골재생유도술에 의한 골재생 과정에서의 생물학적 현상을 보다 구체적으로 이해하고자 인위적으로 골결손부를 형성하고, 비흡수성 비공유성 차폐막을 이용하여 골성회복 시 주위 연조직의 유입을 차단한 다음 골수강 및 골면으로부터 유래되는 세포들에 의한 골성회복 양상과 이때 이들 세포의 조골세포로의 분화정도를 판정하기 위하여 비교원성 골기질 단백질인 OSN, OPN 그리고 OSC mRNA의 발현 양상을 비교 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 실험 전기간에 걸쳐 골재생유도술을 시행한 군에서 보다 신속하고 양호한 골성회복을 보였다. 차폐막을 처리한 실험군에서는 인접골의 주변부로부터 신생골이 형성되어 조골세포의 분화가 조기에 골결손부에 국한되어 유도된 반면, 대조군에서는 주변연조직의 개입으로 인하여 실험군 보다는 약 1주정도 신생골의 형성이 지연되었으며, 따라서 골수강 내의 기질세포의 조골세포로의 분화 역시 지연되었다. 이상의 사실에서 골창상부에서 차폐막에 의해 형성된 차폐공간은 기질 세포들의 보다 신속한 조골세포로의 분화 증식과 이들에 의해 신생된 골주들의 빠른 골 개조를 조장하였음을 시사한다.
Induction of apoptosis is considered to be the underlying mechanism that accounts for the efficiency of chemotherapeutic drugs. It has recently been proposed that doxorubicin (DOX) can induce apoptosis in human leukemic cells via the Fas/Fas Ligand (FasL) system. Comparison of Fas and FasL mRNA expression between drug- and anti-Fas antibody(Fas-Ab)- induced apoptosis was analyzed for examining the role of Fas/FasL system in the mediation of drug-induced apoptosis. After HL-60 cells were routinely cultured, MTT assay was performed for cytotoxicity test. Giemsa staining was carried out to monitor the apoptosis morphologically. By semiquantitative RT-PCR analysis, the expression of Fas and FasL at 4, 10, 24 hours was determined after DOX and Fas-Ab treatment. Dose-dependent cytotoxicity was induced by DOX-treatment, while Fas-Ab treatment showed the similar dose-dependent pattern but the cytotoxicity is not reached at LD$_{50}$ at 100 ng/ml concentration of Fas-Ab. In the 10ng/m1 DOX and 10ng/m1 Fas-Ab treated group, typical apoptotic cell morphology was shown such as fragmented nuclei and cell membrane budding in the Giemsa-stained slide. Fas mRNA expression was not changed significantly in the both groups. But, FasL mRNA expression was induced significantly at initial period of apoptosis. In this study, Fas/FasL interaction assumed to be involved in drug-induced apoptosis.s.
Ronnau, Cindy;Liebermann, Herbert E. H.;Helbig, Franz;Staudt, Alexander;Felix, Stephan B.;Ewert, Ralf;Landsberger, Martin
BMB Reports
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제42권2호
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pp.106-112
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2009
The bio-complex "reaction pattern in vertebrate cells"(RiV) is mainly represented by characteristic exosome-like particles - probably as reaction products of cells to specific stress. The transcription factor NF-kappaB plays a central role in inflammation. We tested the hypothesis that RiV particle preparations (RiV-PP) reduce cellular adhesion molecule (CAM) expression (ICAM-1, VCAM-1, E-selectin) by the attenuation of NF-kappaB translocation in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). After 4 hours, pre-incubation of HUVEC with RiV-PP before stimulation with TNF-alpha significantly reduced ICAM-1 (65.5${\pm}$10.3%) and VCAM-1 (71.1${\pm}$12.3%) mRNA expression compared to TNF-alpha-treated cells (100%, n=7). ICAM-1 surface expression was significantly albeit marginally reduced in RiV/TNF-alpha- treated cells (92.0${\pm}$5.6%, n=4). No significant effect was observed on VCAM-1 surface expression. In RiV/TNF-alpha-treated cells (n=4), NF-kappaB subunits p50 (85.7${\pm}$4.1%) and p65 (85.0${\pm}$1.8%) nuclear translocation was significantly reduced. RiV-PP may exert an anti-inflammatory effect in HUVEC by reducing CAM mRNA expression via attenuation of p50 and p65 translocation.
Sehwan Kim;Seungheon Lee;Gil Jung Kim;Young Chang Sohn
한국발생생물학회지:발생과생식
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제27권2호
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pp.91-99
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2023
The sea cucumber, Apostichopus japonicus, is one of the most valuable aquatic species. The color of body wall and appearance are important for the value of sea cucumbers. To examine expression pattern of long-chain acyl-coenzyme A dehydrogenase (LCAD), nuclear distribution C-containing protein 3 (NUDCD3), and receptor tyrosine kinase Tie-1 (TIE1), previously reported as differently expressed genes during the pigmentation of sea cucumber, we analyzed the temporal profiles of LCAD, NUDCD3, and TIE1 mRNAs in LED-exposed and light-shielded A. japonicus. Real-time quantitative PCR revealed that the LCAD, NUDCD3, and TIE1 mRNAs from the juveniles at 40-60 days post-fertilization (dpf) exhibited increasing patterns as compared to those of an early developmental larva (6-dpf). At 60-dpf juveniles, the LCAD and TIE1 mRNA levels of LED-exposed individuals were higher than those of light-shielded ones, whereas at 40-dpf and 50-dpf juveniles, the NUDCD3 mRNA expression was higher in the light-shielded condition (p<0.05). In the pigmented juveniles (90-dpf), the LCAD and TIE1 mRNA levels tended to show higher levels in red individuals than those in green ones, but there was a conversely higher level of NUDCD3 mRNA in green larva. In situ examination of LCAD and NUDCD3 mRNAs in light-shielded 6-dpf larva revealed that both genes are mainly expressed in the internal organs compared to the body surface. Together, these results may provide insights into the differential gene expression of LCAD, NUDCD3, and TIE1 during pigmentation process of the sea cucumber.
치주인대에 일회성의 적절한 인장력을 가하였을 때 견인측 치근막에서 나타나는 혈관성장인자(VEGF)와 그 수용체(VEGFR)의 발현의 변화를 보기 위해 본 연구를 시행하였다. 8-10주된 Sprague-Dawley계 웅성 백서(rat)에서 상악좌측 제1대구치에 closed coil을 이용하여 근심 방향으로의 교정력을 가하였으며 1시간, 12시간, 1일, 3일, 1주, 2주 군으로 분리하여 각 군 당 5마리씩의 실험동물을 배정하였다. 우측 제1대구치는 치경부에 ligature wire만 결찰하고 동일 실험시간이 지난 후 대조군으로 이용하였다. 견인력이 가해진 치근막에서 VEGF와 VEGFR 및 이들의 mRNA의 발현 양상의 변화를 H&E 염색 및 면역조직화학적 염색과 in situ hybridization법으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 치주인대에 인장력을 가하면 치주인대의 신장으로 인한 혈관의 압박에 의해 울혈과 부분적인 출혈상이 초기에 나타났으나 3일 이내에 대조군과 같은 정도로 회복되었으며 신생골의 형성은 3일 이후 나타나서 2주간 지속되었다. 2. 치주인대에 인장력을 가하면 치주인대 세포와 조골세포, 백악아세포에서의 VEGF와 VEGF mRNA의 발현증가가 나타나며 이는 치주인대 혈관의 증가로 이어졌다. 3. 인장력을 가하고 3일 이후에는 VEGF와 VEGF mRNA의 발현은 주로 치조골 인접면의 치주인대세포와 조골세포에서만 관찰되었으며 2주후에는 VEGF와 VEGF mRNA, 치주인대혈관 모두 대조군과 유사한 정도로 감소하였다. 4. VEGF 수용체인 Flt-1과 Flk-1은 거의 동일한 발현 양상을 보였으며 주로 혈관 내피세포와 조골세포에서 관찰되었으나 치주인대에 인장력을 가하면 초기에 혈관내피세포에서 그 발현이 증가하였다. 조골세포에서의 발현증가는 내피세포에 비교해서 다소 늦게 나타났으나 발현의 증가는 더 뚜렷하였다. 결론적으로 교정력을 가했을 때 견인측 치주인대의 치주인대세포와 조골세포, 백악아세포에서 VEGF와 VEGF mRNA의 발현이 증가하며 이에 이어 혈관의 증가가 나타나고 신생골의 형성은 혈관의 증가 후에 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 백악아세포에서 발현이 증가된 VEGF mRNA는 치조골측으로 편재해 있던 혈관이 견인의 방향으로 치아를 향해 성장하도록 유도하는 것으로 사료되었다. VEGFR 및 VEGFR mRNA는 내피세포 뿐 아니라 조골세포와 골세포, 치주인대세포에서도 발현이 증가하여 VEGF가 paracrine한 방식 뿐 아니라 autocrine한 방식으로도 작용함을 알 수 있었다.
Toll-like receptors (TLRs) are a major pattern recognition receptor that recognize the structure of invading pathogen and play key roles by triggering immune response. In this study, we identified a sequence of TLR homolog and characterized at molecular level from the abalone (Haliotis discus hannai). Multiple alignments and phylogenetic analysis of abalone TLR protein belongs to the TLR 2/6. Expression level of abalone TLR 2/6 in the tissue was comparatively high in the mantle, gill, digestive duct, and hemocytes, but lowest in the muscle. Expression level of abalone TLR 2/6 mRNA in the mantle, gill, digestive duct, and hemocytes was 20-fold, 60-fold, 115-fold, 112-fold higher than in the muscle, respectively. Expression level of abalone TLR 2/6 mRNA in the mantle was steadily increased until 12 h and decreased post-infection with Vibrio parahemolyticus. While the expression level of abalone TLR 2/6 mRNA in the gill and hemocytes was drastically increased at 6 and 9 h post-infection with Vibrio parahemolyticus, respectively. These results suggest that abalone TLR 2/6 is conserved through evolution and may play roles similar to its mammalian counterparts.
Jack bean [Canavalia ensiformis (L.)], belonging to the Leguminosae family has been frequently used in edible and medicinal plants in Asian countries. Jack beans are high in protein which is approximately 30%. Concanavalin A (Con A) is a major protein of Jack bean and belongs to the family of legume lectins. It has inhibitory effect on hepatocellular carcinoma by inducing autophagy. However, Con A negatively affects nutrient utilization by other mechanisms. It binds to the glycoproteins and glycolipids of the digestive tract mucosa, inhibits the activity of the enzymes of the brush border of the enterocytes. In order to use Jack bean young seedpods, they are restricted to 'young pods (soft, pre-swelling)' according to the 'Food Code' (Ministry of Food and Drug Safety). Therefore, in this study, we investigated the quantitative change of Con A across developmental stages of Jack bean pods. Biological samples consisted of Jack bean pods and seeds in 7 stages of development. The expression pattern of Con A mRNA was monitored by quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR). Expression of Con A proteins was analyzed by western blotting. The expression of Con A mRNA and protein in the seeds tended to increase gradually as the seeds expanded. However, in pods, they were much less than in seeds. As the expression of Con A mRNA and protein increases as the pods thicken, it is predicted that Con A synthesis increases when the thickness growth of the pod begins after the length growth of the pod is completed. Since the expression of Con A in the pods and seeds in very low when the pods are about 2 cm, therefore 2 cm pods seem appropriate when using 'young pods'. It is also necessary to study other proteins in Jack bean, such as Urease and Canavalin. These studies will serve as the basis for processing Jack bean.
The ATP-sensitive potassium $(K_{ATP})$) channel is a member of inward rectifier potassium channel (Kir) that is inhibited by intracellular ATP and functions in close relation to sulfonylurea receptors (SUR). Although the molecular mechanism and physiological function of $K_{ATP}$ channels are well understood, the expression pattern during development or treatment with the channel modulators such as glybenclamide is little known. In this work, we determined mRNA levels of a $K_{ATP}$ channel (Kir6.2) and a sulfonylurea receptor (SUR2) in rat tissues by RNase protection assay. Levels of Kir6.2 and SUR2 mRNA in the rat brain and skeletal muscle were higher in adult $(90{\sim}120\;days)$ than in neonate $(2{\sim}8\;days),$ whereas those in the heart were not much different between neonate $(2{\sim}8\;days)$ and adult $(90{\sim}120\;days).$ In addition, none of $K_{ATP}$ channel modulators (opener, pinacidil and nicorandil; blocker, glybenclamide) affected the Kir6.2 mRNA levels in the heart, brain and skeletal muscle. The results indicate that the expression of Kir and SUR genes can vary age-dependently, but the expression of Kir is not dependent on the long-term treatment of channel modulators. The effect of the channel modulators on mRNA level of SUR is remained to be studied further.
Wang, H.L.;Wang, H.;Zhu, Z.M.;Yang, S.L.;Fen, S.T.;Li, Kui
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제19권7호
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pp.953-957
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2006
The eukaryotic elongation factor 1 A (EEF1A) participates in protein synthesis by forming the eEF1A GTP tRNA complex to deliver aminoacyl-tRNA to the A site of ribosomes. This study described cDNA sequences and partial genomic structure of porcine EEF1A1. The porcine EEF1A1 gene encoded a protein with 462 amino acids, which shared complete homology with human, chimpanzee and dog. The temporal expression pattern showed the diversity of EEF1A1 level in mRNA was relatively minor in prenatal embryo skeletal muscle, however, the expression decreased during aging after birth in skeletal muscle of the Chinese Tongcheng pig. The spatial expression patterns indicated that the gene expressed in skeletal muscle, heart, lung, liver, kidney, fat and spleen. In addition, we assigned the gene to porcine chromosome 1 using a radiation hybrid panel.
This study was conducted to analyze the expression pattern of inhibitor of DNA binding proteins (Id)1 and Id2 mRNA on folliculogenesis in rat ovary. The ovaries were obtained from 27 days old Sprague-Dawley rat, fixed, dehydrated, and paraffin embedded. For in situ hybridization, anti-sense and sense Idl and Id2 cRNA probes were prepared and applied to the ovarian section. The ovarian sections were coated with NTB-2 emulsion. After that, the slides were developed and counterstained with hematoxylin and eosin staining. In oocytes, the hybridizational signals of Id1 mRNA were strong in primordial and primary follicles, however, there were no signals in that of atretic or preovulatory follicles. The Id2 mRNA signals were also strong in the oocytes of primordial, primary and secondary follicles. Interestingly, the Id2 mRNA was expressed specifically granulosa cells, but nor in oocyte or theca cells in dominant and preovulatory follicles. Based on these results, Id1 and Id2 mRNA was expressed specifically at follicle stages and follicular tissue and might be closely related with follicle development.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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