This research was performed to Investigate the effects of green tea on the lipid composition of serum and liver and the specific activities of antioxidative enzymes. Male Sprague Dawley rats were fed 10% fat diet with lard and fish oil. Powdered green tea was added to the lard and fish oil diet at the level of 0.1% and 1%. After 6 weeks of feeding, serum and liver were obtained from experimental rats. Then we measured the concentration of total cholesterol, HDL-cholesterol and triglyceride. From liver cytosolic fraction, we analized the specific activities of superoxide dismutase, glutathione peroxidase and glutathione S-transferase. The level of total cholesterol and triglyceride were decreased and the ratio of HDL-cholesterol to total cholesterol was increased by the fish oil in the serum. But in the liver, the level of total cholesterol was increased by the fish oil and green tea than the lard. The specific activities of glutathione S-transferase were more increased in the fish oil than the lard. There was not effect of the green tea of daily dose on the lipid composition of serum and liver and the specific activities of antioxidative enzymes in rats.
수태는 많은 신체적인 기능들의 높은 에너지 요구 및 산소요구량 증가로 인하여 생리적인 변화를 수반한다. 때문에 산소 섭취량 및 이용이 증가하여 산화적인 스트레스의 증가를 기대할 수 있다. 수태중에 발생되는 free radical에 대하여 홍삼사포닌 투여가 간 항산화효소의 활성에 미치는 영향을 연구하였다. 수태중에 superoxide dismutase(SOD)의 활성은 전반적으로 감소하는 경향을 나타냈으며, 사포닌 투여군은 대조군에 비하여 유의한 변화가 관찰되지 않았다. 그리고 glutathione peroxidase(GPX) , gluthatione reductase (GRD)와 catalase의 활성도는 수태중에 감소하는 경향을 나타냈으며, 반면에 사포닌 투여군은 대조군 비하여 GRD 및 catalase의 활성도에 유의한 변화를 나타냈다. 사포닌 투여군의 GPX의 활성도는 대조군에 비하여 감소하는 경향이 다소 적게 나타났다. 수태중 대조군의 glutathione-S-transferase (GST) 활성도는 항상성을 유지하기 위해 증가하는 경향을 나타냈으며, 사포닌 투여군도 대조군에 비하여 이 효소의 활성도가 더욱 증가하는 경향을 나타냈다. 분만 후 대조군 및 사포닌 투여군은 정상수준으로 회복되었다. 수태와 같은 생체변화에도 불구하고 수태한 흰쥐의 간 항산화 효소활성에 대한 사포닌의 영향은 산소독성에 대하여 모체간을 보호해주는 생리적 항상성의 적응메카니즘에 의하여 조절되는 것으로 보인다.
Glutathione S-transferase (GST) enzyme levels are associated with risk of many cancers, including hematologic tumours. We here aimed to investigate the relationships between GSTM1, GSTT1 and GSTP1 polymorphisms and the risk of AML. Genotyping of GSTs was based upon duplex polymerase-chain-reactions with the confronting-two-pair primer (PCR-CTPP) method in 163 cases and 204 controls. Individuals carrying null GSTT1 genotype had a 1.64 fold risk of acute leukemia relative to a non-null genotype (P<0.05). A heavy risk was observed in those carrying combination of null genotypes of GSTM1 and GSTT1 and GSTP1 Val allele genotypes when compared with those carrying wild genotypes, with an OR (95% CI) of 3.39 (1.26-9.26) (P<0.05). These findings indicate that genetic variants of GST and especially the GSTT1 gene have a critical function in the development of AML. Our study offers important insights into the molecular etiology of AML.
Streptozotocin(STZ)을 45mg/kg, body weight(b.w)의 용량으로 흰쥐의 미정맥에 투여 한 후 유발된 당뇨 흰쥐에게 우엉 뿌리 에탄올 추출물을 1일 1회 7일간 1,000mg/kg,bw의 용량으로 투여하고 항산화작용에 관여하는 glutathione-s-transferase(GST), catalase(CAT), glutathioneperoxidase (GSH-Px)활성과 malondialdehyde(MDA)와 glutathione(GSH) 함량을 측정한 결과 우엉 뿌리 에탄올 추추물 투여군에서 MDA 함량, CAT와 GSH-Px 활성 등의 유의적인 감소(p<0.05)를, GSH 함량과 GST 활성은 유의적인 증가(p<0.05)를 나타내었다. 이와 같이 우엉 뿌리 에탄올 추출물이 항산화 개선효과를 갖는 유효성분을 함유하고 있음을 알 수 있었다.
현삼의 기내배양에서 TDZ처리가 비교적 재분화에 효율적이었고 형질전환 식물체를 선발하기 위하여 선발표지 유전자로 사용되는 NPTII gene이 항생제 kanamycin에 대한 저항성은 50 mg/L가 적당하였다. 선발배지에서 자란 현삼 식물체에서 DNA를 추출하여 PCR 분석을 통하여 특정 유전자 Gh-5 gene을 검정한 결과 형질전환되지 않은 식물체에서는 볼수가 없는 988 bp의 band가 형질전환된 식물체에서는 관찰되어 GST 유전자가 현삼의 염색체 안으로 삽입되었음을 확인하였다. 형질전환 효율 증진을 위하여 선발과정에서 암상태를 30일까지 유지할 경우 높은 형질전환 효율을 나타내었으나 그 이상의 처리는 오히려 형질전환 효율이 감소하는 결과를 나타내었다 (Table 5). 형질전환 식물체에서 GST의 활성이 형질전환 되지 않은 식물체의 2배로 나타났고 유도체의 적정 처리 농도는 50$\mu$M이며 유도체 처리 시간에 따라서는 12시간까지는 점차적으로 높아지는 경향이었으나 그 이상의 시간에서는 활성이 저하됨이 확인되었다. Fungus 피검균인 Asperigillus awamori에서 6, 12시간 처리 시 비교적 높은 활성을 보여주었으며 그 이상의 시간처리에서는 명확한 균사 억제를 나타내지 못하였으며, 특히 12시간에서 상대적으로 높은 활성을 나타내었다. Cladosporium herbarum에서 형질전환된 식물체의 활성이 훨씬 높게 나타났으며 6시간 처리에서 다른 처리에 비하여 높은 활성을 나타내었다. 피검균인 Saccharomyces cerevisiae에서는 형질전환 식물체에서 높은 활성을 보여주었으며 6, 12시간 처리에서 비슷하게 높은 활성을 보여 주었다. 박테리아 피검균 Bacillus subtillis에서는 50$\mu$M 이하의 유도체 처리에서 비교적 높은 활성을 나타내었다.
The treatmene of V79 cells with diethyl maleate (DEM) led to decrease in glutathione (GSH) level as increasing DEM concentration. Mercuric chloride, treated for 6 hrs with 2ng/ml, affected the GSH metabolizing enzymes glutathione S-transferase (GST) and glutathione peroxidase (GSP), dropping their activities to 60% and 75%, respectively, though not so much in GSH level(80%). However, the toxic effects of mercuric chloride on those enzymes and GSH level were both amplified when the Hg2+ treatment was combined with the preceding DEM treatment.
Metformin is a drug used to lower blood sugar levels in patients with type 2 diabetes via activation of adenosine monophosphate (AMP)-activated protein kinase (AMPK). The primary objective of this study was to investigate whether metformin at the pharmacologically effective concentrations affects the expressions of ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase and phase II antioxidant genes in the H4IIE cell. Treatment of the cells with either metformin or 5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside (AICAR) abrogated tert-butylhydroxyquinone (t-BHQ) induction of ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase, a rate limiting enzyme of GSH synthesis. The ability of t-BHQ to induce glutathione S-transferases (GSTs), a major class of phase II detoxifying enzymes that playa critical role in protecting cells from oxidative stress or electrophiles, was also inhibited by the agents. Transcriptional gene repression by metformin was verified by the GSTA2 promoter luciferase assay. Moreover, either metformin or AICAR treatment significantly decreased t-BHQ-dependent induction of other GSTs (i.e., $GST{\mu}$ and $GST{\pi}$ forms). Taken together, our data indicate that metformin treatment may result in the repression of ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase and glutathione S-transferase genes possibly via AMPK activation.
인체 혈액 응고 9인자는 간에서 생성되며 461개의 아미노산으로 구성된 당 단백질이다. 따라서 인체 혈액 응고 9인자 cDNA를 찾기 위해 태아의 간(fetal liver) cDNA library를 PCR(Polymerase Chain reaction) 방법으로 screening하였으며, 그 결과 ATG개시 코돈으로부터 TAA종료 코돈까지 포함하는 1.4 kb의 9인자 cDNA를 찾았다. 또한 클론된 9인자 cDNA를 박테리아에서 발현시키기 위해 박테리아 발현 벡터인 pGEX-2T 플라스미드에 클로닝하므로써 pGEX-F9 플라스미드를 제조하였다. pGEX-F9로 형질전환된 E. coli에서 PGEX-F9의 발현을 유도하면 73 kDa 크기의 GST-factor9 융합 단백질이 다량생성되며 , 이 단백질이 혈액 응고 9인자 단백질을 함유하는 융합 단잭질임을 혈액 응고 9인자 항체를 이용한 Western blot으로 입증하였다. E. coli에서 발현된 GST-factor 9 융합 단백질은 전체 단백질의 약 20%를 차지하며 GST agarose bead를 이용한 one step purificarion 방법을 통해 GST-factor9 융합 단백질을 쉽게 분리 할 수 있다.
Water extract from Cnidii Rhizoma (CRW) was tested for colon cancer chemopreventive activity by measuring the induction of phase II detoxification enzyme activity [quinone reductase (QR) and glutathione S-transferase (GST)] and glutathion (GSH) levels and ornithine decarboxylase (ODC) activity in cultured human colorectal adenocarcinoma HT-29 cells. CRW inhibited cell proliferation in cultured HT-29 cells. CRW induced QR activity in a dose-dependent manner in a concentration range of 0.1${\sim}$5.0 $mg/m{\ell}$. GST activity was also induced with the treatment of CRW in HT-29 cells. In addition GSH levels was increased with CRW. CRW inhibited ODC activity, a key enzyme of polyamine biosynthesis, which is enhanced in tumor promotion. These results suggest that CRW has colon cancer chemopreventive activity by increasing phase II enzyme activity and GSH levels and inhibiting ODC activity in vitro.
항균 펩타이드(Antimicrobial peptides(AMPs)는 그람 양성, 그람 음성 세균과 진균병원체에 대항하는 생명체에서 중요한 역할을 하는 물질이다. 인간의 Cathelicidin 항균 펩타이드는 임상학적으로 사용할 수 있는 여러 가지의 생물학적 활성을 가진다. 항균 펩타이드의 생산 비용은 재조합 방법으로 낮출 수가 있다. 대장균은 저렴하며 손쉬운 조작이 가능하기 때문에 다른 재조합 단백질처럼 항균 펩타이드의 발현에 훌륭한 숙주가 될 수 있다. 그러나 대장균에서의 항균 펩타이드의 과발현은 항균 펩타이드가 과발현 되었을 때 대장균에 독성을 보일 수 있으므로 어려움이 보고가 되어있다. 본 연구에서는 이러한 문제점을 극복하고자 항균 펩타이드를 Glutathione S-transferase(GST) 결합 단백질에 융합하여 항균펩타이드의 독성을 감소시키도록 설계하여 발현을 시도하였다. 이 때 발현한 항균 펩티드는 LL37과, gaegurin4과 LL37의 잡종 펩타이드 GGN4-LL37(GL32로 명명)를 GST에 융합되도록 벡터를 구축하고 설계하여 대장균에서 GST 융합단백질로 발현시켰다. 융합 단백질은 친화력 컬럼을 사용하여 분리하고 GST를 절단하여 항균펩타이드 만을 분리하였고 분리한 펩타이드는 웨스턴 블롯팅으로 확인하였고 그람 양성, 그람 음성 세균에 대하여 항균 활성을 나타내는 것을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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