은 아직 밝혀지지 않고 있으나 아마 세포 성장의 신호전달 및 악성종양의 특징인 침윤 전이에 관련할 것으로 보아지고 있다. 재료 및 방법: 저자들은 우선 $\beta$4 integrin의 wild type s-DNA와 $\beta$4 세포질내 영역(cytoplasmic domain) 및 $\beta$4의 tyrosine 인산화 반응 부위가 각각 결손된 c-DNA를 PCR을 통하여 합성하여 pRc/CMV 벡터에 삽입한 후 원래 $\beta$4 integrin의 발현이 결집된 인간 방광암 세포에 Calcium phosphate precipitation 방법으로 주입(transfection)시켜 형질변환된 세포를 면역형광법, Flow cytometry 및 Immunoprecipitation 방법으로 클로닝하여 wild type $\beta$4-full length(Clone FL), truncated $\beta$4-cytoplasmic domain(C1one CD), 및 mutated $\beta$4-tyrosine phosphorylation site (Clone M)을 얻었다. 암 세포의 부착 및 침투 능력의 기능적 연구로 모노 클로날 항체와 fibronectin, laminin, Matrigel을 단백질 기질로 사용하였으며 결과 비교를 위하여 pRc/CMV 벡터만 주입시켰던 클로운과 방광암 세포주를 $\beta$4 integrin 음성 대조군으로 또한 이 Integrin의 높은 발현을 보이는 두경부 편평상피암 세포주를 양성 대조군으로 이용하였다. 결과 : 세포부착능력에 있어서 온전한 $\beta$4 cytoplasmic domain이 존재하는 클로운이 laminin에 강한 부착능력을 보였으나 fibronectin의 부착정도는 $\beta$4 integrin의 표현정도와 관계없이 모든 클로운에서 비슷하였다. Matrigel을 투과하는 암세포 침윤 능력에서는 $\beta$4 integrin의 표현이 존재하는 클로운들이 투과 능력이 높았으나 세포외 리간드가 없는 control membrane을 사용하였을 때와 비교하여 투과능력의 차이를 보이지 않았다. 결론 : 유전자 주입(transfection) 방법으로 integrin의 다양한 클로운의 합성이 가능하여 이 Integrin의 암 세포의 부착 및 침투 능력에서의 기능을 규명 할 수 있게 한다. $\beta$4 integrin은 편평상피 암세포의 부착에 있어서 세포외 리간드 laminin과 특이 결합하여 부착 능력을 높이는 중요한 역할을 하며 편평상피 암세포의 침투에 있어서는 $\beta$4 integrin의 표현이 침투 능력을 높이는 역할을 하나 이때에는 laminin과 같은 리간드와의 특이 결합에 의존하지는 않는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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