Multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs) were first oxidized (O-CNTs) to introduce carboxylic group and then further functionalized (F-CNTs) with m-phenylenediamine, which was confirmed by FTIR and SEM. It was used as an effective adsorbent for the adsorptive removal of diclofenac drug from water. Under optimum conditions of pH 6, stirring speed 600 rpm, the maximum adsorption capacity obtained was 532 mg g-1 which is superior to the values reported in literature. The adsorption was quite rapid as 25 mg L-1 drug solution was adsorbed in only 3 minutes of contact time with 10 mg of adsorbent dose. The adsorption kinetics and isotherms were studied using various models to evaluate the adsorption process. The results showed that the data best fit in kinetics pseudo-second order and Langmuir isotherm model. Furthermore, the oxidized and functionalized MWCNTs were applied on gram-negative Escherichia coli and gram-positive Staphylococcus aureus using agar disc diffusion assay to validate their anti-microbial activity. Results were unique as both oxidized and functionalized MWCNTs were equally active against both E. coli and S. aureus. The newly synthesized F-CNTs have great potential in water treatment, with their dual action of removing drug and pathogens from water, makes it potential applicant to save environment.
PES UF membranes containing silver were prepared to impart antibacterial properties for waste water treatment. Asymmetric membranes for antibacterial application were prepared from polyethersulfone (PES) and silver nitrate ($AgNO_3$) (PES/$AgNO_3$=15/2 by weight) solution in N-Methyl-2-pyrrolidone (NMP) via simple wet phase inversion technique. These membranes were characterized by polyvinylpyrrolidone (PVP) and polyethylene glycol (PEG) of different molecular weights (1000 ppm in water) at room temperature and on operating pressure of 5 bars. It was observed that the water flux of PES-$AgNO_3$ membrane is slightly lower than virgin PES but still increased linearly with the increment of pressure applied. The morphology of the resulting membranes was examined using Field-Emission Scanning Electron Microscope (FESEM) coupled with Energy Dispersive Spectroscopy (EDS). Elemental analysis using EDS proved that silver is successfully loaded on the membrane surfaces. Due to the success of loading silver on membrane surfaces, antibacterial activities were evaluated via agar diffusion method against Escherichia coli (E.coli) and Staphylococcus aureus (S.aureus) culture. By incorporating 2 wt% of silver nitrate, PES-$AgNO_3$ showed significant inhibition ring on both E.coli and S.aureus. Filtration of E.coli solution (OD 0.31) showed satisfactory rejection data with ~100% inhibition growth after 24 hours incubation at $37^{\circ}C$. Resultant membranes also exhibit better tensile strength (compared to virgin PES) up to 71% may be due to the suggested interactions. The residual silver during fabrication was measured using ICP-MS and result showed that the residual silver content of PES-$AgNO_3$ membrane was only ~1% of the original silver added in the polymer solution. These studies have shown that PES-$AgNO_3$ UF membranes are potential in improving the filtration in water treatment.
In the previous report (Choi et al., 1997), the angiogenin binding peptides identified from a phage-peptide library were analyzed by using the fusion proteins composed of the Escherichia coli maltose binding protein and its corresponding peptides. However, it was difficult to obtain a sufficient amount of the fusion proteins required for further analysis because of the low expression level. We now report a high level expression of the fusion protein and analysis of its anti-angiogenin activity. The use of strong T7 promoter and removal of signal sequence allowed about a 20-fold increase in the expression efficiency of the fusion protein. We were able to obtain about 10 mg of purified fusion protein from one liter of culture. The purified fusion protein showed angiogenin-specific affinity and inhibited the binding of biotinylated actin to human angiogenin at $IC_{50}$ of 0.6 mM. Its anti-angiogenin activity was also revealed by the chorioallantoic membrane assay.
Hernandez, Alejandra;Velasquez, Olga;Leonardi, Felice;Soto, Carlos;Rodriguez, Alexander;Lizaraso, Lina;Mosquera, Angela;Bohorquez, Jorge;Coronado, Alejandra;Espejo, Angela;Sierra, Rocio;Sanchez, Oscar F.;Almeciga-Diaz, Carlos J.;Barrera, Luis A.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권5호
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pp.689-698
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2013
The production and characterization of an active recombinant N-acetylgalactosamine-6-sulfate sulfatase (GALNS) in Escherichia coli BL21(DE3) has been previously reported. In this study, the effect of the signal peptide (SP), inducer concentration, process scale, and operational mode (batch and semi-continuous) on GALNS production were evaluated. When native SP was presented, higher enzyme activity levels were observed in both soluble and inclusion bodies fractions, and its removal had a significant impact on enzyme activation. At shake scale, the optimal IPTG concentrations were 0.5 and 1.5 mM for the strains with and without SP, respectively, whereas at bench scale, the highest enzyme activities were observed with 1.5 mM IPTG for both strains. Noteworthy, enzyme activity in the culture media was only detected when SP was presented and the culture was carried out under semi-continuous mode. We showed for the first time that the mechanism that in prokaryotes recognizes the SP to mediate sulfatase activation can also recognize a eukaryotic SP, favoring the activation of the enzyme, and could also favor the secretion of the recombinant protein. These results offer significant information for scaling-up the production of human sulfatases in E. coli.
페니실린(PEN) 항생제의 분해를 위하여 오존, 과산화수소, 자외선으로 구성된 고도산화공정(AOP)을 적용하였다. 항생물질 분해효율은 흡광도(ABS) 및 총유기탄소(TOC) 분석으로 평가하였다. $O_3/H_2O_2/UV$와 $O_3/UV$ 조합이 ABS (9 min 동안 100%) 및 TOC 감소(60 min 동안 70%)에 가장 효과가 좋았으나 사용한 실험조건에서 항생제의 무기질화 및 독성제거는 완전하지 않았다. 항생물질에 의한 생독성은 Escherichia coli 민감도 및 Vibrio fischeri 생체형광 활성평가를 이용하였으며 $O_3/UV$에 의해 민감도는 9 min 동안 100% 감소, $O_3/H_2O_2/UV$에 의한 생체형광에 대한 독성은 60 min 동안 57% 감소하였다. 생물학적 분해를 위한 AOP 조합으로 $O_3/UV$ 조합을 선정하였으며 $BOD_5/COD$ 비율로 생분해도의 개선 여부를 간접 측정한 결과 $O_3/UV$로 30 min 처리함으로 $BOD_5/COD$ 비율이 약 4배 증가하였다. 페니실린 20 mg/L를 포함하는 인공폐수에 대하여 AOP 처리 후 Pseudomonas putida를 이용하여 호기적 생물학적 분해를 진행한 결과, $O_3/UV$ 전처리한 경우 페니실린의 완전 무기질화가 가능하였으며 전처리하지 않은 경우에 비하여 분해속도가 55% 증진되었다. 결론으로, 호기성 생물학적 처리를 위한 AOP 전처리로써 $O_3/UV$ 조합이 추천되며 페니실린의 완전 분해를 촉진할 수 있다.
Grouper nervous necrosis virus (GNNV) infection causes mass grouper mortality, leading to substantial economic loss in Taiwan. Traditional methods of controlling GNNV infections involve the challenge of controlling disinfectant doses; low doses are ineffective, whereas high doses may cause environmental damage. Identifying potential methods to safely control GNNV infection to prevent viral outbreaks is essential. We engineered a virus-binding bacterium expressing a myxovirus resistance (Mx) protein on its surface for GNNV removal from phosphate-buffered saline (PBS), thus increasing the survival of grouper fin (GF-1) cells. We fused the grouper Mx protein (which recognizes and binds to the coat protein of GNNV) to the C-terminus of outer membrane lipoprotein A (lpp-Mx) and to the N-terminus of a bacterial autotransporter adhesin (Mx-AIDA); these constructs were expressed on the surfaces of Escherichia coli BL21 (BL21/lpp-Mx and BL21/Mx-AIDA). We examined bacterial surface expression capacity and GNNV binding activity through enzyme-linked immunosorbent assay; we also evaluated the GNNV removal efficacy of the bacteria and viral cytotoxicity after bacterial adsorption treatment. Although both constructs were successfully expressed, only BL21/lpp-Mx exhibited GNNV binding activity; BL21/lpp-Mx cells removed GNNV and protected GF-1 cells from GNNV infection more efficiently. Moreover, salinity affected the GNNV removal efficacy of BL21/lpp-Mx. Thus, our GNNV-binding bacterium is an efficient microparticle for removing GNNV from 10‰ brackish water and for preventing GNNV infection in groupers.
본 연구에서는 포장방법 (진공, 일반)과 저장온도($4^{\circ}C$, $-20^{\circ}C$)를 달리한 육류 (소고기, 닭고기) 및 생선에 대해 저선량 감마선 반복조사를 적용하였을 때 나타나는 병원성 미생물 E. coli O157:H7 및 S. Typhimurium의 사멸효과를 확인하였다. 소고기와 닭고기의 경우 E. coli O157:H7은 최소 2 kGy 이상의 단일조사와 0.5 kGy 이상으로 반복조사 시 생육이 확인되지 않았고, S. Typhimurium은 최소 2 kGy 이상의 단일조사와 1 kGy 이상으로 반복조사 시 생육이 확인되지 않았다. 생선의 경우 최소 0.5 kGy 이상의 단일 및 반복조사 시 E. coli O157:H7 와 S. Typhimurium의 생육이 확인되지 않았다. 육류보다 생선이 낮은 선량으로 미생물을 사멸시킬 수 있었으며, 전반적으로 포장 방법에 따른 조사선량의 차이는 없었으나 저장온도의 경우 냉장보다 냉동의 경우가 좀 더 높은 조사선량을 요구하는 것으로 확인되었다.
최근 현대인들의 다중이용시설 사용 빈도가 증가하면서 실내 공기 질, 특히 실내공기 오염원인 공기매개 전염성 세균 및 바이러스 불안에 대한 관심이 높아져 다양한 형태의 공기청정기와 공기살균기의 보급이 확산되고 있다. 따라서 공기 내 미생물을 살균할 수 있는 기술에 대한 연구 필요성이 대두되고 있다. 본 연구에서는 염촉매 전기분해 공기살균기를 개발하여 공기살균기의 항균활성과 인간 세포주(HaCaT, BEAS-2B, THP-1)에 대한 세포독성을 통한 안전성을 조사하였다. 공기살균기에서 분무되는 증기를 각각 1, 3시간 동안 분무한 결과, Staphylococcus aureus는 각각 24.01, 57.34%, Bacillus subtilis는 10.89, 57.76%, Escherichia coli는 30.79, 36.59%, Pseudomonas aeruginosa는 34.80, 49.51%, Salmonella typhimurium는 39.40, 73.98%, 진균인 Candida albicans는 36.59, 53.05%의 높은 항균활성을 보여 염촉매 전기분해 공기살균기의 살균효능이 모든 종류의 시험균주에서 시간 의존적인 항균활성을 보였다. 공기살균기의 분무액을 0.1, 0.3, 1.0%의 농도로 처리하고 세포 생존율을 측정한 결과, 1.0%의 농도에서도 BEAS-2B 세포는 93.88%, HaCaT 세포는 97.01%, THP-1 세포는 86.56%로 관찰되어 인체 정상 세포주에서는 유의적인 세포독성을 나타내지 않았다. 또한 분무액을 1.0%의 농도로 처리하고 현미경으로 관찰한 세포주의 형태학적 변화, PCR을 이용한 세포사멸관련 유전자(Bcl-2, Bax)의 발현 분석, FACS를 이용한 세포 내 ROS의 생성 변화 등에서 분무액을 처리하지 않은 대조군과 비교하였을 때 유의적인 변화가 없었다. 따라서 시험균주에 대한 항균활성, 3가지의 인간 세포주에 대한 세포독성, 세포의 형태적 변화, 유독한 반응성 산소(ROS) 생성, 세포사멸관련 유전자의 발현 등에서 유의미한 변화가 확인되지 않아 공기살균기의 살균 효능과 사용상 안전성을 확인할 수 있었다. 최종적으로 다중이용시설에서의 공기살균기의 효능을 조사하기 위하여 밀폐된 실내에서 공기살균기를 20시간 동안 가동한 후, 공기 중의 낙하균을 포집하여 배양한 결과, 총세균은 89.4%, 대장균과 진균은 100.0% 제거되는 것을 확인하였다. 결론적으로 개발된 염촉매 전기분해 공기살균기는 인체에 대한 독성이 없으면서 실내 오염원인 미생물들을 효과적으로 제거할 수 있음을 확인하였다.
Supercritical carbon dioxide ($SCO_2$) extraction was used to recover concentrated proteins and to remove lipids and odor causing compounds from anchovy. Engraulis japonicus $SCO_2$ was used as the solvent for extraction, which was performed in a semi-batch flow reactor. The experimental conditions used were pressure, 15-25 MPa; temperature, $40-60^{\circ}C$ and sample size, 500 ${\mu}m$. The proteins obtained under these conditions performed well in a sensory evaluation; moreover, effective lipids and odor removal was achieved. The stability and characteristics of the proteins recovered with different solvents were also evaluated. The samples were sterilized by processing with $SCO_2$. Escherichia coli was not detected after storage for several days. The sensory characteristics were found to be superior to those of a sample produced by hexane extraction. Thus, the protein concentrate was obtained at $60^{\circ}C$ and 25 MPa was deemed valuable as a foodstuff.
The gene product of dctD (DctD) activates transcription from the dctA promoter regulatory region by the $\sigma^{54}$ -holoenzyme form ofRNA polymerase ($E\sigma^{54}$ ) in Rhizobium meliloti and R. leguminosarum. The Escherichia coli integration host factor (IHF) stimulated DctD-mediated activation from the dctA promoter regulatory region of R. leguminosarum but not R. meliloti. In the absence of UAS, IHF inhibited DctD-mediated activation from both of these promoter regulatory regions. IHF also inhibited activation from R. leguminosarum dctA by nitrogen regulatory protein C (NtrC), another activator of $E\sigma^{54}$ but not by one which lacks a specific binding site in this promoter regulatory region. IHF, however, stimulated NtrC-mediated activation from the R. meliloti dctA promoter. Upon removal of the UAS, IHF inhibited NtrC-mediated transcription activation from the R. meliloti dctA promoter regulatory region. These data suggest that IHF likely faciliates productive contacts between the activators NtrC or DctD and $E\sigma^{54}$ to stimulate activation from dctA promoter.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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