Gyusang Jeong;Seung Hyun Shin;Su Na Kim;Yongjoo Na;Byung Cheol Park;Jeong Hun Cho;Won-Seok Park;Hyoung-June Kim
Journal of Ginseng Research
/
제47권3호
/
pp.440-447
/
2023
Background: The human hair follicle undergoes cyclic phases-anagen, catagen, and telogen-throughout its lifetime. This cyclic transition has been studied as a target for treating hair loss. Recently, correlation between the inhibition of autophagy and acceleration of the catagen phase in human hair follicles was investigated. However, the role of autophagy in human dermal papilla cells (hDPCs), which is involved in the development and growth of hair follicles, is not known. We hypothesized that acceleration of hair catagen phase upon inhibition of autophagy is due to the downregulation of Wnt/β-catenin signaling in hDPCs, and that components of Panax ginseng extract can increase the autophagic flux in hDPCs. Methods: We generated an autophagy-inhibited condition using 3-methyladenine (3-MA), a specific autophagy inhibitor, and investigated the regulation of Wnt/β-catenin signaling using the luciferase reporter assay, qRT-PCR, and western blot analysis. In addition, cells were cotreated with ginsenoside Re and 3-MA and their roles in inhibiting autophagosome formation were investigated. Results: We found that the unstimulated anagen phase dermal papilla region expressed the autophagy marker, LC3. Transcription of Wnt-related genes and nuclear translocation of β-catenin were reduced after treatment of hDPCs with 3-MA. In addition, treatment with the combination of ginsenoside Re and 3-MA changed the Wnt activity and hair cycle by restoring autophagy. Conclusions: Our results suggest that autophagy inhibition in hDPCs accelerates the catagen phase by downregulating Wnt/β-catenin signaling. Furthermore, ginsenoside Re, which increased autophagy in hDPCs, could be useful for reducing hair loss caused by abnormal inhibition of autophagy.
본 연구에서는 발효홍삼과 발효하지 않은 홍삼을 BALB/c mouse에 경구투여한 후 혈청을 채취하여 주요 진세노사이드 생체이용율을 LC-MS/MS이용하여 분석하였다. 또한 이들의 항염효과를 IL-1𝛽, TNF 정량분석을 통해 비교하였다. 홍삼을 발효하였을 때, Rd를 포함한 전체적인 총 진세노사이드 함량이 증가하는 것을 확인하였으며, 마우스에게 투여하였을 총 진세노사이드 TG 의 혈액 검출량 AUC 또한 발효홍삼을 섭취하였을 때 높은 것을 확인하였다. Cmax값 또한 동일하게 발효홍삼을 섭취하였을 때 증가하는 것을 확인하였다. 염증지표를 확인 하였을때 유도군과 비교하여 IL-1𝛽, TNF의 감소효과는 확인하였으나 그룹간의 유의적 차이는 발생하지 않았다. 이상의 연구결과로 probiotics가 발효홍삼의 ginsenoside 생체이용율을 향상시키는 중요한 요인임을 확인하였고, 이는 probiotics를 이용한 천연물 발효제제의 적용 확장과 그 산업적 활용성 증대에 기여할 수 있을 것으로 사료된다.
인삼(Panax ginseng C. A. Meyer)의 사포닌 진세노사이드 Rb1이 처리된 인간 피부각질세포 HaCaT에서 microarray 분석 및 발현이 증가된 세포사멸 반응에 대한 작용기전을 연구하였다. HaCaT 세포에 진세노사이드 Rb1의 처리로 세포사멸, 유사분열 세포주기의 G2/M 전이, 세포분열, 핵분열, 그리고 단백질 수송 등의 작용기전에 관여하는 유전자들이 2 배 이상 발현이 증가된 것으로 나타났으며, DNA 수선, 감수 핵분열, 그리고 세포외기질 체계 등의 작용기전에 관여하는 유전자들은 2 배 이상 발현이 감소된 것으로 나타났다. 특히 세포사멸 신호전달은 FAS와 PLA2G4A를 경유하는 것으로 나타났으며, 이들 유전자의 상위 조절자로 STAT3가 예측되었다. 세포사멸 반응 경유 유전자 FAS와 PLA2G4A의 활성을 qPCR로 확인한 결과, FAS 유전자는 $10{\mu}g/ml$의 진세노사이드 Rb1를 24시간 동안 처리하였을 경우 약 2 배의 발현 증가와, PLA2G4A 유전자는 6시간 처리부터 약 2 배로 증가되어 24시간 동안 처리시 2 배 이상의 유전자 발현이 증가되었다. 한편 STAT3-siRNA를 이용한 knock-down 실험에서 FAS의 발현 감소와 PLA2G4A의 발현 증가로 상위 조절자 STAT3로부터 FAS 만을 경유하는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과 진세노사이드 Rb1의 처리에 의해 상위 조절자인 STAT3는 FAS를 경유하여 세포사멸을 유도하는 것임을 알 수 있다.
This study was carried out to isolate saponin compounds from red-ginseng efflux, which was produced during the industrial processing of red-ginseng from fresh ginseng. We isolated crude saponin from the efflux extract (moisture content 35.0%) by using Diaion HP-20 adsorption method. Non-saponin fraction, which was adsorbed on Diaion HP-20 resin, was removed by eluating with $H_{2}O$ and 25% spirit. Then crude saponin was eluated with 95% spirit, continuously. Saponin in the eluated fractions was confirmed by TLC analysis. Crude saponin isolated from red ginseng efflux extract contained 12.10% of saponin. whereas those of white ginseng and red-ginseng were 3.30 and 3.39%, respectively. Ginsenoside contents showed the highest contents kin crude saponin from red ginseng efflux extract. Expacilly, the ginsenoside-$Rb_{1}$ and Re showed the highest contents in red-ginseng efflux extract when compared with those of white ginseng and red ginseng crude saponins. And the other ginsenosides except ginsenoside-$Rb_{1}$ and -Re also showed the highest contents in red ginseng efflux extract. However, the ratio of PD saponin (Panaxadiol saponin: $Rb_{1}+Rb_{2}$+Rc+Rd) to PT saponin (panaxatriol: $Re+Rg_{1}$) showed almost the same level when compared with those of ginseng saponin fractions. Ratio of PD/PT from red ginseng efflux extract was 1.99. Ratios of PD/PT from white ginseng and red ginseng were 1.85 and 1.84, respectively. Saponin purity, which was calculated by ratio percent of total ginsenoside to curde saponin content, was 45.90%. In case of white ginseng and red ginseng, the purities were 35.50 and 36.00%, respectively. However, by PHLC analysis, we confirmed that crude saponin isolated from red ginsengs. It suggested that crude saponin isolated from red ginseng ellux also would be useful component as ginseng saponins.
Background: Black ginseng (Ginseng Radix nigra, BG) refers to the ginseng steamed for nine times and fine roots (hairy roots) of that is called fine black ginseng (FBG). It is known that the content of saponin of FBG is higher than that of BG. Therefore, in this study, we examined antitumor effects against MCF-7 breast cancer cells to target the FBG extract and its main component, ginsenoside Rg5 (Rg5). Methods: Action mechanism was determined by MTT assay, cell cycle assay and western blot analysis. Results: The results from MTT assay showed that MCF-7 cell proliferation was inhibited by Rg5 treatment for 24, 48 and 72 h in a dose-dependent manner. Rg5 at different concentrations (0, 25, 50 and $100{\mu}M$), induced cell cycle arrest in G0/G1 phase through regulation of cell cycle-related proteins in MCF-7 cells. As shown in the results from western blot analysis, Rg5 increased expression of p53, $p21^{WAF1/CIP1}$ and $p15^{INK4B}$ and decreased expression of Cyclin D1, Cyclin E2 and CDK4. Expression of apoptosiserelated proteins including Bax, PARP and Cytochrome c was also regulated by Rg5. These results indicate that Rg5 stimulated cell apoptosis and cell cycle arrest at G0/G1 phase via regulation of cell cycle-associated proteins in MCF-7 cells. Conclusion: Rg5 promotes breast cancer cell apoptosis in a multi-path manner with higher potency compared to 20(S)-ginsenoside Rg3 (Rg3) in MCF-7 (HER2/ER+) and MDA-MB-453 (HER2+/ER) human breast cancer cell lines, and this suggests that Rg5 might be an effective natural new material in improving breast cancer.
Kim, Dong Hoi;Kim, Dae Won;Jung, Bo Hyun;Lee, Jong Hun;Lee, Heesu;Hwang, Gwi Seo;Kang, Ki Sung;Lee, Jae Wook
Journal of Ginseng Research
/
제43권2호
/
pp.326-334
/
2019
Background: The objective of our study was to analyze the neuroprotective effects of ginsenoside derivatives Rb1, Rb2, Rc, Rd, Rg1, and Rg3 against glutamate-mediated neurotoxicity in HT22 hippocampal mouse neuron cells. Methods: The neuroprotective effect of ginsenosides were evaluated by measuring cell viability. Protein expressions of mitogen-activated protein kinase (MAPK), Bcl2, Bax, and apoptosis-inducing factor (AIF) were determined by Western blot analysis. The occurrence of apoptotic and death cells was determined by flow cytometry. Cellular level of $Ca^{2+}$ and reactive oxygen species (ROS) levels were evaluated by image analysis using the fluorescent probes Fluor-3 and 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, respectively. In vivo efficacy of neuroprotection was evaluated using the Mongolian gerbil of ischemic brain injury model. Result: Reduction of cell viability by glutamate (5 mM) was significantly suppressed by treatment with ginsenoside Rb2. Phosphorylation of MAPKs, Bax, and nuclear AIF was gradually increased by treatment with 5 mM of glutamate and decreased by co-treatment with Rb2. The occurrence of apoptotic cells was decreased by treatment with Rb2 ($25.7{\mu}M$). Cellular $Ca^{2+}$ and ROS levels were decreased in the presence of Rb2, and in vivo data indicated that Rb2 treatment (10 mg/kg) significantly diminished the number of degenerated neurons. Conclusion: Our results suggest that Rb2 possesses neuroprotective properties that suppress glutamate-induced neurotoxicity. The molecular mechanism of Rb2 is by suppressing the MAPKs activity and AIF translocation.
Background: Ginseng is one of the most valuable herbal supplements. It is challenging to perform quality control of ginseng products due to the diversity of bioactive saponins in their composition. Acid or alkaline hydrolysis is often used for the structural elucidation of these saponins and sugars in their side chains. Complete transformation of the original ginsenosides into their aglycones during the hydrolysis is one of the ways to determine a total saponin group content. The main hurdle of this approach is the formation of various by-products that was reported by many authors. Methods: Separate HPLC assessment of the total protopanaxadiol, protopanaxatriol and ocotillol ginsenoside contents is a viable alternative to the determination of characteristic biomarkers of these saponin groups, such as ginsenoside Rf and pseudoginsenoside F11, which are commonly used for authentication of P. ginseng Meyer and P. quinquefolius L. samples respectively. Moreover, total ginsenoside content is an ideal aggregated parameter for standardization and quality control of ginseng-based medicines, because it can be directly applied for saponin dosage calculation. Results: Different hydrolysis conditions were tested to develop accurate quantification method for the elucidation of total ginsenoside contents in herbal products. Linearity, limits of quantification, limits of detection, accuracy and precision were evaluated for the developed HPLC-MS method. Conclusion: Alkaline hydrolysis results in fewer by-products than sugar elimination in acidic conditions. An equimolar response, as a key parameter for quantification, was established for several major ginsenosides. The developed approach has shown acceptable results in the analysis of several different herbal products.
Background: The roots of Panax ginseng contain two types of tetracyclic triterpenoid saponins, namely, protopanaxadiol (PPD)-type saponins and protopanaxatiol (PPT)-type saponins. In P. ginseng, the protopanaxadiol 6-hydroxylase (PPT synthase) enzyme catalyses protopanaxatriol (PPT) production from protopanaxadiol (PPD). In this study, we constructed homozygous mutant lines of ginseng by CRISPR/Cas9-mediated mutagenesis of the PPT synthase gene and obtained the mutant ginseng root lines having complete depletion of the PPT-type ginsenosides. Methods: Two sgRNAs (single guide RNAs) were designed for target mutations in the exon sequences of the two PPT synthase genes (both PPTa and PPTg sequences) with the CRISPR/Cas9 system. Transgenic ginseng roots were generated through Agrobacterium-mediated transformation. The mutant lines were screened by ginsenoside analysis and DNA sequencing. Result: Ginsenoside analysis revealed the complete depletion of PPT-type ginsenosides in three putative mutant lines (Cr4, Cr7, and Cr14). The reduction of PPT-type ginsenosides in mutant lines led to increased accumulation of PPD-type ginsenosides. The gene editing in the selected mutant lines was confirmed by targeted deep sequencing. Conclusion: We have established the genome editing protocol by CRISPR/Cas9 system in P. ginseng and demonstrated the mutated roots producing only PPD-type ginsenosides by depleting PPT-type ginsenosides. Because the pharmacological activity of PPD-group ginsenosides is significantly different from that of PPT-group ginsenosides, the new type of ginseng mutant producing only PPD-group ginsenosides may have new pharmacological characteristics compared to wild-type ginseng. This is the first report to generate target-induced mutations for the modification of saponin biosynthesis in Panax species using CRISPR-Cas9 system.
Dandan Wang;Mingkun Guo;Xiangyan Li;Daqing Zhao;Mingxing Wang
Journal of Ginseng Research
/
제47권1호
/
pp.54-64
/
2023
Background: Panax ginseng Meyer (P. ginseng) is a traditional natural/herbal medicine. The amelioration on inflammatory bowel disease (IBD) activity rely mainly on its main active ingredients that are referred to as ginsenosides. However, the current literature on gut microbiota, gut microbiota-host co-metabolites, and systems pharmacology has no studies investigating the effects of ginsenoside on IBD. Methods: The present study was aimed to investigate the role of ginsenosides and the possible underlying mechanisms in the treatment of IBD in an acetic acid-induced rat model by integrating metagenomics, metabolomics, and complex biological networks analysis. In the study ten ginsenosides in the ginsenoside fraction (GS) were identified using Q-Orbitrap LC-MS. Results: The results demonstrated the improvement effect of GS on IBD and the regulation effect of ginsenosides on gut microbiota and its co-metabolites. It was revealed that 7 endogenous metabolites, including acetic acid, butyric acid, citric acid, tryptophan, histidine, alanine, and glutathione, could be utilized as significant biomarkers of GS in the treatment of IBD. Furthermore, the biological network studies revealed EGFR, STAT3, and AKT1, which belong mainly to the glycolysis and pentose phosphate pathways, as the potential targets for GS for intervening in IBD. Conclusion: These findings indicated that the combination of genomics, metabolomics, and biological network analysis could assist in elucidating the possible mechanism underlying the role of ginsenosides in alleviating inflammatory bowel disease and thereby reveal the pathological process of ginsenosides in IBD treatment through the regulation of the disordered host-flora co-metabolism pathway.
Kim, Bae-Yuan;Lee, Mi-Young;Cho, Kyung-Hee;Park, Jeong-Hill;Park, Man-Ki
Archives of Pharmacal Research
/
제15권4호
/
pp.328-332
/
1992
A new high performance liquid chromatographic procedure is described for the analysis of ginseng saponins. Ginseng saponins were separated on Lichrosorb $NH_2$ column and anthraquinone-2, 6-disulfonate (AQDS) solution was added to the column effluent. The effluent was passed through 1.5m-PTFE capillary coiled around 10 W-UV lamp to reduce AQDS to highly fluorescent 9. 10-dihydroxyanthracene-2, 6-disulfonate which was detected by fluorescence detector. The detection limit for the ginsenoside $Rg_1$ by this method was found to be about 350 ng, the dynamic linear range was $10^2$ and the correlation coefficient of the calibration curve was 0.9999.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.