• 한국식품과학회지
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• 제31권1호
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• pp.1-6
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• 1999

Salmonella spp.의 신속한 검출을 위하여 발진모듈, 수정결정 진동측정기, 박막형태의 수정결정으로 이루어진 압전류적(piezoelectric, PZ) 항체센서 시스템을 구성하였다. 수정결정의 금전극 표면에 Salmonella 구조 항원(common structural antigen)에 대한 항체를 protein A를 사용하여 고정화하고, 항체가 고정화된 수정결정과 미생물간의 결합반응에 의한 질량증가로 나타나는 진동수의 감소량을 측정하였다. PZ 항체센서는 $35^{\circ}C$, pH 7.2의 0.1M 인산 완충용액에서 Salmonella균에 대하여 가장 높은 감응도를 나타내었다. PZ 항체센서의 반응은 Salmonella균에 대하여 매우 선택적이었고 polystyrene bead 첨가시 센서의 감응도가 크게 증가하였다. Salmonella균의 농도가 $10^5{\sim}10^6\;CFU/mL$의 범위 내에 있을 때 쌍대수좌표에서 직선구간의 검량선을 얻을 수 있었고, Salmonella 검출에 소요되는 시간은 50분이내 이었다.

• Applied Microscopy
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• 제34권2호
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• pp.121-130
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• 2004

동물의 결합조직에 분포하고 있는 섬유모세포 (fibroblast)는 결합조직을 구성하는 세포의 한 종류로서 세포질 돌기들이 잘 발달된 형태적 특징이 있는 것으로 실험쥐 담관의 경우 간흡충 등의 기생충에 의하여 물리, 화학적 상해를 받았을 때 세포변이가 유발될 뿐만 아니라, 담관 암세포로 전이되기도 하는 것으로 알려져 있다. 따라서 저자 등은 실험쥐의 담관이 기생충에 의한 상해를 받았을 때 섬유모세포의 세포 표면과 세포질의 변화를 알아보고자 실험쥐 담관에서 섬유모세포를 분리하여 전자현미경으로 확인하고 다음과 같은 결과를 얻었다. 대조군 실험쥐 담관의 섬유모세포들은 일반적인 형태로 세포돌기, 세포표면 및 세포질을 구성하고 있었으나 간흡충 감염군 실험쥐 담관의 섬유모세포는 미세소관에 의한 세포질 돌기들이 다수 발달하고 다양한 종류의 포낭형 조면소포체 그리고 세포질에 전자밀도가 높은 다양한 액포, 높은 밀도의 리보좀을 포함하는 조면소포체, 다양한 형태의 과립 및 많은 수의 미세섬유가 관찰되는 형태적 변화가 관찰되었다. 간흡충에 감염된 담관의 섬유모세포는 간흡충에 의하여 상해 받은 세포가 물리화학적 자극에 의한 적응으로 단백질 합성이 증가하며 multi-vesicular 형태의 Golgi복합체가 생성되고, 세포질돌기 형성하는 것으로 확인되었다. 세포질에 광범위하게 분포하는 multi-vesicle은 당말단인 sialic acid를 포함하고 세포내에서 세포표면의 미세융모에 이르기까지 이동하는 것으로 확인되었다. 이상의 결과로 간흡충 감염 실험쥐로부터 분리된 섬유모세포는 actin단백으로 구성된 세포돌기가 잘 발달하고, 세포내 조면소포체에서 형성된 단백질이 Golgi복합체에서 당말단인 sialic acid로 전환되어 세포표면에 분포하게 된다. 이는 간흡충 감염으로 물리 화학적 자극 자극받은 섬유세포가 미세구조적 변화를 유발하는 것으로 확인되었다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제33권10호
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• pp.3269-3273
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• 2012

In this study, we report a new method for the high contrast imaging of biomolecular interactions at roller printed protein surfaces using thermotropic liquid crystals (LCs). Avidin was roller printed and covalently immobilized onto the obliquely deposited gold surface that was decorated with carboxylic acid-terminated self-assembled monolayers (SAMs). The optical response of LCs on the roller printed film of avidin contrasted sharply with that on the obliquely deposited gold surface. The binding of biotin-peroxidase to the roller printed avidin was then investigated on the obliquely deposited gold substrate. LCs exhibited a non-uniform and random orientation on the roller printed area decorated with the complex of avidin and biotin-peroxidase, while LCs displayed a uniform and planar orientation on the area without roller printed proteins. The orientational transition of LCs from uniform to non-uniform state was triggered by the erasion of nanometer-scale topographies on the roller printed surface after the binding of biotin-peroxidase to the surface-immobilized avidin. The specific binding events of protein-receptor interactions were also confirmed by atomic force microscopy and ellipsometry. These results demonstrate that the roller printing of proteins on obliquely deposited gold substrates could provide a high contrast signal for imaging biomolecular interactions using LC-based sensors.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제13권3호
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• pp.206-212
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• 1998

Salmonella spp.의 신속한 검출을 위하여 엷은 박막형태의 수정결정을 사용하는 압전류적(piesoelectric) 항체센서 시스템을 개발하고 증류수, 완충용액, 식염용액 등의 여러 매질 중에서 보여주는 진동 특성을 검토하였다. Salmonella spp. 균 구조항원(Common structural antigen)에 대한 항체를 수정결정에 PEI pre-coating, BSA 가교화, 3-APTES silanizaition, protein A와 DTBP thiolation의 5가지 방법에 의해 고정화한 후 항체 센서의 안정성을 살펴보았다. Salmonella 균을 주입하였을 때 Salmonella 균과 수정 결정에 고정화한 항체와의 결함반응에 의해 수정결정의 질량증가와 이에 따른 진동수 감소가 나타났다. 고정화방법 중 protein A와 DTBP를 이용하여 고정화하는 방법이 센서반응을 가장 안정적이고 재현성 있게 나타내줌을 알 수 있었다. $7.45{\times}10^{7}\;CFU/ml$의 Salmonella 균을 반응 cell 내에 주입하였을 때 protein A를 이용한 고정화의 경우 80Hz, DTBP를 이용한 고정화의 경우 283 Hz의 진동수 감소가 나타났으며, 압전류적 항체센서를 이용할 경우 40분 이내에 Salmonella spp.의 검출이 가능하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권6호
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• pp.1031-1035
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• 2007

Prostate specific $antigen-{\alpha}_1-antichymotrypsin$ was detected by a double-enhancement strategy involving the exploitation of both colloidal gold nanoparticles (AuNPs) and precipitation of an insoluble product formed by HRP-biocatalyzed oxidation. The AuNPs were synthesized and conjugated with horse-radish peroxidase-PSA polyclonal antibody by physisorption. Using the protein-colloid for SPR-based detection of the PSPJACT complex showed their enhancement as being consistent with other previous studies with regard to AuNPs enhancement, while the enzyme precipitation using DAB substrate was applied for the first time and greatly amplified the signal. The limit of detection was found at as low as 0.027 ng/ml of the PSA/ACT complex (or 300 fM), which is much higher than that of previous reports. This study indicates another way to enhance SPR measurement, and it is generally applicable to other SPR-based immunoassays.

• 한국전자현미경학회:학술대회논문집
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• 한국현미경학회 1996년도 제27회 춘계학술대회
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• pp.25-28
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• 1996

• Applied Microscopy
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• 제27권4호
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• pp.403-416
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• 1997

In order to observe the localization of the specific antigenic protein in the tissue of Paragonimus westermani metacercaria, immunogoldlabeling method was applied using IgG of the dog which were infected with Paragonimus westermani metacercaria and IgG of rabbits which were immunized with purified 23 kDa protein from metacercaria of the Paragenimus westermani. The metacercaria worm tissues obtained from Cambaroides similis were embedded in Lowicryl HM20 medium, treated with infected and immunized IgG and protein A gold complex (particle size; 12 nm) and observed by electron microscope. In the tissue antigen of Paragonimus westermani metacercaria, the content of excretory bladder which was highly dense electron density was constituted in the excretory bladder of the parenchymal tissue. In the metacercaria tissues antigen reacted with IgG of infected dog. Labeled gold particles distributed on the interstitial matrix of parenchymal cells, fibrous granules of parenchymal tissue and the content of excretory bladder. High antigenicity was observed on content of excretory bladder. It was found to be specifically distributed at the tissue of Paragonimus westermani metacercaria. In the tissues antigen reacted with IgG of immunized rabbit. Labeled gold particles randomly distributed on the interstitial matrix and fibrous granules of parenchymal tissue but in the content of excretory bladder of Paragonimus westermani metacercaria, gold particles were richly labeled. Therefore, the 23 kDa protein contained with Paragonimus westermani metacercaria was found protein which was specifically constituted at the content of excretory bladder of Paragonimum westermani metacercaria. The 23 kDa protein was commonly contained from of Paragonimus westermani metacercaria to adult and showed strong antigenicity against the immunized and infected IgG.

• Applied Microscopy
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• 제37권1호
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• pp.43-52
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• 2007

선모충(Trichinella spiralis) 유충의 조직세포에 존재하는 분비배설, 감염 및 45 kDa 단백 항원의 분포를 확인하기 위하여 면역항체와 황금표지 단백A 복합체를 이용한 면역전자현미경 방법을 사용하였다. 분비배설항원은 선모충에 감염된 실험쥐의 근육으로부터 분리된 선모충을 인공배양 용액에 1일, 3일 동안 배양한 배양액을 수집하여 배설항원으로 사용하였다. 45 kDa 단백 항원은 실험용 흰쥐 근육에서 분리된 선모충유충을 분쇄하여 45 kDa 단백 항원을 분리하였다. 수집된 분비배설항원과 45 kDa 단백 항원은 실험토끼에 주사한 다음 6주 후에 실험토끼의 혈청으로부터 면역항체를 수집하였다. 감염항체는 선모충유충을 실험용 흰쥐에 감염시키고 4주 후에 실험용 흰쥐에서 수집된 혈청으로부터 분리하였다. 실험용 흰쥐 근육에서 분리된 선모충 유충은 고정과 탈수과정을 거처 Lowicryl HM20에 포매하고 초박절편을 제작하여 면역항체와 황금표지 단백A 복합체 (입자크기 15nm)를 반응시켜 전자현미경으로 관찰하였다. 1일 분비배설항원에 대한 실험용토끼 면역항체를 선모충유충 조직항원에 반응시켰을 때 충체의 표피와 기저층 그리고 식도세포간질 (esophagus interstitial matrix, EIM) 및 stichocyte의 ${\alpha}_0,\;{\alpha}_1$ 과립에 황금입자가 표지되었다. 3일 분비배설항원에 대한 실험용토끼 면역항체를 선모충유충 조직항원에 반응시켰을 때 충체의 표피와 기저층 그리고 EIM 및 stichocyte의 ${\alpha}_0$ 과립에 황금입자가 표지 되었다. 감염항체를 선모충 유충 조직항원에 반응시켰을 때 충체의 표피와 EIM에 황금입자가 표지되었다. 그리고 분리된 45 kDa 단백 항원에 대한 실험용토끼 면역항체를 선모충유충 조직항원에 반응시켰을 때 충체의 표피와 기저층 그리고 EIM 및 stichocyte의 ${\alpha}_0\;{\alpha}_1$ 과립에 황금입자가 표지되었다. 따라서 1일 동안 배설되는 분비배설항원은 선모충 유충의 표피와 stichocyte의 ${\alpha}_0\;{\alpha}_1$ 과립에서 유도되는 반면에 3일 동안 배설되는 분비배설항원은 표피와 stichocyte의 ${\alpha}_0$ 과립에서 유도되고, 선모충유충 감염후 1주, 4주에 실험쥐에서 형성되는 감염항체는 선모충의 표피와 기저층 그리고 EIM에서 분비되는 항원에 의하여 생성된다. 이상의 결과로 선모충의 분비배설항원과 감염항원은 선모충 유충의 표피와 EIM및 stichocyte의 ${\alpha}_0\;{\alpha}_1$ 과립에서 유도되며 이들은 45 kDa 단백을 포함하고 있는 것으로 생각된다.

• Journal of Plant Biology
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• 제35권2호
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• pp.99-106
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• 1992

인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 종자단백질인 vicilin을 ammonium sulfate 침전, gel permeation 및 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. Vicilin은 분자량 55,000(큰 소단위) 및 44,000(작은 소단위)인 두 종의 소단위를 포함하는 당단백질이다. Vicilin에 대한 항체를 토끼에서 형성시켜 DEAE-Affi-Gel Blue affinity 크로마토그래피로 정제하였다. 이 항체와 금 입자가 결합된 2차 항체를 종자의 배유세포에 반응시켰다. 금 입자는 배유세포내의 단백질체, 전자밀도가 높은 과립 및 골지체의 elaborating 과립에 표지되었다. 이러한 결과는 조면소포체에서 합성되어 골지체로 수송된 vicilin이 골지의 소포내에서 공정과정을 거쳐 전자밀도가 높은 과립이 된 다음 단백질로 수송됨을 나타낸다.

• Applied Microscopy
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• 제23권2호
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• pp.78-83
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• 1993

To investigate the effect of mercuric chloride on the pectoral muscel cells during chick embryogensis, chicken embryos were treated with mercuric chloride. Monoclonal antibodies against myosin were prepared for the localization of differentiation of thick filaments detected by the use of protein A-gold complex as a cytochemical marker. The effect of mercuric chloride was appeared not only to be ascribed with the reduced formation of myofibrilogenesis but also associated with induced change of morphology by the inhibition of protein synthesis.