본 실험에서는 항생제 대체물질 탐색의 일환으로 톳에서 추출한 crude fucoidan의 미생물에 대한 항균능력을 in vitro 및 in vivo 상에서 검토하였고, 병아리 장내 응모의 형태적 변화에 대해 조사하였다. 본 실험에서는 갓 부화한 육계 수평아리 84두를 7처리 3반복으로 반복당 4수를 공시하여 3일령에 Salmonella typhimurium을 감염시킨 오염구와 비오염구를 두었으며, 오염구에는 항생제, fucoidan, 톳건조분말, 미역건조분말 및 yeast cell debris를 첨가하였다. 국내산 톳분말에서 추출한 조 fucoidan의 추출 수율은 5.45%로 비교적 높은 추출율을 나타냈다. in vitro 실험에서 fucoidan의 항균능력은 inhibition zone test 및 미생물 성장 실험결과 확인되지 않았다. in vivo실험에서 육계 초생추의 성장률은 fucoidan 첨가구와 YCD 첨가구가 대조구 및 다른 처리구에 비하여 높은 경향을 보였으나, 유의적인 차이는 없었다. 또한 in vivo 실험에서 Salmonella typhimurium에 대한 균의 출현율 및 생균수는 항생제 첨가구와 fucoidan 첨가구에서 낮게 나타났다. 각점막 융모의 길이는 fucoidan 첨가구와 해조류 건조분말 첨가 시 짧아진 경향을 나타내었으며, 대부분 대장벽면에 매우 촘촘하게 분포되어 있었으며, 형태는 처리구별로 크게 다르지 않았다. 따라서 본 실험의 결과만으로 fucoidan이 항생제 대체물질로 이용될 가능성을 명확하게 제시할 수는 없었으나, 연구할 가치는 충분히 있는 물질임이 확인되었다.
Hydroxyapatite (HA) and $\beta$-tricalcium phosphate ($\beta$-TCP) are bio-compatible materials with bones and teeth. HA has been widely applied as bone substitutes because of chemical stability in vivo, while $\beta$-TCP has higher resorbability than HA when the material is implanted in a bone defect. In the present study, both HA and $\beta$-TCP porous ceramics were soaked in the simulated body fluid in order to investigate the reaction between the materials and the fluid. After the soaking test, carbonate hydroxyapatite was formed on HA surface at 1 week, and then the amount of precipitates increased with increasing period of the soaking test. While $\beta$-TCP was not dissolved in the fluid, carbonate hydroxyaopatite was also formed on $\beta$-TCP surface after 12 weeks, and the amount of precipitates was less than that on HA. In vitro behavior of HA was similar to that in vivo, but in vitro behavior of $\beta$-TCP was not similar to that in vivo.
AG6O, the complex of acriflavine and guanosine, has been shown to possess the synergistic antitumorigenic activity in the previous paper (J. Pharm. Pharmacol. 1997, 49:216). In this study, we have investigated the genotoxic properties of AG60 using in vitro and in vivo system such as Ames bacterial reversion test, chromosomal aberration assay and micronucleus assay. In Ames reverse mutation test, AG60 treatment at the dose range up to 250 $\mu\textrm{g}$/plate caused the dose-independent random induction of the mutagenic colony formation in S. typhimurium TA98, TA100, TA1537, and E. coli WP2uvrA, while any mutagenic effect of AG60 wasn't observed in S. typhimurium TA1535. Any significant chromosomal aberration wasn't observed in chinese hamster lung (CHL) fibroblast cells incubated with PBS or AG60 at the concentrations of 2.5, 5, 10 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ for 24 hours without but even with 59 metabolic activation system for 6 hours. In vivo ICR mice, the intramuscular injection of AG60 at the doses of 7.15, 14.3, and 28.6 mg/kg did not induce the frequency of micronucleus formation. However, mitomycin C, as one of the positive controls at the dose of 2 mg/kg caused the 8.4% induction in the frequency of micronucleus and 24% increase in the chromosomal aberration.
피부를 대상으로 한 살균을 목적으로 하는 외용소독제의 경우 식품 취급자에 오염된 미생물의 사멸 또는 제거를 목적으로 활용될 수 있으며, 최근 개인위생에 대한 관심 증가에 따라 제품 소비 증가와 제품 다양화가 두드러지게 나타나고 있다. 살균 효능은 소독제의 핵심 품질 평가 요소로서 수행 절차 및 조건에 따라 상이한 결과가 나타날 수 있기 때문에 시험법의 효율성과 정확성을 높이기 위한 연구가 필요하다. 이에 본 총설논문에서는 주요 제형별(겔형, 액제형, 와이프형) 시험법 개발 현황을 파악하고 시험법별 특장점 분석 결과와 최근 관련 연구를 통하여 제시된 시사점을 기반으로 향후 효능 평가 체계의 발전 방향을 제시하고자 하였다. 인체 대상 시험법의 경우 시험 유형에 따라 소독제를 시험 대상 피부 표면에 처리하는 조건이 다양화되어 있어 시험법 간 동등성에 대한 평가를 통해 소독제 제품의 성분이나 특성에 따라 최적의 시험 유형을 파악하고 그에 대응되는 적절한 평가 체계 및 관련 규제의 표준화의 필요성을 시사하였다. 특히 와이프형 소독제의 경우 처리 방식이 미생물 제거 및 살균에 직접적으로 영향을 미침에도 불구하고 피부에 노출하는 손 대상 처리를 위한 사용 패턴의 표준화 사례가 부족 하였다. 한편 [전처리 - 소독제 노출 - 미생물 회수] 등 각 시험 절차별로 결과에 영향을 미치는 주요 결정 요인을 발굴하는 연구의 지속 수행을 통해 기존 시험법을 개선하고 신규 시험법을 개발하고자 하는 노력이 요구된다. 최근 활발하게 개발되고 있는 ex vivo 시험법은 인체 시험의 제한적인 연구 재현성과 같은 한계를 극복하면서도 인간 피부 환경을 구현하기 위한 기술의 적용을 통해 연구 결과의 신뢰도를 확보할 수 있을 것으로 판단된다. 한편 손 피부를 대상으로 한 균총 연구 등 소독제 처리 전후 미생물의 특성과 분포 분석 관련 연구가 최근 다수 보고되고 있어 이를 활용한 미생물 군집 단위의 소독제 효능 평가 시험법의 확립이 기대된다. 본 연구를 통해 제시된 소독제 효능 시험법의 현황 기반 발전 전략은 보다 효과적인 개인위생 관리 확립을 통해 손을 통해 교차 오염되는 미생물에 의한 감염성 질병 발생을 최소화하여 공중보건 및 식품 안전성 향상에 기여할 수 있다.
Objectives: Capsaicin-containing (CP) pharmacopuncture was developed to treat neuropathic pain. This study was conducted to assess the toxicity of CP extract for pharmacopuncture, using a micronucleus test. Methods: First, a dose range finding study was conducted. Then an in vivo micronucleus test was performed to determine the induction of micronuclei in mouse bone marrow cells after intramuscular administration of CP twice with a 24-hour interval to 8-week-old ICR mice. A high dose of 0.2 mL/animal was selected, and this was sequentially diluted by applying a geometric ratio of 2 to produce two lower dose levels (0.1 and 0.05 mL/animal). In addition, negative and positive control groups were set up, and an HPLC analysis was conducted to confirm the capsaicin content of CP. Results: The incidence of micro-nucleated polychromatic erythrocytes in polychromatic erythrocytes in the CP-treated group was similar to that in the negative-control group, while that in the positive-control group was significantly greater. In addition, the ratio of polychromatic erythrocytes to total erythrocytes in the CP treatment group and the positive control group was not significantly different from the negative control group. In the HPLC analysis, capsaicin in the CP was identified through a comparison with the retention time of the capsaicin standard of 27 min. Conclusion: CP did not show any indication of any potential to induce micronuclei formation in bone marrow cells of ICR mice under the conditions of this study. Further toxicity studies are necessary to ensure the safety of the use of CP in clinical practice.
Predictive tests for the identification of contact sensitizing chemicals have been developed. We measured the sensitization potential with three predictive tests, the in vitro and the in vivo Local Lymph Node Assay(LLNA), ELISA to detect interferon-gamma(IFN-${\gamma}$) from supernatant and flow cytometry to detect change of cell surface proteins, using draining lymph nodes of mice. BALB/c mice were exposed to various chemicals or vehicles on the ears daily for 3 consecutive days in all experiments. With some exceptions of propyl paraben, neomycin sulfate, the in vivo LLNA was able to detect the sensitizing capacity of test chemicals and was more sensitive than the in vitro LLNA for chemicals used in the present study. In another experiment, contact sensitivity was assessed by the ELISA to detect IFN-Υ from the supernatants of the cultured LNCs after sensitization with chemicals. There was a good correlation between the LLNA and the IFN-Υ production for test chemicals. We also examined the change of cell surface proteins on LNCs after sensitization by flow cytometry for some cell adhesion molecules(ICAM-1, E-cadherine, B7 molecule), T cell markers(CD3, CD4, CD8, T$\alpha$$\beta$,T${\gamma}$$\delta$) and B cell markers(LR1, CD45R, I-Ad). The number of ICAM-1 positive cells and B cells in LNCs were increased after sensitization with DNCB, TNCB, isoeugenol and 25%, 50% cinnamic aldehyde compared with that of vehicle as a control. In conclusion, the in vivo LLNA could provide more sensitive screening test for moderate to strong sensitizers and some weak sensitizers including cosmetic raw materials than the in vitro LLNA. The production of IFN-Υ by allergen-activated LNCs might be a values indicators without radioisotopes for the identification of contact allergens. Detection of allergens by testing the increase of ICAM-1 positive cells and B cells in LNCs by flow cytometry might be used as a test method to detect allergens.
An increasing number of applications is being developed for the use of nanoparticles in various fields. We investigated possible toxicities of nanoparticles in cell culture and in mice. Nanoparticles tested were Zn (300 nm), Fe (100 nm), and Si (10-20, 40-50, and 90-110 nm). The cell lines used were brain, liver, stomach, and lung from humans. In the presence of nanopaticles, mitochodrial activity decreased zero to 15%. DNA contents decreased zero to 20%, and glutathione production increased zero to 15%. None of them showed a dose dependency. Plasma membrane permeability was not altered by nanoparticles. In the case of Si, different sizes of the nanoparticles did not affect cytotoxicity. The cytotoxicity was also shown to be similar in the presence of micro-sized ($45\;{\mu}m$) Si particles. Organs from mice fed with nanoparticles showed nonspecific hemorrhage, lymphocytic infiltration, and medullary congestion. A treatment with the micro-sized particle showed similar results, suggesting that the acute in vivo toxicity was not altered by nano-sized particles.
본 시험물질인 GMP으로부터 sialic acid를 분리 및 이의 농도를 23%로 높게 정제한 GMP 가수분해물(23%-GNANA) 분말에 대해 발암성 유발 유 무 판단의 기초자료를 얻기 위하여 마우스 골수세포를 이용한 소핵시험을 실시하였다. 결과로서, 다염성 적혈구의 소핵출현 적혈구의 출현비율은 음성 대조군과 시험물질 투여군간 평균 차이의 유의성이 없었다(p<0.05). 또한 동물개체별로 관찰한 결과에서도 음성대조군과 시험물질 투여군간 유의성이 없었으며(p<0.05), 시험물질의 용량의존성 반응은 전체적으로 나타나지 않았다. 이러한 결과로 보아, GMP로부터 제조한 23%-GNANA는 고농도로 sialic acid가 농축되었을 뿐, 일반 식품인 GMP 수준에서 마우스 골수세포에 대해 소핵의 유발성이 없는 것으로 판단되었다.
Objectives : TA, a polyherbal extract, typically is used for pharmacopuncture therapy on patients with traffic accident-related injuries and musculoskeletal diseases. This study was performed to evaluate the safety of the TA extract, using a micronucleus test. Methods : The dose range and sampling time were first established. An in vivo micronucleus test was then performed to determine the induction of micronuclei in mouse bone marrow cells after a single intramuscular administration of TA to 7-week-old ICR mice (0.2 ml/animal, at 24 hours post-dosing). Results : The incidence of micro-nucleated polychromatic erythrocytes (PCEs) in PCEs in the TA group was similar to that in the negative-control group, while that in the positive-control group was significantly greater. The positive- and negative-control groups did not differ in the ratio of PCEs to total erythrocytes. Conclusions : Our toxicity study indicates that the TA extract does not induce micronucleus formation in mouse bone marrow cells.
식물에서 흔히 존재하는 isoquercetin의 유전독성을 평가하기 위하여 최종평가항목인 DNA 절단 및 염색체 손상을 quercetin과 비교 평가하였다. 7주령의 수컷 ICR 마우스를 사용하였고 3일 동안 시험물질을 경구로 투여하였다. 부형제로 0.5% carboxymethylcellulose를 사용하였고 isoquercetin과 quercetin은 각각 250, 500 mg/kg/day로 투여하였으며, 양성대조물질로 ethyl methanesulfonate 200 mg/kg/day를 사용하였다. 일차 투여 후 48시간에 그리고 마지막 투여 후 3시간 내에 부검하였고 조직을 적출하였다. DNA 손상은 Comet assay를 사용하여 위와 간세포에서 관찰하였고, 소핵시험은 골수세포에서 소핵 분석방법을 사용하여 평가하였다. 두 가지 유전독성 시험을 동일 마우스를 사용하여 수행하였다. 그 결과, isoquercetin과 quercetin의 경구 투여는 500 mg/kg/day에서도 위와 간에서 DNA 손상을 초래하지 않았으며 골수세포에서 소핵을 유발하지 않았다. 따라서 본 연구에서 사용한 플라보노이드는 본 실험 조건하에서 유전독성을 유발하지 않는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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