Objectives : The purpose of this study is to investigate the biological Effect of multi-herbal drug 'KOCO-P1' on mouse macrophage Raw 264.7 cells. Methods : Multi-herbal drug 'KOCO-P1' was composed of Ginseng Radix, Astragali Radix, Polygonati Rhizoma, Liriopis Tuber, and Scrophulariae Radix. Cytotoxicity and cytoprotective activity of K0C0-P1 was verificated by MTT assay. And antioxidative effect of K0C0-P1 against EtOH, Nicotine was inspected by Hydroperoxide assay. Results : K0C0-P1 showed no cytotoxicity on RAW 264.7 cells for 24, 48, 72 hours. KOCO-P1 at 200, 100, and 50 ug/mL reduced the production of H202 in Raw 264.7 cells by EtOH. KOCO-P1 at 50 ug/mL reduced the production of H202 in Raw 264.7 cells by Nicotine. Conclusions : KOCO-P1 could be supposed to have antioxidative effect on macrophage with no cytotoxicity.
본 연구에서는 범부채 뿌리 50% 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물을 제조하고 이들의 항산화 및 항균 활성, 세포 보호 효능을 평가하였다. 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 자유라디칼 소거 활성($FSC_{50}$) 측정 결과, 50% 에탄올 추출물은 $621.5{\mu}g/mL$, 에틸아세테이트 분획물은 $253.0{\mu}g/mL$이었다. Luminol 발광법을 이용한 총 항산화능($OSC_{50}$)은 추출물과 분획물에서 각각 13.6 및 $3.0{\mu}g/mL$이었다. 항균 활성 측정에서 Staphylococcus aureus 및 Candida albicans에 대한 에틸아세테이트 분획물의 최소저해농도(minimum inhibitory concentration, MIC)는 각각 156 및 $1,250{\mu}g/mL$으로 나타났으며, 화장품에 사용하는 기존 방부제인 methyl paraben보다 유사하거나 더 높은 활성을 보여주었다. $^1O_2$로 유도된 세포 손상에 대한 보호 효과(${\tau}_{50}$)에서 50% 에탄올 추출물은 $4{\sim}64{\mu}g/mL$ 농도 범위에서 농도 의존적으로 세포 보호 활성을 나타냈다. $16{\mu}g/mL$ 농도에서 50% 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 분획물 및 (+)-${\alpha}$-tocopherol의 ${\tau}_{50}$은 각각 36.4, 45.0 및 45.8 min이었으며, 에틸아세테이트 분획물은 $^1O_2$로 유도된 세포 손상에서 (+)-${\alpha}$-tocopherol과 유사한 세포 보호 활성을 나타냈다. UVB로 유도된 HaCaT 세포 손상에서 에틸아세테이트 분획물은 $8{\mu}g/mL$에서 세포 내 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 최대 45.9%까지 감소시켰다. 과산화수소로 유도된 HaCaT 세포 손상에서도 에틸아세테이트 분획물은 $0.5{\sim}8.0{\mu}g/mL$에서 세포 생존율을 유의적으로 증가시켰다. 범부채 뿌리 에틸아세테이트 분획물의 성분 분석 결과, irisflorentin, irigenin, tectorigenin, resveratrol, iridin 및 tectoridin 등의 플라보노이드 및 폴리페놀 성분이 확인되었다. 결론적으로 범부채 뿌리 추출물 및 분획물은 화장품의 천연 항산화 및 항균 소재로서 적용 가능성이 있음을 시사한다.
A strong antioxidant activity, which was measured by the radical scavenging effect on 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) radical, was detected in the methanol extract of Salvia miltiorrhiza Bunge (Labiatae). By activity-directed fractionation, compounds 1 and 2 were isolated as antioxidant principles of S. miltiorrhiza. Compounds 1 and 2 were identified as dimethyl lithospermate and 3-(3, 4-dihydroxyphenyl)lactamide, respectively, on the basis of spectral data. The radical scavenging effect of compounds 1 and 2 on DPPH radical exceeded that of L-ascorbic acid which is a well known antioxidant. These two compounds also showed prominent inhibitory activity against free radical generation in dichlorofluorescein (DCF) method and cytoprotective effect against t-BHP in cultured liver cell.
To test the cytoprotective effect of sophorae radix (SR) against hydrogen peroxide (H₂O₂)-induced cytotoxicity, we investigated the cell viability using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) assay in the presence of methylene chloride, n-butanol, ethyl acetate and water soluble fraction of SR water extracts in H9c2 cells. These results were obtained as followed; H₂O₂ decreased the cell viability of H9c2 cells in a dose dependent manner. Cells pretreated with SR water extracts were protected the H₂O₂-induced decrease of viability in H9c2 cells. Among organic solvents fractions of SR water extracts, ethyl acetate soluble fractions of SR protected the decrease of viability induced by H₂O₂ in H9c2 cells. These results suggest that ethyl acetate soluble fractions of SR water extracts is effective in the prevention of H₂O₂-induced cytotoxicity.
To test the cytoprotective effect of sophorae radix (SR) against hydrogen peroxide (H₂O₂)-induced cytotoxicity, we investigated the cell viability using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) assay in the presence of ethyl acetate subfractions of SR water extracts In H9c2 cells. And to clarify the cytoprotective mechanism of SR extracts, we evaluated the cellular glutathione (GSH) contents in the presence of subfraction 1, 2, 3, and 4 of SR ethyl acetate soluble fractions. Among 1 -12 subfractions of SR ethyl acetate soluble fractions, 1, 2, 3 and 4 subfractions have an efficacy inhibiting the cytotoxicity induced by H₂O₂ in H9c2 cells. Also, the protective effects of 1, 2, 3 and 4 subfractions of SR ethyl acetate soluble fractions resulted from the anti-oxidant effects. These results suggest that ethyl acetate soluble fractions of SR water extracts is effective in the prevention of H₂O₂-induced cytotoxicity and 1, 2, 3 and 4 subfraction of ethyl acetate soluble fractions possess the anti-oxidant component.
We have previously shown that paraquat (PQ)-induced oxidative stress causes dramatic damage in various human cell lines. Naringenin (NG) is an active flavanone, which has been reported to have beneficial bioactivities, including antioxidative, anti-inflammatory, and antitumorigenic activities, with a relatively low toxicity to normal cells. In this study, we intended to assess the cytoprotective effect of NG against PQ-induced toxicity in the human bronchial epithelial BEAS-2B cell line. Co-treatment with NG in PQ-treated BEAS-2B cells can reduce PQ-induced cellular toxicity. NG can also decrease the generation of intracellular ROS caused by PQ treatment. We also observed that treatment with NG in PQ-exposed BEAS-2B cells can significantly induce the expression of antioxidant-related genes, including GPX2, GPX3, GPX5, and GPX7. NG co-treatment can also activate the NRF2 transcription factor and promote its nuclear translocation. In addition, NG co-treatment can induce the expression of NRF2-downstream target genes such as that of heme oxygenase-1 (HO-1) and NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1 (NQO1). A small interfering RNA study revealed that the knockdown of NRF2 can abrogate NG-mediated protection of the cells from PQ-induced cellular toxicity. We propose that NG effectively alleviates PQ-induced cytotoxicity in human bronchial epithelial BEAS-2B cells through the NRF2-regulated antioxidant defense pathway, and NG might be a good therapeutic candidate molecule in oxidative stress-related diseases.
Objectives : The purpose of this study was to observe the effects of Polygalae Radix(PR) on 4-HNE-induced apoptosis in PC-12 cell. Methods : A MTT assay was conducted to observe the cytotoxicity of Polygalae Radix on the cell viability and the cytoprotective effect of Polygalae Radix against 4-HNE that causes oxidative stress-induced cytotoxicity, and then a western blot was conducted to observe the expression of $TNF-{\alpha}$, caspase-3, Bax and Bcl-2 protein that are important factors involved with apoptosis signaling pathway. Results : The Polygalae Radix water extract $25{\mu}g$, $50{\mu}g$, $100{\mu}g$ and $200{\mu}g/mL$ had no cytotoxicity on the PC-12 cell. The Polygalae Radix water extract $25{\mu}g$, $50{\mu}g$ and $100{\mu}g/mL$ had the cytoprotective effect against 4-HNE that causes cytotoxicity on the PC-12 cell. The Polygalae Radix water extract $50{\mu}g/mL$ significantly suppressed the increase in $TNF-{\alpha}$ protein expression in PC-12 cell. The Polygalae Radix water extract $25{\mu}g$ and $50{\mu}g/mL$ significantly suppressed the increase in caspase-3 protein expression in PC-12 cell. The Polygalae Radix water extract $25{\mu}g$, $50{\mu}g$ and $100{\mu}g/mL$ suppressed the increase in Bax protein expression in PC-12 cell but had no significance. The Polygalae Radix water extract $25{\mu}g$ and $100{\mu}g/mL$ significantly prevented the decrease in Bcl-2 protein expression in PC-12 cell, Conclusions : These results suggest that the Polygalae Radix water extract is effective in inhibiting apoptosis.
Objectives : In order to confirm whether extracts of different parts of Zostera marina (ZM), a marine flowering plant, can be used as cosmetic ingredients, this study evaluated their cytotoxicity and cytoprotective effects against ultraviolet B (UVB). Inflammatory responses induced by UV stimuli are also associated with the aging of the skin.Methods : We investigated the effects of ZM extracts on cells through the water soluble tetrazolium salt-1(WST-1) assay for cell viability. In order to investigate the anti-inflammatory effects, we evaluated the suppression of Cyclooxygenase-2 (COX-2) expression by ZM extracts in HaCaT cells with UVB-induced damages, and also evaluated the production of Prostaglandin E2 (PGE2) in RAW 264.7 cells with LPS-induced damages.Results : High cell viabilities above 90% were observed in all types of ZM extracts, except for whole ZM extract at 0.5 mg/ml; in keratinocytes with UVB-induced damages, the cell viabilities were above 80% when treated with all types of ZM extracts. We confirmed their anti-inflammatory effects by investigating the suppression of inflammatory mediators. In keratinocytes with UVB-induced damages, COX-2 expression decreased in the experimental group treated with ZM extract. Similarly, in RAW 264.7 cells where inflammation was induced with LPS, the biosynthesis of PGE2 was inhibited.Conclusion : These results suggest that ethanol extracts from Zostera marina may have value as the potential anti-inflammatory medicinal plant. Also based on the abovementioned results, ZM extract protects skin cells from UV-induced damages, and thus can be used in topically applied products for skin protection.
Objectives: Accumulation of cellular reactive oxygen species (ROS) leads to oxidative stress. Increased production of ROS, such as superoxide anion, or a deficiency in their clearance by antioxidant defences, mediates cellular pathology. Grewia Spp fruits are a source of bioactive compounds and have notable antioxidant activity. Although the antioxidant capacity of Grewia Spp has been studied, there is very limited evidence that links the antioxidant activities of Grewia bicolor and Grewia flava to the inhibition of free radical formation associated with damage in biological systems. Methods: This study evaluated the protective effects of Grewia bicolor and Grewia flava extracts against free radical-induced oxidative stress and the resulting cytotoxicity effect using HeLa cells. Antioxidant properties determined using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and total phenolic content (TPC) assays showed significantly higher (p < 0.05) antioxidant activity in Grewia flava (ethanol extract) than Grewia flava (water extract) and Grewia bicolor (ethanol and water extracts). Results: Using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium bromide or MTT assay, cytotoxicity results showed that extracts of Grewia bicolor and Grewia flava were less toxic to HeLa cells at tested concentrations compared to the untreated control. This confirmed the low toxicity of these edible fruits at the tested concentrations in HeLa cells. Furthermore, hydrogen peroxide (H2O2)-induced cell loss was effectively reduced by pre-incubating HeLa cells with Grewia bicolor and Grewia flava extracts, with Grewia flava (ethanol extract) revealing better protection. Conclusion: The effect was speculated to be associated with the higher antioxidant activity of Grewia flava (ethanol extract). Additional studies will warrant confirmation of the mechanism of action of such effects.
Objectives : Native to East Asia, Japan, and Korea, Cinnamomum japonicum Siebold (CJ) is renowned for its aromatic leaves and bark. We previously assessed the antioxidant activity of fractionated CJ branches (CJB:70% EtOH extract), including hexane (CJB1), chloroform (CJB2), ethyl acetate (CJB3), butanol (CJB4), and water (CJB5). Our findings revealed that CJB3 exhibited the highest antioxidant activity. Here, we aimed to investigate whether CJB3 possesses cytoprotective effects and induces the activity of antioxidant enzymes in hepatocytes. Methods : As HepG2 cells were the first to exhibit the key characteristics of hepatocytes, we investigated the hepatoprotective effects of CJB3 on HepG2 cells. Results : Before conducting the cell experiment, we checked that CJB3, up to a concentration of 100 ㎍/mL, did not exhibit cytotoxicity toward HepG2 cells. ROS production increased because of t-BHP treatment decreased in a concentration-dependent manner upon CJB3 treatment. We confirmed that CJB3 inhibited t-BHP-induced cell death. CJB3 was found to reverse the expression of proteins associated with t-BHP-induced apoptosis. We also observed that CJB3 induced Nrf2 phosphorylation and the nuclear translocation of Nrf2. And, CJB3 treatment caused a time-dependent enhancement of GCL and NQO1 protein expression. We further confirmed that CJB3 increased the expression of Nrf2 target genes, and this effect was associated with the activation of JNK, p38, and AMPK. Conclusion : CJB3 prevents t-BHP-induced oxidative stress and apoptosis and enhances the expression of Nrf2 target genes via JNK, p38, and AMPK activation. These results suggest that CJB3 is a promising candidate for the treatment of liver diseases.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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