• 한국수산과학회지
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• 제54권2호
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• pp.152-161
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• 2021

Eisenia bicyclis is known to have secondary metabolites exhibiting various biological activities. In a preliminary study, the n-hexane fraction obtained from the ethanolic extract of E. bicyclis showed higher anti-inflammatory activity than the ethyl acetate and butyl alcohol fractions based on the inhibition of lipopolysaccharide (LPS)-stimulated nitric oxide (NO) production in RAW 264.7 cells. Using this fraction (E. bicyclis hexane fraction, EHF), we investigated the molecular mechanisms underlying its anti-inflammatory effect in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Pretreatment of the cells with up to 50 ㎍/mL EHF significantly inhibited NO and prostaglandin E₂ production as well as their responsible enzyme proteins and mRNAs, in a dose-dependent manner (P<0.05). Similarly, EHF markedly reduced the production of pro-inflammatory cytokines, such as interleukin (IL)-1β, IL-6 and tumor necrosis factor (TNF)-α as well as their mRNA levels. Nuclear translocation of nuclear factor-kappa B (NF-κB) was strongly suppressed by EHF treatment. EHF significantly reduced the phosphorylation of mitogen-activated protein kinases and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt in LPS-stimulated cells. Moreover, EHF reduced ear edema in phorbol myristate acetate (PMA)-induced mice. These results indicate that EHF contains potent anti-inflammatory compounds, which may be used as a dietary supplement for the prevention of inflammatory diseases.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제49권4호
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• pp.543-551
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• 2021

Nocardiopsis species produce bioactive compounds, such as antimicrobial and anti-cancer agents and toxins. However, no reports have described their anti-inflammatory and anti-fibrotic effects during nasal polyp (NP) formation. In this study, we investigated whether marine-derived bacterial Nocardiopsis sp. 13G027 exerts anti-inflammatory and anti-fibrotic effects on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 macrophages and transforming growth factor (TGF)-β1-induced NP-derived fibroblasts (NPDFs). Nitric oxide (NO) and prostaglandin E₂ (PGE₂) levels were analyzed. Extract from Nocardiopsis sp. 13G027 significantly inhibited the upregulation of NO and PGE₂ in LPS-activated RAW 264.7 macrophages. The expression of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and protein kinase B (Akt/PKB) in LPS-induced RAW 264.7 macrophages was evaluated; smooth muscle alpha-actin (α-SMA), collagen type I (Col-1), and fibronectin also phosphorylated small mothers against decapentaplegic (SMAD) 2 and 3 in TGF-β1-stimulated NPDFs. The Nocardiopsis sp. 13G027 extract suppressed the phosphorylation of MAPKs and Akt and the DNA-binding activity of activator protein 1 (AP-1). The expression of pro-fibrotic components such as α-SMA, Col-1, fibronectin, and SMAD2/3 was inhibited in TGF-β1-exposed NPDFs. These findings suggest that Nocardiopsis sp. 13G027 has the potential to treat inflammatory disorders, such as NP formation.

• 한국자원식물학회:학술대회논문집
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• 한국자원식물학회 2022년도 추계학술대회
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• pp.103-103
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• 2022

Ganghwaljetongyeum (GHJTY) is a complex herbal decoction comprising 18 plants; it is used to treat arthritis. In order to develop a new anti-arthritic herbal medication, we selected 5 out of 18 GHJTY plants by using bioinformatics analysis. The new medication, called ChondroT, comprised water extracts of Osterici Radix, Lonicerae Folium, Angelicae Gigantis Radix, Clematidis Radix, and Phellodendri Cortex. This study was designed to investigate its chondroprotective and anti-inflammatory effects to develop an anti-arthritic herb medicine. ChondroT was validated using a convenient and accurate high-performance liquid chromatography. photodiode array (HPLC-PDA) detection method for simultaneous determination of its seven reference components. The concentrations of the seven marker constituents were in the range of 0.81-5.46 mg/g. The chondroprotective effects were evaluated based on SW1353 chondrocytes and matrix metalloproteinase 1 (MMP1) expression. In addition, the anti-inflammatory effects of ChondroT were studied by Western blotting of pro-inflammatory enzymes and by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of inflammatory mediators in lipopolysaccharides (LPS)-induced RAW264.7 cells. ChondroT enhanced the growth of SW1353 chondrocytes and also significantly inhibited IL-1β-induced MMP-1 expression. However, ChondroT did not show any effects on the growth of HeLa and RAW264.7 cells. The expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) was induced by LPS in RAW264.7 cells, which was significantly decreased by pre-treatment with ChondroT. In addition, ChondroT reduced the activation of NF-κB and production of inflammatory mediators, such as IL-1β, IL-6, PGE2, and nitric oxide (NO) in LPS-induced RAW264.7 cells. These results show that ChondroT exerted a chondroprotective effect and demonstrated multi-target mechanisms related to inflammation and arthritis. In addition, the suppressive effect was greater than that exhibited by GHJTY, suggesting that ChondroT, a new complex herbal medication, has therapeutic potential for the treatment of arthritis.

• 한방재활의학과학회지
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• 제21권1호
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• pp.35-46
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• 2011

Objectives : The present study investigated inflammatory effect of Rheum undulatum L. in lipopolysaccharide-exposed rats and Raw 264.7 cells. Methods : Male rats weighting $185.39{\pm}8.21g$ fed basal diet for 1 week and 32 rats were divided into a control group and 3 experimental groups. We fed a control group of rats a basal diet and administered normal saline(100 mg/kg, 1time/1day) for 6 weeks. And we fed basal diet and administered an extract of Rheum undulatum L.(100 mg/kg, 200 mg/kg, 300 mg/kg, 1time/1day) to each experimental group of rats. We measured the plasma concentration of $IL-1{\beta}$($interleukin-1{\beta}$), IL-6 and $TNF-{\alpha}$(tumor necrosis $factor-{\alpha}$), liver cytokines, Raw 264.7 macrophages cytokines. Results : The plasma concentration of $IL-1{\beta}$, IL-6 and $TNF-{\alpha}$ peaked at 5h(hour) after LPS(lipopolysaccharides) injection, and the values of the Rheum undulatum L. extract groups were lower than those of the control group. In the increment of these cytokines concentration at 2h and 5h after LPS injection, the Rheum undulatum L. groups were lower than that of control group. The plasma concentration of IL-10 peaked at 5h after LPS injection, and the values of the Rheum undulatum L. extract groups were higher than those of the control group. In the increment of this cytokine concentration at 2h and 5h after LPS injection, the Rheum undulatum L. groups were higher than that of control group. Liver cytokines measurement was done at 5h after LPS injection. The concentration of liver $IL-1{\beta}$ and IL-6 in the Rheum undulatum L. groups was lower than that of the control group. The concentrations of liver $TNF-{\alpha}$, and IL-10 showed no significant differences among all the treatment groups. In the studies of lipopolysaccharide-exposed Raw 264.7 cells, the concentration of $IL-1{\beta}$, IL-6 and $TNF-{\alpha}$ in the lipopolysaccharide-exposed cells groups was higher than that of control group(normal group), and in the lipopolysaccharide-exposed cells groups, these values showed a tendency to decrease in the Rheum undulatum L. groups. The concentration of IL-10 in the lipopolysaccharide-exposed cells groups was higher than that of control group(normal group), and in the lipopolysaccharide-exposed cells groups, the values showed a tendency to increase in the Rheum undulatum L. groups. Conclusions : These results indicate that the Rheum undulatum L. extracts have an functional material for inflammatory activities.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제5권1호
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• pp.55-63
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• 2001

In macrophages, lipopolysaccharide (LPS) alone or in combination with $interferon-{\gamma}\;(IFN-{\gamma})$ has been shown to release a nitric oxide (NO) through the increase of the transcription of the inducible nitric oxide synthase (iNOS) gene. To investigate the exact intracellular signaling pathway of the regulation of iNOS gene transcription by LPS plus $IFN-{\gamma},$ the effects of protein tyrosine kinase (PTK) inhibitor and protein kinase C (PKC) inhibitors on NO production, iNOS mRNA expression, nuclear $factor-_{\kappa}B\;(NF-_{\kappa}B)$ binding activity and the promoter activity of iNOS gene containing two $NF-_{\kappa}B$ sites have been examined in a mouse macrophage RAW 264.7 cells. LPS or $IFN-{\gamma}$ stimulated NO production, and their effect was enhanced synergistically by mixture of LPS and $IFN-{\gamma}.$ The PTK inhibitor such as tyrphostin reduced LPS plus $IFN-{\gamma}-induced$ NO production, iNOS mRNA expression and $NF-_{\kappa}B$ binding activity. In contrast, PKC inhibitors such as H-7, Ro-318220 and staurosporine did not show any effect on them. In addition, transfection of RAW 264.7 cells with iNOS promoter linked to a CAT reporter gene revealed that tyrphostin inhibited the iNOS promoter activity through the $NF-_{\kappa}B$ binding site, whereas PKC inhibitors did not. Taken together, these suggest that PTK, but not PKC pathway, is involved in the regulation of the iNOS gene transcription through the $NF-_{\kappa}B$ sites of iNOS promoter in RAW 264.7 macrophages by LPS plus $IFN-{\gamma}$.

• 한국식품과학회지
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• 제50권6호
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• pp.642-652
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• 2018

본 연구는 LPS 처리 큰포식 세포에서 옻 추출물, 옻 첨가 된장 및 간장 추출물의 항염증 및 산화방지 효과를 확인하였다. 염증 반응은 자극이 가해지면 히스타민, 세로토닌, 프로스타글란딘과 같은 혈관 활성물질에 의해 혈관 투과성이 증대되어 염증을 유발하고 사이토카인, 활성산소종, lysosomal enzyme 등 다양한 매개 인자가 관여한다. 자극에 의한 큰포식세포의 염증반응은 $TNF-{\alpha}$, IL-6, $IL-1{\beta}$와 같은 pro-inflammatory cytokine의 발현이 유도되고, iNOS와 COX-2에 영향을 받는 유전자의 발현을 자극하게 되어 NO 및 $PGE_2$ 등의 염증 인자가 생성된다. 이에 따라 옻 추출물, 옻 첨가 된장 및 간장 추추물의 염증 및 산화방지시스템 관련 유전자 발현을 분석하였다. 그 결과 옻 추출물은 LPS 자극에 의해 생성된 NO, 염증성 사이토카인 및 $PGE_2$의 생성을 유의적으로 감소시켰다. 옻 추출물은 산화방지관련 핵 내 전사인자인 Nrf2 및 관련 유전자의 발현에 영향을 미치지 않았다. 옻첨가 된장 및 간장 추출물은 NO 및 염증성 사이토카인의 생성을 억제하였지만, 염증 및 산화방지관련 유전자의 발현에 영향을 미치지는 않았다.

• 대한화장품학회지
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• 제44권3호
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• pp.219-229
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• 2018

본 연구에서는 화장품 천연소재로서 모링가 에탄올 추출물의 이용 가능성을 확인하였다. Tyrosinase와 elastase 저해활성을 측정한 결과 각각 $1,000{\mu}g/mL$에서 47%, 39%의 활성을 나타내었다. 모링가 에탄올 추출물에 대한 collagenase 저해활성을 측정한 결과 $1,000{\mu}g/mL$에서 31%의 활성을 확인하였다. 세포 생존율을 MTT 분석법으로 확인한 결과 대식 세포(Raw264.7)와 멜라노마 세포(B16F10)의 농도 구간이 $100{\mu}g/mL$ 일 때 각각 94.2%, 94.8%의 생존율을 보였다. 항염증 활성을 확인하기 위해 griess 분석에 의하여 대식 세포에 lipopolysaccharides (LPS)를 처리하였다. 그 결과 모링가 에탄올 추출물의 농도가 증가함에 따라 NO 발현 억제효과를 확인하였다. Western blot을 통한 단백질 발현 억제 효과를 측정하기 위해 25, 50, $100{\mu}g/mL$ 농도의 모링가 에탄올 추출물과 ${\beta}-actin$을 사용하였다. 그 결과, iNOS, COX-2, MITF, TRP-1, TRP-2, tyrosinase의 단백질 발현양이 $1 00{\mu}g/mL$에서 85.8%, 57.5%, 80.7%, 30%, 29.9%, 23.6%로 억제됨을 확인하였다. 따라서 미백 및 항염증 효과가 우수함을 확인하였고, 모링가 에탄올 추출물의 화장품 소재로서의 가능성을 확인하였다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제53권4호
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• pp.481-487
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• 2010

목 적: 최근 여러 연구결과 천식을 포함한 알레르기질환의 발병에 소아 성장시기에 알레르겐이나 내독소(LPS)등과 같은 물질에 노출이 중요한 역할을 하는 것으로 제시되었다. 이에 연구자들은 출생 초기에 기도 점막을 통한 알레르겐과 내독소에의 노출이 성장한 후에 알레르기 기도염증과 과반응성의 발생에 미치는 효과를 생쥐 모델을 통하여 규명하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법: 실험동물은 무균 상태의 생후 1주이내의 암컷 BALB/c 생쥐를 사용하였다. 실험동물들에게는 각각 신생생쥐시기에 생리식염수, 1% ovalbumin (OVA), $1.0{\mu}g$ LPS, $1.0{\mu}g$ LPS in 1% OVA를 각 비공을 통하여 투여하였다. 실험동물은 연구 시작 제 35일부터 10일간 5% OVA로 감작시켰으며 최종 기도 감작 10일 후부터 3일간 1% OVA로 기도 항원유발을 시행하였다. 최종 기도유발 48시간 후 체적검사(plethysmography)를 이용하여 비특이적 기도과반응성 검사(Methcholine challenge test)를 시행하였으며 검사 후 실험동물을 희생시켜 검체를 취하여 BAL액내 세포분획, 사이토카인, 혈청 면역글로불린을 측정하였다. 결 과: 1) 메타콜린에 의한 기도과반응성은 생후 초기에 OVA, LPS, OVA/LPS를 투여한 군에서 생리식염수를 투여한 군에 비해 통계적으로 유의하게 억제되었다. 2) OVA, LPS, OVA/LPS를 투여한 군에서 BAL 액내의 호산구수와 IL-4, IL-5가 유의하게 낮았다. 3) 혈청내 OVA 특이 IgE는 OVA, LPS, OVA/LPS 투여군에서 유의하게 감소되었다. 결 론: 본 연구 결과 신생생쥐 시기의 점막을 통한 항원, 내독소의 노출이 성숙한 후 항원에 의한 기도염증 및 과반응성의 발생을 억제하였으며 향후 이러한 효과의 작용기전에 대한 연구가 필요할 것으로 생각한다.

• 생명과학회지
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• 제34권7호
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• pp.443-452
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• 2024

아가로오스의 효소가수분해산물로 부터 확보할 수 있는 3,6-무수갈락토오스(L-AHG), 네오아가로비오스(NA2), 네오아가로테트라오스(NA4) 및 네오아가로헥사오즈(NA6)의 항염증 활성을 규명하고자, 마우스 대식세포주 RAW264.7 세포를 대장균 유래 지질다당류(LPS)로 자극할 때 세포표면의 TLR4 수용체의 역할을 통해 유도되는 친염증성 M1 분극화 및 이에 따른 친염증성 반응에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과로서, 이들 아가로오스 분해산물들 중에서 단당류인 L-AHG만이 유일하게, LPS 자극에 의해 RAW264.7 세포에서 유도될 수 있는 M1 분극화의 대표적인 마커인 iNOS 효소의 발현과 이에 따른 NO 생성을 농도의존적으로 현저하게 저해하였고 염증 매개체인 프로스타글란딘 E2의 생성을 촉매하는 COX-2의 발현 수준도 LPS 자극후에는 증가하였지만, L-AHG의 존재에 의해서는 그 증가 수치가 다소 저해되는 것으로 나타났다. 이때 RAW264.7 세포에 대한 L-AHG의 세포독성은 확인되지 않았다. 또한 L-AHG는 LPS로 처리된 RAW264.7 세포내에서 유도되는 친염증 신호전달경로에 있어서 초기 신호전달 단계인 TAK1 활성화 단계까지는 별 영향을 나타내지 않았으나 TAK1의 촉매작용에 의한 JNK 및 p38 MAPK의 활성화 인산화(activating phosphorylation)는 현저하게 저해되었다. 특히, 대식세포의 친염증 신호전달경로에서 TAK1 활성화는, 그 하류 단계에서 NF-kB의 활성화가 성공적으로 일어날 수 있도록 해주며, 또한 TAK1에 의한 하류 신호분자인 p38 MAPK 활성화는 NADPH 활성화 및 이에 따른 친염증성 ROS 분자들의 생성을 유발하기 때문에, LPS에 의해 자극된 대식세포내의 친염증 신호전달경로에 있어서 TAK1-JNK/p38 MAPK 경로의 L-AHG에 의한 저해는 대식세포의 M1 분극화 및 친염증 반응을 억제하는 효과적인 기전이 되며, 그 활용성이 크게 기대된다. 아울러 L-AHG가 LPS와 RAW264.7 세포의 표면분자인 TLR4와 상호작용을 방해할 수 있는지에 대해서도 유세포분석기와 형광표지가 된 FITC-LPS를 이용하여 조사한 결과, L-AHG는 대식세포의 표면에서 이루어지는 LPS-TLR4 상호결합은 방해하지 않는 것으로 확인되었다. 이는 L-AHG의 항염증 작용의 표적이 LPS가 TLR4 수용체를 통해 유도하는 세포 내 신호전달경로에 있음을 지지해 준다. 이상의 연구결과들은 아가로오스 유래 희귀 단당류인 3,6-무수갈락토오스(L-AHG)가 LPS 자극에 의해 유발되는 RAW264.7 마우스 대식세포의 M1 분극화 및 염증 반응에 대해, TLR4의 친염증 신호전달경로의 TAK1-JNK/p38 MAPK 단계를 저해하는 항염증 활성을 효과적으로 발휘할 수 있음을 시사한다.

• 생명과학회지
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• 제14권3호
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• pp.501-508
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• 2004

전통발효 식품인 간장으로부터 chitinase활성이 높으면서 갈변반응을 일으키는 균주인 CJ-3를 분리하여 갈변반응생성물이 면역기능, 항산화력 및 세포활성에 미치는 영향과 생화학적 특성을 규명하였다. 분리된 CJ-3 균주는 16S rDNA 염기서열분석에 의하여 Bacillus atrophaeus로 동정되었으며 분리된 균주의 분자량은 대략 31.0 kDa으로 colloidal chitin(0.5, 1.0, 2.0%)의 첨가에 의하여 chitinase 활성이 현저히 증가되었다 B. atrophaeus CJ-3에 의해서 유도되는 갈변반응물 200${\mu}\ell$ 첨가로 LPS에 의하여 유도되는 nitric oxide (NO) 활성을 45%까지 감소시켰다. MTT 분석을 통한 세포활성에서도 갈변반응물은 LPS에 의하여 세포활성을 정상수준으로 회복하였다. CJ-3. 균주의 DPPH 전자공여능법에 의한 항산화력은 갈변반응에 의하여 약 55% 증가하였다 . 이러한 결과들은 갈변반응생성물은 면역기능 및 세포활성을 증가시키는 것으로 추정된다. 분리된 균주의 최적 생육조건은 최적온도 37$^{\circ}C$, 최적 pH 7.0 및 염 농도는 9% NaCl농도까지는 잘 생육하는 것으로 나타났으며 분리된 균주의 주요 intracellular 유리아미노산은 glutamate로 나타났다.