Biodiesel is produced through the transesterification process in the presence of alcohol and a catalyst that catalyzes the conversion of triglycerides to esters and glycerol compounds. A more optimal product conversion can be achieved using enzymes, such as lipase. Lipase is reported to be produced in osmophilic yeasts due to the low water content in their natural habitats. Wild forest honey is one of the osmophilic natural habitats in Indonesia. However, lipase-producing yeast has not been reported in the Indonesian honey. In this study, we screened the lipase-producing yeasts isolated from wild forest honey collected from Central Sulawesi. The production profile and activity of lipase were determined at different pH values and temperatures. One promising yeast was isolated from the honey, which was identified as Zygosaccharomyces mellis SG 1.2 based on ITS sequence. The maximum lipase production (24.56 ± 1.30 U/mg biomass) was achieved by culturing the strain in a medium containing 2% olive oil as a carbon source at pH 7 and 30℃ for 40 h. The optimum pH and temperature for lipase activity were 6 and 55℃, respectively. The enzyme maintained 80% of its activity upon incubation at 25℃ for 4 h. However, the enzyme activity decreased by more than 50% upon incubation at 35 and 40℃ for 2 h. This is the first study to report the lipase producing capability of Z. mellis. Further studies are needed to optimize the enzyme production.
활성 효모의 동물사료 첨가제로의 이용성을 증진시키기 위하여 lipase 생산성이 높은 효모를 (주)강남유지로부터 채취한 폐유와 슬러지로부터 분리하였다. 분리된 균주를 이용, 자외선 돌연변이를 통해 lipase 생산성이 높은 균주를 개발하였으며 산업용 배양배지의 선별, 배양공정의 개선에 관한 연구를 수행하였다. 산업용 배지의 탄소원으로는 고과당, 질소원으로는 CSL이 각각 선정되었으며, 2%의 고과당, 1%의 CSL에서 배양조건을 최적화시키고자 하였다. 1%의 올리브유 첨가, 접종량 4%, 초기 pH 5, 그리고 배양온도 27$^{\circ}C$에서 lipase의 생산성이 최대가 됨을 확인할 수 있었으며 이 때 lipase 역가는 1.12 U/mL를 얻을 수 있었다.
곤충으로부터 유용 효소생산 미생물의 탐색 과정에서 우수한 lipase 생산균주 9종을 분리하고 lipase 생산능을 조사하였다 16S rDNA 분석 결과 분리된 균주는 주로 Serratia 속, Pseudomonas 속, Burkholderia 속에 속하는 그람음성균들로 분석되었다. 그 중 lipase 생산능이 가장 우수한 균주를 선별하고 16S rDNA 서열분석 및 생리 생화학적 분석 결과를 바탕으로 Burkholderia sp. HY-10으로 동정하였으며 균주의 lipase생산특성을 조사하였다. 이 균주는 톱하늘소의 장으로부터 분리되었으며 olive oil을 탄소원으로 포함하는 배지에서 배양하였을 때 세포밀도에 의존하여 lipase의 생산이 유도되는 특성을 나타내었고 0.5%의 yeast extract와 0.5%의 olive oil이 포함된 M9배지에서 $30^{\circ}C$, 36-42시간의 배양에 의해 lipase의 생산이 최대치에 도달하였다.
Lipases are industrially useful versatile enzymes that catalyze numerous different reactions including hydrolysis of triglycerides, transesterification, and chiral synthesis of esters under natural conditions. Although lipases from various sources have been widely used in industrial applications, such as in food, chemical, pharmaceutical, and detergent industries, there are still substantial current interests in developing new microbial lipases, specifically those functioning in abnormal conditions. We screened 17 lipase-producing yeast strains, which were prescreened for substrate specificity of lipase from more than 500 yeast strains from the Agricultural Research Service Culture Collection (Peoria, IL, U.S.A.), and selected Yarrowia lipolytica NRRL Y-2178 as a best lipase producer. This report presents new finding and optimal production of a novel extracellular alkaline lipase from Y. lipolytica NRRL Y-2178. Optimal culture conditions for lipase production by Y. lipolytica NRRL Y-2178 were 72 h incubation time, $27.5^{\circ}C$, pH 9.0. Glycerol and glucose were efficiently used as the most efficient carbon sources, and a combination of yeast extract and peptone was a good nitrogen source for lipase production by Y. lipolytica NRRL Y-2178. These results suggested that Y. lipolytica NRRL Y-2178 shows good industrial potential as a new alkaline lipase producer.
Lipase (triacylglycerol lipase, EC 3.1.1.3) is an enzyme capable of hydrolyzing triacylglycerol, to produce fatty acids and glycerol and reverse the reaction of triacylglycerol synthesis from fatty acids and glycerol through transesterification. Applications of lipase are quite widespread in the industrial sector, including in the detergent, paper, dairy, and food industries, as well as for biodiesel synthesis. Lipases by yeasts have attracted industrial attention because of their fast production times and high stability. In a previous study, a lipase-producing yeast isolate was identified as Zygosaccharomyces mellis SG1.2 and had a productivity of 24.56 U/mg of biomass. This productivity value has the potential to be a new source of lipase, besides Yarrowia lypolitica which has been known as a lipase producer with a productivity of 0.758 U/mg. Lipase production by Z. mellis SG1.2 needs to be increased by optimizing the production medium. The aims of this study were to determine the significant component of the medium for lipase production and methods to increase lipase production using the optimum medium. The two methods used for the statistical optimization of production medium were Taguchi and RSM (Response Surface Methodology). The data obtained were analyzed using Minitab 18 and SPSS 23 software. The most significant factors which affected lipase productivity were olive oil and peptones. The optimum medium composition consisted of 1.02% olive oil, 2.19% peptone, 0.05% MgSO4·7H2O, 0.05% KCl, and 0.2% K2HPO4. The optimum medium was able to increase the lipase productivity of Z. mellis SG1.2 to 1.8-fold times the productivity before optimization.
In order to obtain a strain of producing lipase which has resistance against alkaline and detergent, a screening test was carried out. Among 500 strains isolated from soil samples, the strain J-19 was selected for this study. The composition of the optimum medium for the highest lipase production was 2.0% glycerin, 1.0% corn steep liquor, 2.0% yeast extract, 0.1% $MgSO_4$$7H_2O$, 0.2% $K_2HPO_4$, 1.5% soybean oil and 0.1% LAS(linear alkylbenzene sulfonate) with initial pH value of 10.0 and 3-day cultivation at $25^{\circ}C$. The lipase activity of the strain J-19 under optimal condition was 3.3. units/ml, which was increased about 1.3-fold than that of basal medium.
경기도 일대에서 수집한 메주 시료에서 지질분해 활성을 나타내는 균주 Y124를 분리하여 동정한 결과 Yarrowia lipolytica와 100% 상동성을 보였다. 분리 균주가 생산하는 lipase의 조효소에 대한 일반적인 특성을 조사한 결과, 탄소원으로 olive oil을 단독으로 사용한 YPO 배지에서 8시간 배양하였을 때 lipase 활성이 가장 높게 나타났다. YPD 배지에서는 lipase 활성이 거의 없었으며, olive oil과 glucose를 모두 포함하는 YPDO 배지에서는 lipase 활성이 YPO 배지 보다 낮았다. 그리고 olive oil 농도에 따른 lipase 활성을 측정한 결과, olive oil 무첨가보다 0.7% 첨가하여 8시간 배양했을 때 lipase 활성이134 U/mL으로 가장 높게 나타나 lipase의 생산이 olive oil의 첨가에 의해 유도되는 것으로 생각된다. 생육온도에 따른 lipase 활성 측정한 결과, $30^{\circ}C$에 배양하였을 때 배양 8시간에 가장 높은 활성이 나타났고, $25^{\circ}C$와 $37^{\circ}C$에 배양하였을 때는 배양 12시간에 활성이 가장 높게 나타났으며, Y124균주의 lipase 활성 최적 온도는 $30^{\circ}C$로 나타났다. 그리고 lipase의 기질 친화도를 확인한 결과 Y124균주가 생산하는 lipase의 경우 p-nitrophenyl octanoate ($C_8$)에서 가장 높은 활성이 나타났다.
An alkaline lipase producing bacteria was isolated from soil and identified as Serratia liquefaciens AL-11. from the results of analysis of its morphological, biochemical and physiological properties. This strain showed the highest productivity of alkaline lipase when grown at pH 9.0 and 30$\circ$C for 42 hours in the medium of 1% peptone, 0.5% tryptone, 0.9% yeast extract, 1% starch, 1% tween 80, 0.05% CaCl$_{2}$ and 0.05% NaCl. The enzyme was purified by ammonium sulfate treatment, Sephadex G-100 gel filtration and DEAE-Sephadex A-50 column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 27 unit/mg protein and the yield of enzyme activity was 61.3%. The homogeneity of the purified enzyme was verified by polyacrylamide gel disc electrophoresis. Molecular weight of the purified enzyme was estimated about 53,000 by sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis. This enzyme is composed of 17 amino acids of which glycine, proline and glutamic acid were three miajor acids.
Kumar, G.Satheesh;Reddy, T. Kiran;Madhavi, B.;Teja, P.Charan;Chandra, M.Subhosh;Choi, Yong-Lark
생명과학회지
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제20권5호
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pp.662-669
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2010
폐식용유에서 지방분해효소를 생산하는 세균을 분리하였고, PIBWIN 세균동정 방법으로 생리 생화학적 특성을 조사하여 확인한 결과 Pseudomonas sp. OME로 동정하였다. 여러 기질로 지방분해효소 생산을 조사한 결과 올리브유에서 6.1 U/ml의 생산력을 나타내었다. 물리적 인자인 배양시간, 온도. pH 및 올리브유와 효모 추출액의 영양인자에 의한 지방분해효소 생산 조건을 조사 하였다. 효소의 분비는 배양시간. 올리브유 와 효모 추출액의 농도에 강한 영향을 받았으며, RSM을 이용한 최적화는 이들 인자를 가지고 조사하였다. RSM을 이용한 지방분해효소 생산은 배양시간. 올리브유와 효모 추출액의 농도가 48 hr, 0.3 g, 및 0.9 ml에서 최적 생산조건을 나타냈다.
Biodegradation of fat, oil, and grease (FOGs) plays an Important role in wastewater management and water pollution control. However, many industrial food-processing and food restaurants generate FOG-containing waste waters for which there Is no acceptable technology for their pretreatment. To solve these problems, this study evaluated the feasibility of effective FOG-degrading microorganisms on the biodegradation of olive oil and FOG-containing wastewater. Twenty-two strains capable of degrading FOGs were isolated from five FOG-contaminated sites for the evaluation of their FOG degradation capabilities. Among twenty-two strains tested, the lipase-producing Pseudomonas sp. strain D2D3 was selected for actual FOG wastewater treatment. Its biodegradability was performed at 3$0^{\circ}C$ and pH 8. The extent of FOG removal efficiency was varied for each FOG tested, being the highest for olive oil and animal fat (94.5% and 94.4%), and the lowest for safflower oil (62%). The addition of organic nitrogen sources such as yeast extract, soytone, and peptone enhanced the removal efficiency of FOGs, but the addition of the inorganic nitrogen nutrients such as $NH_4$Cl and $(NH_4)_2SO_4$ did not increase. The $KH_2PO_4$ sources in 0.25% to 0.5% concentrations showed more than 90% degradability. As a result, the main pathway for the oxidation of fatty acids results in the removal of two carbon atoms as acetyl-CoA with each reaction sequence: $\beta$-oxidation. Its lipase activity showed 38.5 U/g DCW using the optimal media after 9 h. Real wastewater and FOGs were used for determining the removal efficiency by using Pseudomonas sp. strain D2D3 bioadditive. The degradation by Pseudomonas sp. strain D2D3 was 41% higher than that of the naturally occurring bacteria. This result indicated that the use of isolated Pseudomonas sp. strain D2D3 in a bioaugmentating grease trap or other processes might possibly be sufficient to acclimate biological processes for degrading FOGs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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