In this study, we investigated the effects of indole on biofilm formation inhibition in Pantoea agglomerans (P. agglomerans). In the biofilm growth assay, indole inhibited biofilm formation across all the growth time. Depending on biofilm growth stage, indole exhibited biofilm inhibition and anti-bacterial effects on planktonic cells. Through the analysis of the proportion rate between biofilm and Colony Forming Units (CFU) and inhibition rate of indole, we confirmed that depending on the biofilm stage of P. agglomerans, indole treatment timing was more important than the treatment duration. By comparing gene expression rates through rt-qPCR P.agglomerans affected by indole was found to significantly change quorum sensing (pagI/R) and indole transportation (bssS) gene expressions. Throughout all, indole exhibited both antimicrobial and anti-biofilm effects on P. agglomerans. In addition, we confirmed the anti-biofilm effects of indole on mature biofilm. In conclusion, indole as a signal molecule, can exhibit anti-biofilm effects through bacterial quorum sensing inhibition and indole affects. Therefore, indole can regulate biofilm bacteria especially gram-negative opportunistic pathogens.
Tryptophanase를 이용하여 트립토판 합성시 인돌의 효소활성 저해를 억제하기 위하여 유가식 조업, 유기용매 이상계의 사용, 그리고 cyclodextrin의 첨가등에 대하여 연구하였다. 효소 농도가 0.5mg/ml일때 인돌 농도 0.4mM 부근에서 트립토판 생성이 가장 빨랐으며 그 이상에서는 효소활성이 심한 저해를 받았다. 초기 인돌 농도가 20mM일 때는 27시간 반응후 인돌의 전환율이 20인데 비하여 반응기내 인돌 농도를 5mM 이하로 유가식 조업을 하였을 때 전환율이 80%로 향상되었다.
The cytochrome P-450 enzymes (CYP 2A6) regulate many endogenous signaling molecules and drugs. Aryl alkynes such as 2-ethynylnaphthalene are important P450 inhibitors which have been extensively studied as medicines or as an effective chemical probes for profiling mouse liver microsomal P-450. Here we have synthesized indole-based novel P450 inhibitor, 5-ethynyl indole 3, and showed that it has successfully inhibited CYP 2A6 by chemical inhibition reaction. By using HPLC equipped with a photo diode array(PDA) detector, all of the peaks derived from the enzymatic reaction have been characterized.
Jae Wha kim;Mi Young Han;Hee Gu Lee;Eun Young Song;Tai Wha Chung;Kyung Soo Nam;In Seong Choe
대한의생명과학회지
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제2권1호
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pp.121-126
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1996
Vinblastine을 포함하는 bis-indole alkaloids에 대한 단일클론 항체를 생산하여 Vinca alkaloids의 양을 측정할 수 있는 간편한 immunoassay체계를 확립하였다. Vinca alkaloids는 periwinkle식물체의 배양된 세포로부터 추출하여 BSA와 접합한 후 Balb/c생쥐에 면역시켜 얻은 비장세포와 골수종양세포의 융합을 유도하여 VBL-BSA에 반응하는 클론을 ELISA 방법으로 분석하였으며 이들 클론 중 bis-in-dole alkaloids와 특이적으로 반응하는 항체는 inhibition assay를 통하여 분리할 수 있었고 그 결과 두개의 단일클론 항체를 형성하는 세포주(KN-1과 KN-2)를 확립하였다. KN-1의 경우 dimeric bis-indole alkaloids 와는 상당한 교차반응을 나타낸 반면 monomeric bis-indole alkaloids 와는 교차반응을 나타내지 않았으며 이 클론의 항체를 이용하여 배양된 세포 추출물에 포함된 Vinca alkaloids의 양을 측정한 결과 0.05 nM정도의 dimeric Vinca alkoloids까지도 측정할 수 있었다.
방사선 조사에 의한 발아 억제기작을 살펴보기 위하여 $4^{\circ}C$ 에서 저온 처리 한 감자에 0.12 kGy 감마선을 조사한 후 5주 동안 $20{\pm}2^{\circ}C$, 상대습도 $70{\sim}90%$에서 저장하였다. 이 기간 중 발아에 관여된다고 생각되는 ${\alpha}-amylase$, peroxidase, indole acetic acid (IAA) oxidase, IAA synthesizing enzyme의 활성 변화를 추적하였다. 시판 ${\alpha}-amylase$와 peroxidase의 방사선 감수성은 0.94와 0.36 kGy의 감마선 조사하여 $D_{37}$ 값을 얻었다. 감마선 조사를 행한 감자의 IAA oxidase 역가는 조사후 급격히 증가됐고 IAA 합성 효소의 역가는 조사직후 조금 증가하였으나 저장 기간에 따라 크게 감소하였다. 형태적인 변화에서 조사된 감자에서는 성장점의 고사와 변형된 눈이 관찰되었고 IAA 흑은 gibberellin 등의 처리에 의해 이들 자체로는 회복되지 않았고 그 주위로 새로운 눈의 성장이 관찰되었다. 결론으로 방사선 조사에 의해 야기된 감자의 호흡은 탄수화물이 ${\alpha}-amylase$등의 효소에 의한 분해로 이루어져 ATP를 공급하며 뒤이은 peroxidase 역가의 증가와 같은 효소의 합성은 방사선에 의한 손상을 치유하려는 과정에 속한다 할 수 있다. 또한 눈의 생장점에서의 고사 현상은 손상에 대한 방어 작용의 일종이라 해석되며 이로인한 발아 억제 현상을 페놀 대사와 관련지어 추측할 수 있었고 증가된 IAA oxidase와 IAA 합성계의 파괴에 의한 IAA의 고갈 역시 방사선 조사에 의한 발아 억제 현상의 원인이 됨을 알 수 있었다.
The efficiency of photosensitization of methyl linoleate (ML) oxidation by N-acetyl-L-trypophan(NAT) and 3-methyl indole(scatole) was markedly enhanced by increased concentration of ML in ethanol solution. The fluorescence intensities of sensitizers were observed to be quenched by ML, indicating that ML interacts with the indole excited singlet state. The inhibition of photosensitization by azide demonstrated a possible role of singlet oxygen in the photosensitization. The steady state kinetic treatment of azide inhibition of photosensitization was expected to show linear increase of reciprocal yield of ML oxidation product vs. reciprocal ML concentration at constant azide concentration, but the actual slope was nonlinear. This indicates another competing reaction involved in the photosensitization, As a possible competing reaction, electron transfer from ML to the excited sensitizer was proposed, since the measured fluorescence quenching rate constant closely resembled electron transfer rate constant determined from ML concentration dependence of oxidation product formation.
Bacillus amyloliquefaciens Pc3 was isolated from Antarctic seawater with antifungal activity. In order to investigate the metabolic regulation mechanism in the biosynthesis of lipopeptides in B. amyloliquefaciens Pc3, GC/MS-based metabolomics was used when exogenous indole was added. The intracellular metabolite profiles showed decreased asparagine, aspartic acid, glutamine, glutamic acid, threonine, valine, isoleucine, hexadecanoic acid, and octadecanoic acid in the indole-treated groups, which were involved in the biosynthesis of lipopeptides. B. amyloliquefaciens Pc3 exhibited a growth promotion, bacterial total protein increase, and lipopeptide biosynthesis inhibition upon the addition of indole. Besides this, real-time PCR analysis further revealed that the transcription of lipopeptide biosynthesis genes ituD, fenA, and srfA-A were downregulated by indole with 22.4-, 21.98-, and 26.0-fold, respectively. It therefore was speculated that as the metabolic flux of most of the amino acids and fatty acids were transferred to the synthesis of proteins and biomass, lipopeptide biosynthesis was weakened owing to the lack of precursor amino acids and fatty acids.
Kim, Dong-Hyun;Lee, Jae-Ho;Bae, Eun-Ah;Han, Myung-Joo
Archives of Pharmacal Research
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제18권5호
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pp.351-355
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1995
The fecal tryptophanase activities were $0.267{\pm}0.10$ for rats and $0.185{\pm}0.01{\;}{\mu}mole/min/g$ wet feces for humans. The activities of indole pyruvate degradation to indole, indole pyruvate lyase, of these feces were $0.051{\pm}0.02$ and $0.046{\pm}0.01{\;}{\mu}mole/min/g$ wet feces, respectively. The optimal pH values of tryptophanase and indole pyruvate lyase were 5.5-7.5 and 5.5-6.5, respectively. When the intestinal flora or E. coli HGU-3 was cultured in GAM broth having six different pH values (5 to 10), the activities of tryptophanase and indole pyruvate IYilse in the medium adjusted at pH 6 were dramatically induced by elevating the pH to 9. However, when intestinal microflora were inoculated in the medium containing lactulose, the pro¬ductions of these enzymes were dramatically inhibited and the pH of the medium was lower than that of the control.
Anthranilate synthase (AS)는 트립토판(Trp)과 indole-3-acetic acid, indole alkaloids의 생합성 경로에서 중요한 효소로 작용한다. 트립토판 생합성 상에서 feedback inhibition에 민감하게 반응하는 AS alpha-subunit 관련 OASA2 유전자 영역의 single (F124V) 및 double (S126F/L530D) 점돌연변이로 변형된 유전자의 재조합운반체를 작성하고 이들 유전자들을 Agrobacterium 방법으로 동진벼에 도입하여 형질전환체를 육성하였다. Single 및 double 돌연변이 OsASA2 유전자가 도입된 형질전환 벼 계통들은 nos gene probe를 이용한 TaqMan PCR 방법으로 single copy를 선발하였고, intergenic 계통을 선발하기 위해서 Bfa I 제한효소를 이용하여 RB와 LB 인접서열로부터 IPCR을 통한 FST 분석을 수행하여 4 개의 intergenic 계통을 선발하였다. 도입된 유전자의 발현으로 형질전환 벼는 Trp, IAN 및 IAA가 잎에 가장 많이 축적되었고, 종자의 트립토판 함량도 증가되었다. 후대에서 tryptophan 함량이 높은 S-TG와 D-TG의 두 호모 이벤트 계통을 육성하여 트립토판 함량을 분석한 결과 대조구에 비하여 13~30배 이상 높게 나타났으며, 유리아미노산의 함량도 증가하였다. 이벤트 계통을 이용하여 microarray 분석을 수행한 결과 세포 내 이온 수송, 영양분 공급 등에 영향을 주는 유전자군들이 up-regulation 되었고, 세포 내 기능유전자의 역할을 담당하는 조효소 등이 down-regulation 된 것을 확인 할 수 있었다. 이러한 결과는 선발된 두개의 상동성 이벤트 계통들이 고함량의 유리 트립토판 생산 벼의 육종에 효과적으로 이용될 수 있음을 보여준 결과로 생각된다.
The experiment was carried out to analyze the inhibition effect of plant pathogenic fungi and growth promotion activity induced by the bacterial strains isolated from peatmoss. Among the isolated bacterial strains, B10-2, B10-4, B10-5 and B10-6 which showed more than 30% inhibition rate against Botrytis cinerea and Rhizoctonia solani in vitro, were further analyzed in the greenhouse for the growth promotion activity on lettuce (Lactuca sativa), pak-choi (Brassica compestris L. ssp. chinensis) and Chinese cabbage (Brassica campestris L. ssp. pekinensis). The results showed the treatment of B10-4 on lettuce showed the highest growth promotion activity with the leaf area ($169.17cm^2$), fresh weight (leaf: 40.29 g, root: 8.80 g)and dry weight (leaf: 11.24 g, root: 4.17 g), which was about two folds as compared to control. On pak-choi, the growth promotion rate was the highest with the leaf area of $112.87cm^2$, leaf fresh weight of 60.70 g, root fresh weight of 3.37 g, leaf dry weight of 14.34 g, and root dry weight of 1.90 g. As a result of treatment of B10-13 on chinese cabbage, the growth promotion rate was the highest with the leaf area ($293.56cm^2$), fresh weight (leaf: 113.67 g, root: 2.40 g) and dry weight (leaf: 6.03 g, root: 0.53 g). The production of Indole Acetic Acid (IAA) and Indole-3-Butylic Acid (IBA) were also analyzed in these bacterial isolates. The IAA and IBA analyses were carried out in all bacterial isolates each day within the 5 days of incubation period. The highest production of IAA was observed with $112.57{\mu}g/mg$ protein in B10-4 after 3 days of incubation and IBA production was the highest in B10-2 with $58.71{\mu}g/mg$ protein after 2 days of incubation. Also, phosphate solubilizing activity was expressed significantly in B10-13 in comparison to that of other bacterial isolates. Bacterial identification showed that B10-2 was Bacillaceae bacterium and B10-5 was Bacillus cereus, B10-4 and B10-6 were Bacillus sp. and B-13 was Staphylococcus sp. by ITS sequence.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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