Polyphenol oxidase isoforms were purified from the lotus roots using 50% acetone precipitation, conventional chromatographies of Q-Sepharose and hydrophobic interaction, and high performance liquid chromatographies of Mono-Q and Superdex 75 gel-filtration. Molecular mass of a purified PPO isoform (LPIII-2) was determined to be 56 kDa using gel-filtration chromatography. The active form of LPIII-2 appeared to bea heterodimer, as purified LPIII-2 on SDS-PAGE gel showed two bands that were determined to be 28 kDa and 26 kDa. To further characterize PPO, partially purified PPO isoforms (LP-II, LP-III) were obtained from Q-Sepharose anion-exchange chromatography. In substrate specificity, the partially purified PPO isoform LP-II showed a high affinity to catechol, while LP-III showed a high affinity to pyrogallol. The optimum pH of LP-II and LP-III was pH 7.0. Interestingly, the partially purified PPO isoforms showed high activities at low temperatures $(0{\sim}5^{\circ}C)$, and as temperatures rose, the activities decreased. Both PPO isoforms were stable at $40^{\circ}C$ and were inactivated by incubation at $60^{\circ}C$ for 40 min.
The occurrence and time course of capacitation, acrosomal loss, and hyperactivated motility require quantitative definition in order to characterize fertile human sperm. Recently the method has been developed to estimate the quality of spermatozoa by using kinematic parameters such as curvilinear velocity(VCL), average path velocity(VAP), linearity(LIN), straightness(STR), amplitude of lateral head displacement(ALH), and beat cross frequence(BCF) from Computer Assisted Sperm Analysis (CASA). In this study, using the Hamilton Thorn motility analyzer HTM 2030(Hamilton Thorn Research, Beverly, MA), we attempted to identify the spermatozoa with hyperactivated motility (HA) objectively and to monitor hyperactivation of human spermatozoa during incubation in capacitating media and after treatment of calcium ionophore as compared with acrosome status. And we examined whether HA are related to the result of SPA. Semen samples obtained from 16 healthy men were prepared by swim up technique and preincubated in a capacitating media(modified BWW medium) for 5 hours and treated with calcium ionophore solution. The acrosome reaction was detected with PSA-FITC labelling of the acrosome and in vitro sperm ferilizing capacity was assessed by the zona free hamster ovum penetration assay (SPA). The incidence of hyperactivated sperm was 2.6% in fresh semen, 14.3% of the swim up population, 13.7% after 5h of incubation. Significant increase of percentage of hyperactivated sperm was observed after the incubation (p<0.05) but after treatment, no significant changes of percentage of hyperactivated sperm(l1.8%) in contrast to significant rise in the percentage of acrosome reacted cells. Correlation analysis failed to show any significant relationship between the percentage of sperm with HA and SPA score. In conclusion, although no direct correlations were found between the results of SPA and HA, hyperactivation of sperm is associated with capacitation and monitoring hyperactivated sperm will be expected as a method of evaluating the functional quality of sperm such as SPA.
Park, Ji-Hae;Wu, Qian;Yoo, Ki-Hyun;Yong, Hye-Im;Cho, Sueng-Mock;Chung, In-Sik;Baek, Nam-In
Journal of Applied Biological Chemistry
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v.54
no.1
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pp.67-70
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2011
The roots of Glycyrrhiza uralensis Fisch. were extracted with 30% aqueous ethanol (EtOH), and the concentrated extract was partitioned with n-hexane, chloroform ($CHCl_3$), ethyl acetate (EtOAc), n-butanol (n-BuOH), and $H_2O$, successively. From the $CHCl_3$ fraction, four flavonoids were isolated through the repeated silica gel ($SiO_2$), octadecyl silica gel (ODS), and Sephadex LH-20 column chromatographies (c.c.). According to the results of spectroscopic data including nuclear magnetic resonance spectrometry (NMR), electron ionization mass spectrometry (EI/MS), and infrared spectroscopy (IR), the chemical structures of the compounds were determined as glabrol (1), abyssinone II (2), glabridin (3), and isoliquiritigenin (4). The flavonoids were evaluated for cytotoxic effect against human cancer cell lines, HCT-116, HepG2, HeLa, SK-OV-3, SK-BR-3, MCF-7, and SK-MEL-5. Especially, glabrol (1) and glabridin (2) showed $IC_{50}$ values of lower than $25{\mu}M$.
Journal of the Korea institute for structural maintenance and inspection
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v.17
no.6
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pp.88-94
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2013
The hexavalent chromium (Cr(VI)) is well known as a hazardous ion, presumably inducing dermatic diseases and if serious cancer. The present study concerns the binding capacity of Cr(VI) ions in the cement powder and matrix for a quantitative technique of Cr(VI) ions in cement to influence human health. Both the water-soluble and acid-soluble Cr(VI) ions present in 3 types of ordinary Portland cement (OPC), pulverised fuel ash (PFA), ground granulated blast furnace slag (GGBS), and silica fume (SF) were measured using the spectrophotometer. As a result, it was found that the concentration of water-soluble Cr(VI) ion in cement ranged from 10.5 to 18.9mg/kg-cement, and in the additional materials a very low value of Cr(VI) ion was measured. Acid-soluble Cr(VI) ion was even higher than water-soluble Cr(VI) ion, ranging from 172.4 to 318.2mg/kg-cement. Nevertheless, the concentration of acid-soluble Cr(VI) ion is not proportional to addition of acid. It depends rather the variable pH of solvent involving cement paste. As enough cement hydration occurs, the binding capacity of Cr(VI) ion increases, inhibiting this ions from leaching out in the presence of hydration products such as ettringite or tri-calcium aluminate which bind Cr(VI) ion by ion-exchange.
No, Jin-Gu;Byun, Sung-June;Yang, Hyeon;Ock, Sun A;Woo, Jae-Seok;Lee, Hwi-Cheul;Hwang, In-sul;Kim, Ji-Youn;Park, Sang Hyoun;Lee, Joo Young;Oh, Keon Bong
Journal of Embryo Transfer
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v.33
no.3
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pp.129-137
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2018
Acute vascular rejection has been known as a main barrier occurring in a xenograted tissue of alpha 1,3-galactosyltransferase knock-out (GalT KO) pig into a non-human primate (NHP). Adenosine which is a final metabolite following sequential hydrolysis of nucleotide by ecto-nucleotidases such as CD39 and CD73, act as a regulator of coagulation, and inflammation. Thus xenotransplantation of CD39 and CD73 expressing pig under the GalT KO background could lead to enhanced survival of recipient NHP. We constructed a human CD39 and CD73 expression cassette designed for endothelial cell-specific expression using porcine Icam2 promoter (pIcam2-hCD39/hCD73). We performed isolation of endothelial cells (pAEC) from aorta of 4 week-old GalT KO and membrane cofactor protein expressing pig ($GalT^{-MCP/-MCP}$). We were able to verify that isolated cells were endothelial-like cells using immunofluorescence staining analysis with von Willebrand factor antibody, which is well known as an endothelial maker, and tubal formation assay. To find optimal condition for efficient transfection into pAEC, we performed transfection with GFP expression vector using four programs of nucleofection, M-003, U-023, W-023 and Y-022. We were able find that the program W-023 was optimal for pAEC with regard to viability and transfection efficiency by flow cytometry and fluorescent microscopy analyses. Finally, we were able to obtain $GalT^{-MCP/-MCP}/CD39/CD73$ pAEC expressing CD39 and CD73 at levels of 33.3% and 26.8%, respectively. We suggested that pACE isolated from $GalT^{-MCP/-MCP}$ pig might be provided as a basic resource to understand biochemical and molecular mechanisms of the rejections and as an alternative donor cells to generate $GalT^{-MCP/-MCP}/CD39/CD73$ pig expressing CD39 and CD73 at endothelial cells.
A disintegrin-like and metalloprotease (reprolysin type) with thrombospondin type 1 motif (ADAMTS1) plays a critical role in follicular rupture and represents a major advance in the proteolytic events that control ovulation. In this study, a 9,026-bp DNA sequence containing the full coding region, all 8 introns and part of the 5'and 3' untranslated region of the porcine ADAMTS1 gene was obtained. Analysis of the ADAMTS1 gene using the porcine radiation hybrid panel indicated that pig ADAMTS1 is closely linkage with microsatellite marker S0215, located on SSC13q49. The open reading frame of its cDNA covered 2,844 bp and encoded 947 amino acids. The coding region of porcine ADAMTS1 as determined by sequence alignments shared 85% and 81% identity with human and mouse cDNAs, respectively. The deduced protein contained 947 amino acids showing 85% sequence similarity both to the human and mouse proteins, respectively. Comparative sequencing of three pig breeds revealed one single nucleotide polymorphism (SNP) within exon 7 of which a G-C substitution at position 6006 changes a codon for arginine into a codon for proline. The substitution was situated within a PvuII recognition site and developed as a PCR-RFLP marker for further use in population variation investigations and association analysis with litter size. Allele frequencies of this SNP were investigated in seven pig breeds/lines. An association analysis in a new Qingping female line suggested that different ADAMTS1 genotypes have significant differences in litter size (p<0.01).
Rabbits were experimentally infected with rabbit hemorrhagic disease virs and the viral pathogenicity, hemagglutinability, and the effect of physicochemical factors were studied. The experimental results were summariaed as follows: 1. Mean rectal temperature of 11 infected rabbits was $40.0{\pm}0.47^{\circ}C$ prior to the virus inoculation, and $39.9{\pm}0.75^{\circ}C$ after 12hrs., $40.2{\pm}0.65^{\circ}C$ after 24hrs., $40.1{\pm}0.77^{\circ}C$ after 36hurs, and $40.6{\pm}0.56^{\circ}C$ just before the death. 2. Mean death time of infected rabbits was $40.3{\pm}22.0$ honrs and its range was 24 to 93 hours. 3. O, B, AB and A type of human erythrocytes were shown their HA in the order, but rabbit and chicken erythrocytes were not hemagglutinated by the virus. 4. In the hemagglutination, less than 0.25 per cent of a final concentration of erythrocytes and 0.2 per cent of BSA in PBS resulted in the best hemagglutination. Phosphate concentration in a range of 0.01M to 0.10M in PBS was not influenced on the hemagglutination reaction, and its pH 7.0 resulted in a better HA. 5. The hemagglutinating titers, in log 2 scale, of organs and tissues of the virus infected rabbits were $9.3{\pm}3.8$ (liver), $9.1{\pm}3.9$ (blood), $6.2{\pm}2.6$ (spleen) and $5.0{\pm}2.5$ (kidney). 6. The physicochemical factors such as heating ($50^{\circ}C$, 10 min.), trypsin treatment (0.05 pre cent, 5 min.), acid treatment (pH 3.0, 20 min.) and ether extraction (3 times) were not affective to the stability of virus and viral HA activities.
This study examined the effects of lactic acid spray, hot water spray, or their combined treatment, as well as the effects of acidified sodium chlorite (ASC), for the decontamination of Escherichia coli on beef carcass surfaces using a commercial intervention system. With this system, the effects of 2 or 4% lactic acid (v/v), hot water ($89{\pm}1^{\circ}C$), or their combined treatment, were examined in terms of reducing inoculated E. coli. ASC (266 ppm), which was adjusted to pH 2.5 using acetic acid or citric acid, was applied using a hand-held spray system. When the beef carcasses were treated with 2 or 4% lactic acid for 10.4 s, less than 1 log reductions of inoculated E. coli were observed. A hot water spray treatment for 9.8 s resulted in a 2.1 log reduction of inoculated E. coli. However, when the hot water was followed with either 2 or 4% lactic acid, no difference in E. coli reduction was found between the hot water alone or the combined treatment with lactic acid. When ASC was adjusted to pH 2.5 with acetic acid and citric acid, 3.8 and 4.1 log reductions of E. coli were observed, respectively. Overall, the lactic acid spray treatment was least effective, and the ASC treatment was most effective, for the E. coli decontamination of beef carcasses. Therefore, these data suggest that ASC would be a more effective intervention against E. coli than most of the methods currently being used. However, more research is required to evaluate the effects of ASC on other organisms, as well as to identify application methods that will not affect meat quality.
So Yeon Han;Tae Won Jang;Da Yoon Lee;Ji-Sun Moon;Yong-Shin Kim;Jae Ho Park
Journal of the Society of Cosmetic Scientists of Korea
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v.50
no.3
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pp.271-278
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2024
The human skin is an organ that protects the body from physical and chemical factors. The skin is the largest and most massive of the body's organs and is composed of the epidermis, dermis, and subcutaneous tissue. Constant UV exposure to the skin can cause DNA damage, oxidation of proteins, and contribute to adult diseases. Nypa fruticans Wurmb (NF), rich in phytochemicals (polyphenols and flavonoids), has been traditionally used for treating respiratory and other diseases. This study investigated the effects of NF ethyl acetate fraction (ENF) on DNA damage healing and inhibition of wrinkle-related factors in UVB-stimulated Hs68 cells. Westernblotting was used to assess the expression of DNA damage-related proteins and wrinkle-related protein factors. In addition, the wound recovery capability of ENF was confirmed through wound-healing experiments. ENF significantly suppressed the expression of DNA damage-related proteins Phosphorylated H2AX (γ-H2AX), checkpoint kinase 2 (Chk2), protein53 (p53), and Phosphorylated protein53 (p-p53). Furthermore, ENF inhibited the expression of wrinkle-related proteins matrix metalloproteinase-1 (MMP-1), matrix metalloproteinase-3 (MMP-3), and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9). High concentrations of ENF also enhanced wound healing in Hs68 cells. ENF is thought to have the potential to heal DNA damage by significantly suppressing the expression of γ-H2AX, Chk2, p53, and p-p53, as well as to inhibit wrinkle formation by suppressing the expression of MMP-1, MMP-3, and MMP-9. These results suggest that ENF can be used as a natural resource to suppress skin damage caused by UVB by regulating the γ-H2AX, Chk2, p53, and MMP pathways in Hs68 cells induced by UVB.
The intake of dietary salt through food now exceeds current nutritional recommendations and is thought to have negative effects on human health, such as the increasing prevalence of hypertension. This study was performed to investigate whether $W_1/O/W_2$ double emulsions can be used to enhance the saltiness of cheese without increasing the salt content ($W_1$ is distilled water or 1% abalone hydrolysate, and $W_2$ is 1% NaCl or 1% abalone hydrolysate + 1% NaCl solution). We also investigated the effect of adding abalone hydrolysate to the double emulsion as a saltiness enhancer. The cheeses were physico-chemically evaluated to determine curd yield, pH value, moisture content, color, texture, salt release rate, and sensory properties. No significant differences were observed in curd yield, pH value, moisture content, lightness, or redness between the cheeses made with and without the double emulsion. However, in the evaluation of salt release rate, fresh cheese made with double emulsion ($W_1$ = distilled water, $W_2$ = 1% NaCl + 1% abalone hydrolysate) was detected earlier than the control or the other treatments. In the sensory evaluation, fresh cheese made with the double emulsion showed higher scores for saltiness and overall preference than the control or the other treatments. We concluded that abalone hydrolysate encapsulated in a double emulsion ($W_1$ is water and $W_2$ is abalone hydrolysate and NaCl solution) could enhance the saltiness of fresh cheese while maintaining the same salt concentration, without altering its physical properties.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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