In Saccharomyces cerevisiae, Paf1 complex consists of five proteins, and they are structurally and functionally well conserved in yeast, fruit fly, plants, and human. With binding to RNA polymerase II from transcription start site to termination site, Paf1 complex functions as a platform for recruiting many types of transcription factors to RNA polymerase II. Paf1 complex contributes to H2B ubiquitination and indirectly influences on H3K4 di- and tri-methylation by histone crosstalk. But the individual effects of five components in Paf1 complex on these two histone modifications including H2B ubiquitination and H3K4 methylation largely remained to be identified. In this study, we constructed the single-gene knockout mutants of each Paf1 complex component and observed H3K4 mono-, di-, and trimethylation as well as H2B ubiquitination in these mutants. Interestingly, in each ${\Delta}paf1$, ${\Delta}rtf1$, and ${\Delta}ctr9$ strain, we observed the dramatic defect in H3K4 monomethylation, which is independent of H2B ubiquitination, as well as H3K4 di- and trimethylation. However, the protein level of Set1, which is methyltransferase for H3K4, was not changed in these mutants. This suggests that Paf1 complex may directly influence on H3K4 methylation by directly regulating the activity of Set1 or the stability of Set1 complex in an H2B ubiquitination independent manner.
Young radishes (YR, yeolmu in Korean) were cultivated in soil with and without sulfur. Control YR-kimchi and sulfur YR-kimchi were prepared using the young radishes cultivated in the soil without and with 1,818 $g/m^3$ sulfur, respectively. Fermentation of the YR-kimchis were conducted at $5^{\circ}C$ for 6 weeks. The control and sulfur YR-kimchis were reached pH 4.39 and pH 4.31 with 0.98% and 1.04% acidity at 5 weeks, respectively. At a higher concentration of 20 ${\mu}L/assay$, the sulfur YR-kimchi juice exhibited higher inhibitory effects (84%) on the growth of HT-29 human colon cancer cells than the control YR-kimchi (57%). Methanol extract from the YR-kimchis also led to similar results to those of the juices. In the inhibition study by hematocytometer, YR-kimchis inhibited the growth of cells in a time-dependent manner. Sulfur YR-kimchi induced apoptosis as determined by 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining and decreased Bcl-2 expression of active anticancer compounds, when compared to the control YR-kimchi. These results suggested that preparing kimchi using YR cultivated in the presence of sulfur, which can help to synthesize active compounds, could increase the anti-cancer activity of sulfur YR-kimchi.
Our previous study showed that transgenic (TG) pigs harboring human EPO (hEPO) gene have been shown to have reproductive disorders, including low pregnancy rates, irregular estrus cycle and low little size. To investigate these reasons, we assessed estrus behavior (standing response) and plasma $17{\beta}$-estradiol ($E_2$) level, which partly reflect reproductive function, during the estrus cycles after synchronization and superovulation by hormone treatments. Then, we analysed blood composition and expression of hEPO gene in TG pigs. Pigs were injected with PG600. After 10 days, pigs were fed with Regumate porcine for 6 days. Blood samples were collected from jugular vein. Analysis of blood composition and $E_2$ level were measured by Hemavet 950 and $E_2$ ELISA kit, respectively. And, the expression of hEPO gene in reproductive organs was quantitated by real-time RT-PCR. The percentage of estrus behavior in TG was significantly decreased. Hematocrit (HCT), hemoglobin (Hb) concentration and red blood cell (RBC) number were significantly higher in TG than wild type (WT). On the other hand, high expression of hEPO gene in TG was observed in the mammary gland as well as in the uterus. Moreover, plasma $E_2$ level was significantly higher in TG than WT. These results suggest that nonspecific expression of hEPO gene in the other organs of TG may affect blood composition and plasma $E_2$ level, thereby causing reproductive disorders.
This study investigates the oxidative degradation of N-nitrosodimethylamine (NDMA), a probable human carcinogen, by advanced oxidation process (i.e., UV process). The experiments were performed with various pH, initial concentration, UV intensity, and addition of $H_2O_2$ or $TiO_2$ on UV process. The results showed that the direct UV photolysis was the most effective treatment method. The lower pH, intial concentration and higher intensity of UV stimulated higher NDMA removal. However, addition of oxidant ($H_2O_2$, $TiO_2$) slows down photochemical treatment of NDMA since the oxidant can filter out the UV light and block it to reach the NDMA molecules. Dimethylamine (DMA) and nitrite were found to be a major byproduct from NDMA oxidation. To evaluate the chronic toxicity effects of UV-treated NDMA on the growth of microalgae, "Skeletonema costatum", was studied as long term experiments. Results demonstrated that after the 13 days exposure the chronic toxicity was decreased about 15% with application of UV process on NDMA degradation.
Background : Arsenic trioxide ($As_2O_3$) has been used to treat acute promyelocytic leukemia, and it induces apoptosis in a variety of solid tumor cell lines including non-small cell lung cancer cells. However, nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAID) can enhance tumor response to chemotherapeutic drugs or radiation. It was previously demonstrated that a combination treatment with $As_2O_3$ and sulindac induces the apoptosis of NCI-H157 human lung carcinoma cells by activating the caspase cascade. This study aimed to determine if a combination treatment augmented its apoptotic potential through other pathways except for the activation of the caspase cascade. Material and Methods : The NCI-H157 cells were treated with $As_2O_3$, sulindac and antioxidants such as glutathione (GSH) and N-acetylcysteine (NAC). The cell viability was measured by a MTT assay, and the level of intracellular hydrogen peroxide ($H_2O_2$) generation was monitored fluorimetrically using a scopoletin-horse radish peroxidase (HRP) assay. Western blotting and mitochondrial membrane potential transition analysis were performed in order to define the mechanical basis of apoptosis. Results : The viability of the cells was decreased by a combination treatment of $As_2O_3$ and sulindac, and the cells were protected using antioxidants in a dose-dependent manner. The increased $H_2O_2$ generation by the combination treatment was inhibited by antioxidants. The combination treatment induced changes in the mitochondrial transmembrane potential as well as the expression of the Bcl-2 family proteins, and increased cytochrome c release into the cytosol. However, the antioxidants inhibited the effects of the combination treatment. Conclusion : Combination treatment with $As_2O_3$ and sulindac induces apoptosis in NCI-H157 human lung carcinoma cells via ROS generation with a mitochondrial dysfunction.
Han, Xia;Kang, Kyoung Ah;Piao, Mei Jing;Zhen, Ao Xuan;Hyun, Yu Jae;Kim, Hyun Min;Ryu, Yea Seong;Hyun, Jin Won
Biomolecules & Therapeutics
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v.27
no.1
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pp.41-47
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2019
The apoptotic effects of shikonin (5,8-dihydroxy-2-[(1R)-1-hydroxy-4-methylpent-3-enyl]naphthalene-1,4-dione) on the human colon cancer cell line SNU-407 were investigated in this study. Shikonin showed dose-dependent cytotoxic activity against SNU-407 cells, with an estimated $IC_{50}$ value of $3{\mu}M$ after 48 h of treatment. Shikonin induced apoptosis, as evidenced by apoptotic body formation, sub-G_1$ phase cells, and DNA fragmentation. Shikonin induced apoptotic cell death by activating mitogen-activated protein kinase family members, and the apoptotic process was mediated by the activation of endoplasmic reticulum (ER) stress, leading to activation of the $PERK/elF2{\alpha}/CHOP$ apoptotic pathway, and mitochondrial $Ca^{2+}$ accumulation. Shikonin increased mitochondrial membrane depolarization and altered the levels of apoptosis-related proteins, with a decrease in B cell lymphoma (Bcl)-2 and an increase in Bcl-2-associated X protein, and subsequently, increased expression of cleaved forms of caspase-9 and -3. Taken together, we suggest that these mechanisms, including MAPK signaling and the ER- and mitochondria-mediated pathways, may underlie shikonin-induced apoptosis related to its anticancer effect.
Ha, Ji-Hye;Jeong, Hyang-Suk;Oh, Sung-Ho;Jeong, Seung-Seop;Jeong, Myoung-Hoon;Jeong, Heon-Sang;Jung, Jae-Hyun;Yu, Kwang-Wan;Lee, Hyeon-Yong
Korean Journal of Medicinal Crop Science
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v.17
no.5
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pp.311-320
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2009
The low quality fresh ginseng was fermented by Phelinus linteus or Hericium erinaceum mycelium. This fermented ginseng was extracted by water at $100^{\circ}C$ or water with ultrasonification at $60^{\circ}C$. Total phenolic compounds was improved by ultrasonification extraction process, compare to conventional water extraction. All extracts enhanced the growth of human B and T cells, showing 2.68 times and 3.43 times higher, respectively, than the control. The secretion of TNF-$\alpha$ and IL-6 from human immune cells was enhanced as $3.53{\times}10^{-4}\;pg/cell$, $3.40{\times}10^{-4}\;pg/cell$ by adding H. erinaceum mycelium fermented ginseng. H. erinaceum mycelium fermented ginseng yielded higher nitric oxide production from macrophage than Lipopolysaccharides (LPS). The cytotoxicity on human normal kidney cell (HEK293) was as low as 20.5% in adding the maximum concentration of $1.0\;mg/m{\ell}$ of fermented ginseng. Generally, the extracts from ultrasonification extraction process showed 10% lower toxicity than that by conventional process. H. erinaceum mycelium fermented ginseng had the highest anticancer activity on human lung cancer and stomach cancer cells as 69.33% and 75.32%, respectively at $1.0\;mg/m{\ell}$. It can be concluded that, in general, H. erinaceum mycelium fermented ginseng has relatively better immune and anticancer activities than P. linteus fermented ginseng. Expecially, the extracts treated with ultrasonification had higher activities than that from conventional extraction process.
Objectives: This study investigated the indirect effect of calcium-enriched mixture (CEM) cement and mineral trioxide aggregate (MTA), as 2 calcium silicate-based hydraulic cements, on human dental pulp stem cells (hDPSCs) through different dentin thicknesses. Materials and Methods: Two-chamber setups were designed to simulate indirect pulp capping (IPC). Human molars were sectioned to obtain 0.1-, 0.3-, and 0.5-mm-thick dentin discs, which were placed between the 2 chambers to simulate an IPC procedure. Then, MTA and CEM were applied on one side of the discs, while hDPSCs were cultured on the other side. After 2 weeks of incubation, the cells were removed, and cell proliferation, morphology, and attachment to the discs were evaluated under scanning electron microscopy (SEM). Energy-dispersive X-ray (EDXA) spectroscopy was performed for elemental analysis. Alkaline phosphatase (ALP) activity was assessed quantitatively. The data were analyzed using the Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests. Results: SEM micrographs revealed elongated cells, collagen fibers, and calcified nucleations in all samples. EDXA verified that the calcified nucleations consisted of calcium phosphate. The largest calcifications were seen in the 0.1-mm-thick dentin subgroups. There was no significant difference in ALP activity across the CEM subgroups; however, ALP activity was significantly lower in the 0.1-mm-thick dentin subgroup than in the other MTA subgroups (p < 0.05). Conclusions: The employed capping biomaterials exerted biological activity on hDPSCs, as shown by cell proliferation, morphology, and attachment and calcific precipitations, through 0.1- to 0.5-mm-thick layers of dentin. In IPC, the bioactivity of these endodontic biomaterials is probably beneficial.
Cholesterol acyltransferase (ACAT) catalyzes the acylation of cholesterol to cholesteryl ester with long chain fatty acids and ACAT inhibition is a useful strategy for treating hypercholesterolemia or atherosclerosis. Inhibitory effects on ACAT of the MeOH extracts prepared from 163 edible plants were evaluated. 15 species out of 163 species exhibited higher than 50% of inhibition on the hACAT-1 and 9 species exhibited higher than 50% of inhibition on the hACAT-2 activity at their concentration of $100\;{\mu}g/mL$.
This study was executed to evaluate the immune activity, nitrite scavenging activity and ABTS radical scavenging activity against extracts of various concentration of ethanol solvent from Codonopsis lanceolata cultured at 6 local regions. The immune responses from both human T and B cell line was significantly enhanced in the cell growth compared to control while the cell growth was influenced at a certain period of culture. The results revealed that the cell growth of both human T and B cell was altered in a time dependent manner. The nitrite scavenging activity of ethanol extracts from various solvent concentration of C. lanceolata were affected by pH. At a pH of 1.2, the nitrite scavenging effect of all of the extracts tested observed higher than that of the other two pH ranges. There was no distinct detection of nitrite scavenging effects of the pH range 6.0. The ABTS radical scavenging activity was progressively increased in a dose-dependent manner, and the activity was the highest in 100% ethanol extract. The result from this investigation suggests that the extract of Codonopsis lanceolata could be an addition to basic medicine for immune modulation and natural food additives.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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